万邦德（湖南）天然药物有限公司
延胡索检验标准操作规程 文件编号 编制人 审核人 批准人 颁发部门 分 发 部 门 品质保证部 SOP-QC-7-021-00 文件类型 编制日期 审核日期 批准日期 生效日期 操作规程 年 月 日 年 月 日 年 月 日 年 月 日 □工程部 □生产部 □技术开发部 ■品质保证部 □物料部 □财务部 □办公室 □销售部 目的：制定延胡索的检验标准操作规程，保证检验结果的准确性。 范围：适用于延胡索的检验。 职责：QC主任、QC检验员
QC检验员：负责来样的检验，原始记录的填写完整、清晰准确、对检验结果数据负责；并及时出具检验报告书。
QC主任：合理分配检验工作，对来样检验的及时、结果准确负责；对QC检验员出具的检验记录和检验报告的结果审核负责。 内容：
1. 检验依据：TSD-QS-7-021-00 2. 检验操作程序 2.1性状
延胡索 本品呈不规则的扁球形，直径0.5～1.5cm。表面黄色或黄褐色，有不规则网状皱纹。顶端有略凹陷的茎痕，底部常有疙瘩状突起。质硬而脆，断面黄色，角质样，有蜡样光泽。气微，味苦。
延胡索净药材或饮片 本品呈不规则的段或片。外表皮黄色或黄褐色，有不规则细皱纹。切面黄色，角质样，具蜡样光泽。气微，味苦。
醋延胡索 本品形如延胡索或片，表面和切面黄褐色，质较硬。微具醋香气。 2.2鉴别 （1）显微鉴别
仪器和器皿 显微镜、万能粉碎机、载玻片 盖玻片 目镜测微尺 试剂与试液
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水合氯醛试液：取水合氯醛50g，加水15ml与甘油10ml使溶解，即得。 甘油乙醇试液：取甘油、稀乙醇各一份，混合，即得。 稀乙醇：取乙醇529ml，加水稀释至1000ml，即得。
操作步骤 本品粉末绿黄色。糊化淀粉粒团块淡黄色或近无色。下皮厚壁细胞绿黄色，细胞多角形、类方形或长条形，壁稍弯曲，木化，有的成连珠状增厚，纹孔细密。螺纹导管直径16～32μm。
标准限度 延胡索、延胡索净药材或饮片、醋延胡索应符合以上显微鉴别要求。 （2）薄层鉴别
仪器和器皿 电子天平、万能粉碎机、超声仪、烘箱、三用紫外仪、水浴锅
刻度吸管、烧杯、展开缸、微量进样针（5μl）、硅胶G薄层板、玻璃漏斗（60mm）、定性滤纸、碘缸、分液漏斗、量筒、容量瓶、pH试纸、蒸发皿 试剂和试液 浓氨试液、甲醇、乙醚、甲苯、丙酮 对照品 延胡索对照药材、延胡索乙素对照品
操作步骤 取本品粉末lg，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水l0ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取3次，每次l0ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材lg，同法制成对照药材溶液。再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（WP-Q-8·0-019）试验，吸取上述三种溶液各2～3μl，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(9：2)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中约3分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 标准限度 延胡索、延胡索净药材或饮片、醋延胡索均应符合薄层鉴别要求。 2.3 检查 （1）金胺O 1. 薄层鉴别
仪器和器皿 万能粉碎机、电子天平、烘箱、超声仪
移液管（2ml、10ml、20ml）、容量瓶、微量进样针（10μl）、硅胶G薄层板、玻璃漏斗（60mm）、定性滤纸、展开缸、烧杯（25ml）、具塞锥形瓶
试剂和试液 70%乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、氨水、甲醇
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对照试剂 金胺O对照试剂
操作步骤 取本品粉末2g，加70%乙醇20ml，密塞，超声处理20分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。取金胺O对照试剂适量，加70%乙醇 20ml制成每1ml中含0.1mg的溶液，即得。照薄层色谱法（SOP-QC-8-022）试验，取供试品溶液和对照试剂溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水（4：5 ：1 ：1 ）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，立即在可见光下检视。供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。 2. 照高效液相色谱法（SOP-QC-8-020）测定。
仪器和器皿 电子天平、高效液相色谱仪、超声仪、万能粉碎机、减压过滤器、水浴锅 棕色量瓶（5ml、50ml）、移液管（25ml、50ml）、滴管、具塞锥形瓶、烧杯（200ml、1000ml）、量筒（250ml、1000ml）、玻璃漏斗（60mm）、定性滤纸、刻度吸管（5ml）、有机系微孔滤膜（0.45μm）、平底烧瓶、量筒
试剂和试液 乙腈、磷酸二氢钾、磷酸、三乙胺、甲醇、乙醇 对照试剂 金胺O对照试剂
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.025mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.2%三乙胺，并用磷酸调pH值为3.0)（35：65）为流动相；检测波长为432nm。理论板数按金胺O对照试剂色谱中的主峰计算，应不低于2000。
对照品溶液的制备 取金胺O试剂适量，加70%乙醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。供试品溶液的制备 取上述（1）项下的供试品溶液，即得。
测定法 取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
结果判定 供试品色谱中，不得出现与对照试剂色谱主峰保留时间相同的色谱峰。若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰在320～450波长范围的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。
备注：必要时，可采用高效液相色谱-质谱联用方法验证。建议采用乙腈-0.05mol/L醋酸铵（35：65）流动相系统。
标准限度 延胡索、延胡索净药材或饮片、醋延胡索均不得检出金胺O。 （2）水分 照水分测定法（SOP-QC-8-015）第一法测定。 仪器与用具 电子天平 电热恒温鼓风干燥箱 扁形称量瓶
操作步骤 扁形称量瓶恒重 取称量瓶置于烘箱内，将瓶盖取下置称量瓶旁，或将瓶盖
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半开，在100～105℃干燥，一般2-3小时，将称量瓶盖好，移置干燥器中，冷却至室温（一般约需30～60分钟），精密称定重量；再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，直至恒重（连续两次干燥的重量差异在0.3mg以下）。
取供试品2～5g，平铺于恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松样品不超过10mm，精密称定，干燥，恒重，直至连续两次干燥的重量差异不超过5mg为止。 计算：
水分%?W1?W2?W3?100%W1式中 W1为供试品的重量（g）； W2为称量瓶恒重的重量（g）；
W3为（称量瓶+供试品）恒重的重量（g）。
标准限度 延胡索、延胡索净药材或饮片、醋延胡索均不得过14.8%（法定标准：不得过15.0%）。
（3）总灰分 照灰分测定法（SOP-QC-8-017）测定。 仪器与用具 电子天平 箱氏电阻炉 坩埚
操作步骤 测定用的供试品须粉碎，使能通过二号筛，混合均匀后，取供试品2～3g（如 须测定酸不溶性灰分，可取供试品3～5g），置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量（准确至0.01g），缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。 计算： 总灰分含量% =[（m2－m0）/（m1－m0）]×100% 式中：m0为空坩锅重量（g）；
m1为灼烧前坩锅和供试品重量（g）； m2为灼烧后的坩锅和灰分重量（g）。
标准限度 延胡索、延胡索净药材或饮片、醋延胡索均不得过3.8%（法定标准：不得过4.0%）。
（4）浸出物 照醇溶性浸出物测定法（SOP-QC-8-019）项下的热浸法测定，用稀乙醇作溶剂。
仪器和器皿 电子天平、水浴锅、万能粉碎机、烘箱
二号筛、具塞锥形瓶（250ml）、移液管（25ml、100ml）、回流冷凝管、干燥过滤器、蒸发皿、定性滤纸、干燥器、烧杯
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