实验一 细胞的形态观察及其大小测量
【实验目的】
1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察，了解细胞的形态及其显微结构； 2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有一直观认识。
【实验用品】
普通光学显微镜;目镜测微尺;镜台测微尺;载玻片;盖玻片等。
【实验材料】
小白鼠肝细胞切片;鸡血红细胞;蚕豆叶片横切片;洋葱。
【实验内容和方法】
(一)细胞形态观察
l、动物细胞的观察
（1）人肝细胞切片：在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。注意肝细胞之间的界限、细胞的形状、细胞核的形状和数量、核仁的形状和数量、细胞质的形态构造以及细胞质和细胞核染色的区别。
（2）鸡血细胞涂片的观察：注意观察血细胞的组成；红细胞、白细胞、血小板的形态特点。
2、植物细胞的观察
（1）取蚕豆叶片横切片的观察：注意表皮细胞和叶肉细胞的基本结构。
（2）洋葱表皮细胞的形态观察：用镊子撕取洋葱表皮，滴一滴蒸馏水，盖上盖玻片。在显微镜下观察的形态和结构。
（二）细胞的大小和测量
1、测微尺的使用
目镜测微尺是一块圆形玻片，中心刻有一尺，长5～10mm，分成50～100格。每格的实际长度因不同物镜的放大率和不同镜筒长度而异。镜台测微尺是在一块载玻片中央，用树胶封固一圆形的测微尺，长1mm或2mm，分成100格或200格，每格的实际长度0.01mm(10μm)。当用目镜测微尺来测量细胞的大小时，必须先用镜台测微尺核实目镜测微尺每一格的长度。方法如下：
(1)卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上，再旋上目镜的上透镜。
(2)将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺分度位于视野中央。调焦至能看清镜台测微尺的分度。
(3)小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦)，使两尺左边的一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的直线(如图所示)。
(4)记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每格等于多少μm：
0
1
2
3
测定目镜测微尺每格实长的图解 上尺：目镜测微尺；下尺：镜台测微尺
镜台测微尺的格数
目镜测微尺每格的微米数= —————————×10 目镜测微尺的格数
例如，图中镜台测微尺1格=目镜测微尺6格，代入公式得：
目镜测微尺每格=1／6×10μm=1.66μm
(5)取下镜台测微尺，换上需要测量的玻片标本，用目镜测微尺测量标本。 2、计算：根据测量结果计算各种细胞及细胞核的体积。 椭球形：V=4πab2／3 a-长半径 b-短半径 圆球形：V=4／3πr3 r-半径
圆柱形：V=πr2h r-半径 h-高
【实验结果】
1、数据记录
40×目镜测微尺每格之长度：X=⑴ 洋葱表皮
宽（μm）×长（μm） 72.5×182.5 80×302.5 102.5×210 85×232.5 85×267.5 ⑵ 人肝细胞
宽（μm）×长（μm） 25×30 22.5×25 20×22.5 12.5×22.5 20×22.5 15×22.5 20×25 20×25 12.5×25 17.5×10 95×157.5 100×142.5 92.5×130 77.5×242.5 80×252.5 1?10=2.5（μm） 4⑶ 血细胞
宽（μm）×长（μm） 7.5×10 7.5×7.5 7.5×7.5 10×7.5 7.5×7.5 2、图片
见图1.1、图1.2、图1.3
10×10 7.5×7.5 5×7.5 10×10 7.5×10 【作业与思考】
1、血细胞分为哪几大类？分别描述你看到的不同血细胞的形态，并阐述其功能。
答：血细胞分为红细胞、白细胞和血小板。红细胞是运输氧气的主要媒介；白细胞分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和单核细胞，其主要功能是抵御病原的入侵和对疾病的免疫作用；血小板的主要功能是凝血和止血，修补破损的血管。
2、任意选择你所看到的动物细胞和植物细胞各一个，绘图并进行适当标注，测量其大小，并比较动植物细胞大小的差异。
答：动植物细胞图片见图1.1和图1.2.。通过镜台测微尺的测量，可观察到洋葱表皮细胞明显比人肝细胞大。洋葱表皮细胞可见到细胞壁，且形状较规则多为矩形，而人肝细胞形状不规则。
3、在不同的放大倍数下，所测得的细胞大小一致吗？你认为在哪个放大倍数下测定得比较准确？为什么？
答：在不同的放大倍数下，所测得的细胞大小不一致。因为在不同的目镜放大倍数下，需要重新跟台镜测微尺校准以获得当前放大倍数下目尺的最小分度值，所以在4×、10×、40×下所得细胞大小不一致。在40×下测得数据更准确，因为在该放大倍数下能够看清楚目尺的最小分度，而在4×和10×的放大倍数下不能分辨出最小分度。
【实验总结】
通过本次实验，学会了用普通光学显微镜观察动植物细胞的构造同时区分它们之间的差别，跟重要的是学会了用镜台测微尺校准目镜测微尺的方法而且知道了如何用镜台测微
尺测量细胞的直径的方法。
实验二
PAS（Periodic Acid Schiff）反应显示糖原
和其它多糖物质
【实验目的】
1、熟悉PAS法原理及操作步骤；
2、观察PAS反应的染色结果，并观察多糖在组织细胞中的分布。
【实验原理】
多糖(polysaccharide)是由多个单糖分子缩合脱水而生成的化合物。广泛分布于动、植物界。一些不溶性的多糖构成植物和动物的骨架，如植物的纤维素和动物的甲壳素，一般称为结构多糖。另一些多糖在生物体内作为能量贮存，如淀粉（植物）和糖元（动物），在需要时可以通过生物体内酶系统的作用分解，释放出单糖。还有许多多糖具有更复杂多样的生理功能，如粘多糖、血型物质等，它们在生物体内起着重要的作用。 淀粉和糖原均由D－葡萄糖的分支或直链组成，过碘酸是一种强氧化剂，能将葡萄糖中的乙二醇基(CHOH-CHOH)氧化成两个游离的醛基(-GHO)，游离醛基与Schiff试剂反应生成紫红色产物。
【实验用品】
(一)试剂：
1、过碘酸酒精溶液：取过碘酸（HIO4·2H2O）0.4g溶于35 m1纯酒精中 ，加入5 m1 的0.2M醋酸钠（醋酸钠2.72g溶于100 m1蒸馏水中），再加入15ml蒸馏水。溶液配好后保存在0℃～4℃的冰箱内，并加黑纸保存，此液如显黄色即失效。
2.Schiff试剂：将0.5 g碱性品红加入100m1煮沸的蒸馏水中，时时摇荡玻璃瓶或者搅拌，煮5min，使之充分溶解；然后冷却至50℃时过滤到具有玻塞的棕色试剂瓶，加入10ml的lmol／L的HCl，冷却至25℃时加入0.5g偏重亚硫酸钠，在室温黑暗条件下静置24h，其颜色呈褐色或淡黄色，加活性炭0.5g剧烈振荡摇匀1min；过滤，滤液为无色。置棕色瓶密封，外包黑纸，4℃保存。本试剂可提前一天准备，此液必需保持清澈透明、无色也无沉淀，容器要小，装满后仅留很小的空隙，其中不应有任何氧化剂，不要过长时间暴露在空气中。如有白色沉淀就不能再用，如颜色变红可以加入少许偏重亚硫酸钠，使其再转变为无色就可以再用。
3、亚硫酸水溶液：取10％偏重亚硫酸钠Na2S2O5（或K2S2O5）20ml、1mmolL-1 HCl 20ml和400ml纯水混匀即可。此液使用前配制，否则会因SO2逸出失效。（此液中所用的偏重亚硫酸钠或钾要与Schiff试剂中所用的相同）：
4、苏木精溶液常用的有5种，其中德拉菲氏苏木精染液(Delafield 苏木精染液)配法如下:
甲液（苏木精5g、无水乙醇30ml）
乙液（铵矾，即硫酸铝铵饱和水溶液：比例为1g硫酸铝：11ml水，用时配110ml,取100ml） 丙液（甘油125ml、甲醇125ml）。