2. 加约700 ml DEPC处理水,搅拌溶解。 3. 使用2 N NaOH调节pH值至7.0。 4. 再向溶液中加入下列试剂。
1 M NaOAc(DEPC处理) 0.5 M EDTA(pH8.0)(DEPC处理) 5. 用DEPC处理水将溶液定容至1 L。 6. 用0.45 m滤膜过滤除去杂质。 7. 室温避光保存。
注:溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用,但变黑时不要使用。
溴乙锭 (10 mg/ml)
组份浓度 10 mg/ml溴乙锭 配制量 100 ml 配制方法
1. 称量1 g溴乙锭,加入到100 ml容器中。
2. 加入去离子水100 ml,充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。 3. 将溶液转移至棕色瓶中,室温避光保存。 4. 溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。
注意:溴乙锭是一种致癌物质,必须小心操作。
Agarose凝胶 配制方法
1. 配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。 2. 根椐制胶量及凝胶浓度,准确称量琼脂糖粉,加入适当的锥形瓶中。 3. 加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。 注:用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。
4. 在锥形瓶的瓶封上保鲜膜,并在膜上扎些小孔,然后在微波炉中加热熔化琼脂
糖。加热过程中,当溶液沸腾后,请戴上防热手套。小心摇动锥形瓶。使琼脂糖充分均匀熔化。此操作重复数次,直至琼脂糖完全熔化。必须注意,在微波
20 ml 20 ml 炉中加热时间不宜过长,每次当溶液起泡沸腾时停止加热,否则会引起溶液过热暴沸,造成琼脂糖凝胶浓度不准,也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时,必须保证琼脂糖充分完全熔化,否则,会造成电泳图像模糊不清。
5. 使溶液冷却至60℃左右,如需要可在此时加入溴乙锭溶液(终浓度0.5 μg/ml)。
并充分混匀。
注:溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时,请戴好手套。
6. 将琼脂糖溶液倒入制胶模中,然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度 一般在
3~5 min之间。
7. 在室温下使胶凝固(大约30 min~1 h),然后放置于电泳槽中进行电泳。
注:凝胶不立即使用时,请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存,一 般可保存2~5天。
琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围
琼脂糖浓度 0.5% 0.7% 1.0% 1.2% 1.5% 2.0%
6 × Loading Buffer(DNA电泳用) 组份浓度
30 mM 36%(V/V) 0.05%(W/V) 0.05%(W/V) 配制量 500 ml 配制方法
1. 称量下列试剂,置于500 ml烧杯中。
EDTA Glycerol Xylene Cyanol FF Bromophenol Blue 最佳线形DNA分辨范围(bp) 1,000~30,000 800~12,000 500~10,000 400~7,000 200~3,000 50~2,000 EDTA Bromophenol Blue Xylene Cyanol FF 4.4g 250 mg 250 mg 2. 向烧杯中加入约200 ml的去离子水后,加热搅拌充分溶解。 3. 加入180 ml的甘油(Glycerol)后,使用2 N NaOH调节pH值至7.0。 4. 用去离子水定容至500 ml后,室温保存。
10 × Loading Buffer (RNA电泳用) 组份浓度
10 mM 50%(V/V) 0.25%(W/V) 0.25%(W/V) 配制置 10 ml 配制方法
1. 称量下列试剂,置于10 ml离心管中。
0.5 M EDTA(pH8.0) Bromophenol Blue Xylene Cyanol FF 200 μl 25 mg 25 mg EDTA Glycerol Xylene Cyanol FF Bromophenol Blue 2. 向离心管中加入约4 ml的DEPC处理水后,充分搅拌溶解。 3. 加入5 ml的甘油(Glycerol)后,充分混匀。 4. 用DEPC处理水定容至10 ml后,室温保存。
核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法
20×SSC
组份浓度 3.0 M NaCl,0.3 M Na3citrate·2H2O(柠檬酸钠) 配制量 1 L 配制方法