D. pH10～12 E. pH12以上
8. 蛋白质的别构效应：
①总是和蛋白质的四级结构紧密联系的； ②和蛋白质的四级结构无关；
③有时和蛋白质的四级结构有关，有时无关。
9. 蛋白质磷酸化时，需要：
①蛋白质水解酶； ②蛋白质激酶； ③磷酸化酶。
10. 蛋白质是两性介质，当蛋白质处于等电点时，其：
①溶解度最大； ②溶解度最小； ③和溶解度无关。 11. 针对配基的生物学特异性的蛋白质分离方法，是：
①滤胶过滤； ②离子交换层析； ③亲和层析。
12. 19.Western印迹是一种研究什么转移的鉴定技术：
① DNA； ②RNA； ③蛋白质； ④糖类。
13. 胰岛素原是由一条“连接肽”通过碱性氨基酸残基连接其它二条链的Ｃ端和Ｎ端，这一
条“连接肽”称为：
①Ａ链； ②Ｂ链； ③Ｃ肽。
14. 为稳定原胶原三股螺旋结构，三联体的每第三个氨基酸的位置必须是：
①丙氨酸； ②谷氨酸； ③甘氨酸。 15. 分离含有二硫键的肽段可以用：
①SDS—PAGE电泳； ②对角线电泳； ③琼脂糖电泳。
16. SDS-聚丙烯酰胺电泳完全是根据蛋白质的（）来分离不同蛋白质的。
A、分子量 B、电荷 C、疏水性 D、沉淀速率 17. 大多数蛋白质在处于等电点时其：
溶解度最大 B、生物功能最强 C、易从溶液中析出 D、分子表面没有电荷分布 18. 下列哪种层析最常用于分析蛋白质纯度：
A、离子交换层析 B、纸层析 C、凝胶排阻层析 D、疏水层析 19. 蛋白质一级结构的测定方法有哪些？
直接法 B、间接法 C、质谱法 D、连接法
20. 一个谷氨酸溶液，用5ml的1M的NaOH来滴定，溶液中的pH从1.0上升到7.0，下列数
据中哪一个接近于该溶液中所含谷氨酸的毫摩尔数？
A、1.5 B、3.0 C、6.0 D、12
21. 每分子血红蛋白可结合氧的分子数是多少？
A、1 B、2 C、3 D、4
22. 免疫球蛋白是一种什么蛋白？
A、 糖蛋白 B、脂蛋白 C、铁蛋白 D、核蛋白
23. 煤气中毒主要是因为煤气中的CO起了什么作用？
B、 抑制巯基酶的活性，使巯基酶失活
C、 抑制了胆碱酯酶活性，使乙酰胆碱堆积，引起神经中毒的症状。
D、 和血红蛋白结合后，血红蛋白失去了运输氧的功能，使患者因缺氧而死。 E、 抑制了体内所有酶的活性，使代谢反应不能正常运行。
24. 每个蛋白质分子必定具有的结构是什么？
A、α-螺旋 B、β-折叠 C、三级结构 D、四级结构 25. 应用下列哪些方法可测定蛋白质分子量？
A、密度梯度离心 B、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 C、凝胶排阻层析 D、亲和层析
26. 对一个富含HiS残基的蛋白质在使用离子交换层析时，应优先考虑的是严格控制什么？ A、盐浓度 B、洗脱液的pH C、NaCl梯度 D、蛋白质样品上柱时的浓度 27. 蛋白质在处于等电点时的溶解度
A.最小; B.最大; C.与等电点没有关系.
28. 在接近中性pH条件下，即可为氢离子受体，也可为氢离子供体的基团是( )
A． His-咪唑基 ； B，Cys-巯基；C，Lys-ε-氨基； D，Arg-胍基
29. 英国科学家完成牛胰岛素的氨基酸序列测定工作和中国科学家完成 牛胰岛素的人工合
成工作分别在
A.20世纪40年代和20世纪50年代;B.20世纪50年代和20世纪60年代 C.20世纪50年代和20世纪50年代;D.20世纪60年代和20世纪70年代
四、问答题
1. .假定有1mmol的五肽，酸水解生成2mmol谷氨酸，1mmol赖氨酸，没有能够定量回收
其它氨基酸。将原来的五肽用胰蛋白酶水解成两个肽段，在pH7.0进行电泳，一个肽段移向阳极，另一个则移向阴极。用FDNB处理胰蛋白酶水解的一个肽段，再用酸水解，生成DNP-谷氨酸。用胰凝乳蛋白酶处理原来五肽生成两个肽段及游离谷氨酸。试从上述实验结果写出该五肽的氨基酸顺序。
2. 指出从分子排组层析柱上洗脱下列蛋白质时的洗脱顺序。为什么？分离蛋白质的范围是
5000到400,000。
肌红蛋白（分子量16,900）；过氧化氢酶（247,500）；细胞色素C（13,370）；肌球蛋白（500,000）；胰凝乳蛋白酶原（23,240）；血清清蛋白（68,500）。
3. 蛋白质化学测序法的原则和程序可归纳为哪5个阶段？（仅需写出阶段名称） 4. 当不同分子大小的蛋白质混合物流经凝胶柱层析时，小分子物质因体积小最先被洗脱出
来。
5. 列出蛋白质二级结构和超二级结构的各三种基本类型。
6. 根据氨基酸通式的R基团的极性性质，20种常见的氨基酸可分成哪四类？ 7. 谷胱甘肽
8. 简述四种从混合物中分离制备一种蛋白质的技术方法及原理。 9. 蛋白质的三级结构是怎样形成的？对于一个蛋白质，如果将其中一个氨基酸换成另外一
种氨基酸，会影响生物学活性吗？
10. 氨基酸残基的平均分子量为120。某一蛋白质的多肽链在一些区段为α-螺旋构象，在
另一些区段为β-折叠构象。该蛋白质的分子量240000，多肽链外形的长度为5.06×10-5cm。请计算α-螺旋构象占分子的百分之多少？
11. 一个未知的多肽氨基酸组成为：Asp1、Ser1、Gly1、Ala1、Met1、Phe1和Lys2。做了
一系列分析结果如下：
（1） 用DNFB与它反应，再酸水解后得到DNP-Ala。
（2） 用胰凝乳蛋白酶消化后，从产物中分出一个纯四肽，其组成为Asp1、
Gly1、Lys1、Met1。此四肽用DNFB反应后，降解为DNP-Gly。
（3） 用胰蛋白酶消化八肽后又可得到组成成分分别为Lys1、Ala1、Ser1及
Phe1、Lys1、Gly1的两个三肽及一个二肽。此二肽被CNBr处理后游离出自由天冬氨酸。请列出这多肽的氨基酸排列顺序并说明之原因。
12. 两条短肽通过二硫键相连。在不进行二硫键拆封的条件下进行Edman法测序，第一个循
环得到甘氨酸的信号，第二循环得到胱氨酸和谷氨酸的信号，第三循环得到亮氨酸苯丙
氨酸的信号；用肼法确定了两个氨基酸为组氨酸和脯氨酸；将二硫键拆封后测定氨基酸的组成，得到其中的一条为——[谷氨酸，半胱氨酸，亮氨酸，脯氨酸]，并在280nm处有芳香族氨基酸的特征吸收，另一条肽链只有四个氨基酸，请用氨基酸的三字母法写出该短肽的结构。
13. 计算Lys-Ala- Glu-Gly- Glu 的等电点，已知Lys的α-氨基的pKa为8.95，с-氨基
的pKa为10.53，Glu α-羧基的pKa为2.19，γ-羧基的pKa为4.25。 14. 以血红蛋白为例说明蛋白质四级结构的含义，比较血红蛋白与肌红蛋白结构和功能的异
同。
四、酶学 （8-10）
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酶的概念、结构、作用特点、国际分类、命名 酶的作用机理
影响酶促反应的因素（米氏方程的推导） 酶的提纯与活力鉴定的基本方法
酶活力概念、米氏方程以及酶活力的测定方法 溶菌酶、丝氨酸蛋白酶催化反应机制
了解抗体酶、核酶和固定化酶的基本概念和应用
1、酶：特点（高催化效率、高度的专一性、酶活性的可调节性、酶活性的不稳定性）、酶的分类和命名（氧化还原酶类EC1，转移酶类EC2，水解酶类EC3，裂解酶类EC4，异构酶类EC5，合成酶类、连接酶类EC6）
2、酶活力、酶的活力单位、酶的比活力、酶的转换数（Kcat）；
3、酶的形式：单体酶、酶原、同工酶、寡聚酶（变构酶，双功能寡聚酶-E.coli色氨酸合成酶，含有专一性非酶蛋白亚基的寡聚酶-乳糖合成酶，具有底物载体亚基的寡聚酶- E.coli色氨酸乙酰辅酶A羧化酶）、修饰酶、多酶复合体（三个或三个以上的酶）、诱导酶与结构酶、核糖酶、抗体酶；
4、酶工程：化学酶工程（天然酶、化学修饰酶、固定化酶、人工模拟酶）、生物酶工程（克隆酶、突变酶、新酶）；
5、酶的分子组成：单纯酶、结合酶、酶的辅助因子，酶的活性中心，酶活性中心的确定；
6、酶作用专一性理论：
7、酶的作用机理：降低反应活化能，中间复合物，高效性（趋近效应、定向效应，张力作用，酸碱催化作用，共价催化作用，低介电区域，金属催化）；
8、酶活性调节：酶活抑制与激活、酶原激活、调节蛋白（同功酶、激促蛋白或抑制蛋白、调节酶-钙调蛋白、抗血友病因子）、 共价修饰、别构酶（Rs、序变模型、齐变模型）； 9、酶促反应的动力学：
米氏方程：反应速度的影响因素（酶量、底物浓度、温度、pH值、离子强度、），Km的意义、Vmax、Kcat、kcat/Km的意义； 10、米氏方程双倒数作图； 11、酶的抑制作用：抑制剂； 不可逆性抑制作用：以共价键方式与酶的必需基团进行不可逆结合而使酶丧失活性，非专一性；专一性，Ks型—专一性限制，Kcat—自杀性底物；
可逆抑制剂作用：
竞争性抑制剂动力学 非竞争性抑制剂动力学 反竞争性抑制剂动力学 激活剂作用： 习题 一、判断题
1、 根据米氏方程，转换数Kcat值越大的酶反应速度越大。
2、 米氏常数Km值是一个与酶浓度无关的特征常数，但表观Km值受酶浓度的影响。 3、 对一个正协同别构酶而言，当增加正调节物浓度时，协同性减少。
4、 变构酶分子量可以用十二烷基硫酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定。 5、 在结构上与底物无关的各种代谢物有可能改变酶的Km值。 6、 如果加入足够的底物，即使存在非竞争性抑制剂，酶催化反应也能达到正常的Vmax。 7、 Km值是酶的特性常数之一，与酶的浓度、pH、离子强度等条件或因素无关。 8、 一个酶的非竞争性抑制剂不可能与底物结合在同一个部位。
9、 一个酶催化正反应和逆反应的Kcat或Km值可以不同,但Kcat/Km比值通常是相同
的.
10、 ELISA和Western印迹两种方法都是应用抗体检测抗原的实验手段. 11、 在底物的浓度达到无限大又没有任何效应剂存在的条件下，酶催化反应为零级反应 12、 抑制剂不与底物竞争酶结合部位，则不会表现为竞争性抑制。
13、 酶反应最适ｐH不仅取决于酶分子的解离情况，同时也取决于底物分子的解离情
况。
14、 酶的最适pH与酶的等电点是两个不同的概念，但两者之间有相关性，两个数值通
常比较接近或相同。 15、 对于一个酶而言，其过渡底物的类似物与底物的类似物相比较，是更有效的竞争性
抑制剂。
16、 Km值是酶的特征常数之一，与酶浓度、pH、离子强度等条件或因素无关。 17、 酶反应的专一性取决于其辅助因子的结构。 18、 酶影响它所催化反应的平衡。
19、 酶促反应的米氏常数与所催化反应的底物无关。 20、 用酶水解蛋白质不会引起水解产物的消旋。 21、 酶的比活力是酶的特征常数。
22、 Km值越大，表示酶与底物的亲和力越大。 23、 如果加入足够量的底物，即使有非竞争性抑制剂存在，酶催化的最大反应速度仍是
可以达到的。
24、 测定变构酶的分子量可以用十二烷基硫酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳。 25、 酶促反应的初速度与底物浓度无关。
26、 酶要表现其催化活性只要有活性中心就可以了。
27、 Kcat/Km表现为底物和自由酶之间第二个顺序的速度常数。 28、 酶反应的Vmax 由底物浓度决定。
二、填空题
1. pH对酶活力的影响除了过酸、过碱导致酶变性而失活外，主要是通过影响酶或底
物分子的（ ）。