微生物技术及应用竞赛项目操作规范（Ⅱ）
液体培养基的制备
参赛选手在规定的20min内，配备一定体积（200~500ml，由裁判组于比赛当天确定）液体培养基（培养基范围：LB培养基和沙氏葡萄糖培养基，竞赛现场将提供配方），均分于250ml的三角瓶中，并用全自动高压蒸汽灭菌锅完成灭菌准备操作。
LB培养基配方：Tryptone(胰蛋白胨)：1%， Yeast Extract(酵母提取物)：0.5%, NaCl(氯化钠)：1% ，pH=7.0。
沙氏葡萄糖培养基配方：Tryptone(胰蛋白胨)：1%， Dextrose（葡萄糖) ：4%， pH=5.4。
具体操作规范详见下表。 项目 考核内容 计算 操作规范 根据所提供的培养基配方计算各组分应称量的量，并记录。 调节电子天平水平泡至中间位置。 天平的准备 称量前应先将电子天平调零。 称量 称量操作 称量纸的边角应对折防止培养基撒出。 称取不同的培养基成分应使用不同的药匙，不同的称量纸，防止交叉污染。 称量过程应减少药品浪费。 药品称量完成后应盖好瓶盖并放回原位，标签朝外。 天平使用后应关机、清扫天平盘。 将培养基各种成分按配方称量好后，及时放入烧杯中，防止部分培养基受潮粘在称量纸上。 溶化 培养基溶化 用量筒量取适当体积的蒸馏水，加入到烧杯中。 培养基在溶解过程中需不断搅拌，溶解至培养基澄清无沉淀，表明培养基溶解彻底。 57
用玻璃棒蘸取少量培养基，在试纸一端点一下即可，根据酸碱度利用1mol/L 调酸 碱度 pH的测定 NaOH和1mol/L HCl进行调节pH。 调pH值时，边滴加试剂边搅拌，并随时用pH试纸测量,避免pH回调。 将培养基平均分装入2~5个三角瓶中，分装过程中注意操作防止培养基洒出。 分装 分装和包扎 包扎 本实验提供250ml的三角瓶用于分装培养基，一般装液量不超过三角瓶装量1/2即可。 分装时应避免培养基粘附瓶口，以免引起污染。 分装完成后包好封口膜后，外面包牛皮纸一层或旧报纸二层，用绳正确捆扎，不打死结。 包扎完成后可在牛皮纸或报纸上面标注培养基名称、制备日期及制备人编号，并贴上灭菌指示带便于灭菌结束后判断培养基是否灭菌完全。 接通电源，打开开关，向锅内加入适量的水，保证水位达到标准。加水选择去离子水或蒸馏水，防止水垢产生，使锅体不容易被腐蚀。 在网框中放入培养基，将网框提入灭菌锅内，检查密封圈并加盖，采用对灭菌 灭菌锅的 操作 设置灭菌温度及时间。 检查上排气阀应处于开启状态，下排气阀和安全阀应处于关闭状态，准备灭菌。因时间限制，本实验将这一步作为实验完成标志。 实验后整理 实验过程应及时清理废弃物、各药品归位以及实验台的整理等。 文明 操作 器皿破损 器皿破损主要指操作过程出现的烧杯、三角瓶等器皿的损坏情况。 角式均匀拧紧锅盖上的螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。
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选手编号：
液体培养基制备计算结果记录（1） 培养基配方 应称取量 Tryptone(胰蛋白胨) 1% Dextrose（葡萄糖) 4% 蒸馏水 瓶数 pH=5.4
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选手编号： 液体培养基制备计算结果记录（2） 培养基配方 应称取量 Tryptone(胰蛋白胨) 1% Yeast Extract(酵母提取物) 0.5% NaCl(氯化钠) 1% 蒸馏水 瓶数 pH=7.0
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