和敏感细胞的结合/粘附能力；采用内吞特异性抑制剂及分子生物学手段干预特定的内吞途径，研究新型化疗纳米药物的细胞摄取机制；采用共聚焦显微镜观察及流式细胞仪实时检测新型纳米药物的入胞速度与程度，并使用荧光探针标记溶酶体、内质网、线粒体和细胞核等，实时监测新型化疗纳米药物进入细胞后的胞内分布情况，揭示新型化疗纳米药物的组成、结构和理化特性等对其进入肝癌耐药细胞和敏感细胞中的过程及胞内行为的影响及其与降低肝癌细胞耐药性之间的关系。
③ 新型化疗纳米药物对肝癌干细胞的作用研究
通过检测肝癌干细胞球囊形成率、克隆形成率、体内成瘤能力等，研究新型化疗纳米药物对肝癌干细胞自我更新及分化能力的作用；通过测定肝癌干细胞及其肝癌组织中干细胞相关基因的表达，揭示新型化疗纳米药物进入肝癌干细胞的能力对肝癌干细胞“干性”变化的影响；通过划痕试验、Matrigel transwell试验及体内研究等，揭示新型化疗纳米药物对肝癌干细胞从原发瘤解离，向周围侵润、迁移、生长繁殖和形成转移瘤等能力的影响，探讨新型化疗纳米药物通过杀伤或干扰肝癌干细胞的自我更新、分化来抑制肝癌转移与复发的效果。 ④ 新型化疗纳米药物降低肝癌细胞耐药性的体内药效学评价
构建肝癌耐药细胞的原位肝癌模型和皮下植入模型，研究新型化疗纳米药物对模型动物的体重变化、肝功能、肿瘤生长抑制情况和生存期等的影响，从动物水平上评价新型化疗纳米药物降低肝癌细胞耐药性的效果，并对现代医疗技术（超声、射频消融、介入栓塞等）与新型化疗纳米药物联用降低肝癌细胞耐药性的效果进行评价。
（3） 新型纳米药物调控肝癌免疫微环境的机制和药效学研究 ① 新型免疫治疗纳米药物清除Treg等的机制研究
将小鼠肝癌细胞系H22肿瘤细胞直接注射入BALB/c小鼠肝组织，建立BALB/c
小鼠原位肝癌模型，消化肝癌组织，采用免疫磁珠与流式细胞分离方法从肝癌组织中分选Treg等，通过检测其对CD3+ T细胞增殖的影响研究这些抑制性免疫细胞的免疫抑制功能，采用流式细胞术和免疫组化法分析Treg等的数量及在肝癌组织中的分布，探讨新型免疫治疗纳米药物对Treg等的清除作用；分别采用抗CD11c、
CD3和CD56抗体从肝癌组织中分选DC、CTL和NK细胞，通过体外培养法分析DC的抗原提呈和CTL、NK细胞对肿瘤细胞的杀伤，多色流式细胞术分析DC、CTL和NK细胞的数量、流式细胞术检测CD80、CD86和MHCII表达以分析DC的成熟，检测IFN-γ活性来分析CTL、NK细胞功能，探讨抑制性免疫细胞的清除对肿瘤免疫细胞的影响；采用ELISA法检测TGF-β、IL-10、VEGF、IL-12、IFN-γ和IL-2等的含量，荧光定量RT-PCR及免疫组化法检测这些免疫细胞因子的表达及在肝癌组织中的分布，探讨抑制性免疫细胞的清除对免疫细胞因子的影响。另外，观察荷瘤小鼠存活时间、肿瘤组织大小，结合肿瘤组织病理学分析手段，评价新型免疫治疗纳米药物的治疗效果。
② 新型免疫治疗纳米药物中和免疫抑制因子的机制研究
建立BALB/c小鼠原位肝癌模型，分别采用ELISA法、荧光定量RT-PCR及免疫组化法分析TGF-β等的含量、表达及在肝癌组织中的分布，探讨新型免疫治疗纳米药物对这些免疫抑制因子的中和作用；采用流式细胞术和免疫组化分析Treg等的数量及其在肝癌组织中的分布，探讨免疫抑制因子的中和对抑制性免疫细胞的影响；采用多色流式细胞术分析DC、CTL和NK细胞的数量、DC的成熟及CTL、NK细胞功能，探讨免疫抑制因子的中和对肿瘤免疫细胞的影响；经中和免疫抑制因子TGF-β等的免疫治疗纳米药物处理后，观察小鼠存活时间、肿瘤组织大小，结合肿瘤组织病理学分析手段，研究新型免疫治疗纳米药物对肝癌治疗效果的影响。 ③ 新型免疫治疗纳米药物和化疗纳米药物协同增效的机制研究
建立BALB/c小鼠原位肝癌模型，采用上述针对抑制性免疫细胞和免疫抑制因子的新型免疫治疗纳米药物与化疗纳米药物序贯联合治疗，研究其对肝癌的协同增效作用。采用流式细胞术和免疫组化法分析Treg等的数量及其在