答:(2)两基因距离远时,共转化的频率低于每个基因单独转化的频率
(2)两个DNA片断同时与受体发生重组的概率很低。
16.在普遍性转导中,供体大肠杆菌细胞的基因型是trpC+pyrF- trpA- ,受体细胞的基因型是trpC- pyrF+trpA+。由P1噬菌体媒介转导,对trpC+进行选择,用选择的细胞进一步检查其他基因的转导情况,得到以下的结果:
试问:
(1) 这三个基因的次序是什么?
(2) trpC和pyrF以及trpC和trpA 的合转导频率是多少? (3) 假定P1染色体长为10μ,这些基因之间的物理图距是多少?
解:由转导介导的基因重组是单方向的,所以3个连锁基因的重组只产生了4种类型,其中trpC+pyrF- trpA-是亲本型,其余三种为重组型。由于trpC+pyrF- trpA+比例最低,因此(1)trpA应该位于其它两者之间。 (2)trpC与pyrF合转导的频率为:
trpC?pyrF?trpA??trpC?pyrF?trpA?274?2??45.9% ????????????601trpCpyrFtrpA?trpCpyrFtrpA?trpCpyrFtrpA?trpCpyrFtrpAtrpC与trpA合转导频率为:
trpC?pyrF?trpA??trpC?pyrF?trpA?274?279??92.0%(3)由????????????601trpCpyrFtrpA?trpCpyrFtrpA?trpCpyrFtrpA?trpCpyrFtrpA于转导DNA片断大小与噬菌体染色体大小相近,所以转导DNA片断的平均长度L=10μm 合转导频率X1=45.9%;X2=92.0% 根据公式物理距离:d
?L(1?3X)
d1?L(1?3X1)?10(1?345.9%)?2.29μm d2?L(1?3X2)?10(1?392%)?0.27μm
17.大肠杆菌Hfr gal+ lac+(A)与F- gal- lac- (B)杂交,A向B转移gal+比较早而且频率高,但是转移lac+迟而且效率低。菌株B的gal+重组体仍旧是F- 。从菌株A可以分离出一个变体叫做菌株C,菌株C向B转移lac+早而且频率高,但不转移gal+。在C×B的杂交中,B菌株的lac+重组体一般是F+。问菌株C的性质是什么?
答:由于C×B可以发生基因重组,故C只能是F’或者Hfr,题中指出重组体是F+,因为一般来说Hfr很难把整条染色体转移到受体中,因此不能将完整的F因子转移到受体中,所以只能是F’菌株。由于C只转移lac不转移gal,所以该F’因子包含了lac基因及其附近的染色体片断。
18.在大肠杆菌中发现了一个带有麦芽糖酶基因(mal)的F′因子。将F- mal+引入F-mal-菌株。这样所产生的细胞多数能转移F′mal+到F-细胞中,偶然有些细胞可以从mal- 基因开始把整个细菌染色体转移到F- 中。这些细胞可分为两类:(a)转移mal+很早,mal- 很迟(b)转移mal- 很早,mal+很迟。
画出F′因子与染色体相互作用的图,表明(a)型细胞最大的可能是如何产生的,(b)型细胞又是如何产生的。 答:
`
(a)型的产生 (b)型的产生
第八章 基因的表达与调控(练习)
1. 经典遗传学和分子遗传学关于基因的概念有何不同?
Mal+ Mal-
Mal+ Mal-
2. 有一个双突变杂合二倍体,其基因型是,如果有互补作用,表示什么?如果无互补作用,表示什么?
3. 用T4噬菌体一个特殊基因区的不同突变体研究互补作用,获得下列资料。试根据这个资料判断,本区应有几个顺反子?
4. 举例说明基因的微细结构是如何建立的。 5. 举例说明基因是如何控制遗传性状表达的。 6. 试说明正调控与负调控的区别。
7. 假设R基因编码的蛋白质,是S基因转录的负调控子。试问①在R突变体中S基因是否转录?②如果R基因产物是S基因转
录的正调控子,结果又有什么不同? 8. 试述乳糖操纵元模型。
9. 指出下列每一种部分二倍体①是否合成β-半乳糖苷酶②是诱导型还是组成型?(斜线左侧是质粒基因型,右侧是染色体基因
型)
a) lacZlacY- /lacZ- lacY
C
+
+
+
C
+
+
-
b) lacOlacZ- lacY/lacZlacY- c) lacP- lacZ/lacOlacZ- d) lacIlacP- lacZ/lacI- lacZ 10. 试述色氨酸操纵元和阿拉伯操纵元模型。 11. 举例说明阻遏物与无辅基阻遏物的区别。 12. 说明下例每种酵母菌单倍体细胞的交配型表型。
a) 一个基因型为MATa MATα交配型基因的重复突变体。 b) 一个MATa细胞中HMLα盒的缺失突变体。 13. 举例说明激素对基因表达的调控作用。
+
+
+
第八章 基因的表达与调控(参考答案)
1、 (P178-179)
答:具有染色体的主要特性,能自我复制,有相对的稳定性,在有丝分裂和减数分裂中有规律的进行分配;基因在染色体上占有一定位置(位点),并且是交换的最小单位,即在重组时不能再分隔的单位;基因是以一个整体进行突变的,故它又是一个突变单位;基因是一个功能单位,它控制着正在发育有机体的某一个或某些性状,如红花、白花等。可以把重组单位和突变单位统称为结构单位。这样,基因既是一个结构单位,又是一个功能单位。∴ 经典遗传学认为:基因是一个最小的单位,不能分割。按照现代遗传学的概念,重组、突变、功能这些单位应该是重组子 (recon)——交换的最小的单位。一个交换子可只包含一对核苷酸; 突变子(muton)——产生突变的最小单位。可以小到只是一个核苷酸;顺反子(作用子)(cistron)——起作用的单位,基本上符合通常指的基因。一个作用子所包括的一段DNA与一个多肽链的合成相对应。结构单位的基因(过去)——大量突变子/重组子(现在)基因是最小的结构单位(过去)——已不成立 基因是一个功能单位(过去)——仍然正确基因是:可转录一条完整的RNA分子,或编码一条多肽链;功能上被顺反测验(cis-trans test)或互补测验(complementary test)所规定。分子遗传学保留了功能单位的解释,而抛弃了最小结构单位的说法。 2、答:有互补作用----ab非等位, 为两个顺反子
无互补作用--- -ab等位,为一个顺反子
3、 由于1与356没有互补作用,所以属于同一顺反子,与2和4都有互补作用,属于不同的顺反子。由于2和4没有互补作用,属于同一个顺反子,所以本区有两个顺反子:1、3、5、6 和2、4
7、 答:(1)由于是负控制,阻遏蛋白(或者复合物)与DNA的接合使原本转录的基因停止。所以R发生突变变成R使得阻遏蛋白不能表达或者构型发生变化,不能与DNA结合,S基因转录。
(2)与负控制相反,正控制子与DNA结合则启动相关基因的表达,R不能产生正常结构的蛋白质(激活子)不能与DNA结合,不能启动相关基因的表达,所以S基因不转录。
9、答:lacZ lacY为结构基因,lacO为顺式作用元件,lacI 为反式作用作用元件。LacP为启动子。
根据乳糖操纵子模型:
(1) 由于没有I和O的信息难以分析,但是如果两者默认为均正常,则可以产生β-半乳糖苷酶,可诱导型。 (2) O发生突变所以组成性表达Y,假定默认F’的IO+能够合成Z,所以可以β-半乳糖苷酶,由于质粒上的Z受I
+
-
-
调控,所以属于可诱导型。
(3) 由于染色体上启动子突变,不能与RNA聚合酶结合,所以不能转录Z,而F’虽然O发生突变,可以组成性表达相
关基因,但是Z基因发生了突变,所以不能表达β-半乳糖苷酶。
(4) 由于染色体上启动子突变,不能与RNA聚合酶结合,所以不能转录Z,F’虽然I发生突变,但是由于I是反式作
用元件,染色体上I基因的产物可以作为阻遏物调控F’上Z的表达。所以可以诱导性表达β-半乳糖苷酶。
第九章 基因工程和基因组学(练习)
1. 什么是遗传工程?它在理论上和实践上有什么意义? 2. 简述基因工程的施工步骤。
3. 说明在DNA克隆中,以下材料起什么作用。
A、载体; B、限制性核酸内切酶; C、连接酶;D、宿主细胞;E、氯化钠
4. 有一个带有氨苄青霉素和四环素抗性的质粒,在其四环素抗性基因内有一个该质粒唯一的EcoRI酶切位点,今欲用 EcoRI
位点克隆果蝇DNA,构建一个基因库,连接的产物转化大肠杆菌菌株DH5a ,试问: a) 在培养基中加入哪一种抗生素用于选择阳性克隆? b) 对哪一种抗生素有抗性的质粒携带外源果蝇DNA片段? c) 如果有的克隆可抗两种抗生素,如何解释? 5. 在构建一个真核生物核DNA库时,需要考虑哪些因素?
6. 根据下列凝胶电泳分析结果,构建一个限制性酶图谱,并表明酶切位点及片段的碱基数,片段总长度为1300bp。电泳分析结
果如下:
7. 在下列六种限制性酶图谱中,有一种排列方式与凝胶电泳的带型是一致的。三种酶分别是:E-EcoRI、N-NcoI、A-AatII。
试回答:
a) 根据电泳中DNA带型,选择正确的图谱并说明原因。
b) 在将这块凝胶转移后进行Southern杂交分析,带星点的是与pep基因杂交的信号带,说明pep在图谱中的位置。 8. 简述将抗除草剂基因转移到植物基因组的过程。 9. 简述基因组遗传图谱与物理图谱的异同。
10. 简述基因工程在工、农、医三方面的成就及其发展前景。
第九章 基因工程和基因组学(参考答案)
3.答:载体:构建重组DNA分子,转基因
限制性内切酶:载体构建,重组DNA构建,目的DNA片断的获得 连接酶:连接DNA链的磷酸二酯键,构建重组DNA分子 宿主细胞:重组DNA分子的受体,克隆。
NaCl: 作为盐离子,广泛用于各种试剂的配制,例如限制性内切酶的缓冲液,核酸杂交缓冲 液,DNA提取、变性等缓冲液中。 4. 答: (1) 氨苄青霉素
(2) 氨苄青霉素
(3) 没有果蝇DNA插入。
5.答:
(1) 基因组的大小以及选择合适的载体。小的基因组可以选择质粒或者粘粒或者病毒(噬菌体);大的则要选择BAC、
YAC或者PAC等。
(2) 受体的选择:容易转化、繁殖和回收
(3) 基因组的覆盖率:根据基因组大小、载体的承载量计算出必须的克隆个数。