二、实验原理
氨茶碱静脉注射后，其体内血药浓度-时间曲线呈两室模型曲线特征。若药物在体内呈两室模型分布，药物消除仅发生在中室，并符合表观一级动力学过程，则静脉注射给药后血药浓度经时变化公式为：
氨茶碱静注后，定时测定血药浓度。并由血药浓度-时间数据按两室模型拟合出α、β、A与B值，然后再进一步求算药动学隔室模型参数。
三、仪器与材料
仪器：紫外分光光度计，旋涡混合器，离心机，具塞试管，注射器，刀片等。
材料：氨茶碱注射液，5%葡萄糖注射液，0.1 mol/L盐酸溶液，0.1 mol/L氢氧化钠溶液，氯仿-异丙醇（95:5）溶液，75%乙醇等。
四、实验内容
（一）标准曲线的制备
以0.1 mol/L 氢氧化钠溶液配制10 μg/ml的氨茶碱标准储备液。精密吸取标准储备液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml置具塞试管中，并加蒸馏水至1 ml，各加入空白兔血清0.5 ml，配成相当于血清药物浓度2、4、8、12、16、20 μg/ml的标准样液。在试管中加入0.1 mol/L盐酸溶液0.2 mL，于旋涡混合器上混匀后，再加入氯仿-异丙醇（95:5）溶液5.0 ml，密塞，振摇混合，以2500 r/min离心20 min。精密吸取下层液4.0 ml置另一具塞试管中，加入0.1 mol/L氢氧化钠溶液4.0 ml，振摇混合，以2500 r/min离心10 min。取上清液3～3.5 ml，于紫外分光光度计上，以2 ml蒸馏水加4 ml 0.1 mol/L氢氧化钠溶液作参比，在274 nm和298 nm波长处分别测定吸收度（A274和A298），计算出ΔA（A274 - A298）。以ΔA为纵坐标，C（血药浓度，μg/ml）为横坐标绘制标准曲线并求出标准曲线回归方程，备用。
（二）给药与取样
选取体重2.5～3 kg的健康家兔，实验前禁食一夜。将氨茶碱注射液先用5%葡萄糖注射液稀释5～10倍，按15 mg/kg的剂量，由兔耳静脉快速推注（要求在2 min内注射完毕）。 给药后于0.25、0.5、1、2、3、4、6、8 h取兔耳静脉血约2 ml，置试管中。
（三）血清中氨茶碱浓度的测定
将血样以2500 r/min离心20 min后，使血清分离，吸取0.5 ml血清样品，置具塞试管中，加蒸馏水1.0 ml，混匀。以下按“标准曲线的制备”项下的方法，自“在试管中加入 0.1 mol/L盐酸溶液0.2 ml??”起，依法测定吸收度。将求出血清中氨茶碱浓度，并记录于表19-3。
值代入标准曲线回归方程，
（四）注释
1．氨茶碱为茶碱与乙二胺的复盐，易溶于水，几乎不溶于乙醇与乙醚。氨茶碱在体液中分离出茶碱，在酸性条件下，可用有机溶剂从血清中提取茶碱，并同时沉淀血清蛋白；再用碱液把茶碱从有机溶剂中提出进行浓度测定。
2．氨茶碱血药浓度测定方法采用紫外双波长法，即分别于λ274和λ298处测定碱性提取液的吸收度（A），其中A274为茶碱和本底（包括代谢产物、溶剂及血清中有关成分）的吸收度，而A298仅为本底的吸收度，故茶碱的吸收度ΔA = A274 - A298。该法省去了以空白血清作对照品，尤其对于临床血药浓度监测不易采取病人空白血样时，具有实用价值。
3．用氯仿-异丙醇溶液提取血清中茶碱时，在旋涡混合器上混合的时间不宜过长，否则样品与有机溶剂会发生乳化现象，将影响分离提取效果以及测定结果。
4．兔耳取血法 用固定架固定家兔，将兔耳静脉处脱毛，用酒精棉球擦洗，并用手弹打耳根部，使局部充血。用5～8号针头，在离耳根约1 cm处，向耳尖方向刺入静脉约1 cm左右，拔出后滴血收集；也可用手术刀片尖端在静脉血管处轻划一小口，让其自然滴血。取血毕，用干棉球压住出血口数分钟即可止血。下一次取血时，可用针尖或刀片尖端轻轻挑开伤口，让其自然滴血。在天气较冷时，家兔耳缘取血有困难，可用红外灯照射兔耳部帮助其升温充血。
5．本实验也适用于测定氨茶碱片剂口服给药的药动学参数。但利用家兔测定两室模型药物口服给药的药动学参数时，在取样点及时间间隔的安排上较难把握，故氨茶碱口服给药常按单室模型拟合药动学参数，往往可得到较满意的效果。
五、实验结果
（一）实验记录与数据处理
1．计算标准曲线回归方程及相关系数。
2．氨茶碱血药浓度数据及其计算，记录于表19-3。
表19-3 血药浓度测定数据 t（h） A274
0.25
0.5
1
2
3
4
6
8
A298 ΔA C（μg/ml）
lgC
（二）氨茶碱药物动力学参数的求算
1．作C～t图与lgC～t图。
2．应用“残数法”求算混杂参数α、β、A与B值（具体方法详见第九章）。 （1）根据lgC～t曲线，划分“分布相”与“消除相”；
（2）由“消除相”血药浓度数据，求回归直线方程，并求出β与B值；
（3）由上述消除直线方程求出外推线浓度并计算残数浓度（Cr），记录于表19-4； （4）由“分布相”残数浓度数据，求回归直线方程，并求出α与A值。
表19-4 血药浓度与残数浓度数据表 t（h） 0.25 0.5 1 2 3 4 6 8
C（μg/ml）
lgC
外推线浓度（μg/ml）
Cr（μg/ml）
lgCr
3．求算药动学隔室模型参数（具体方法详见第九章）。 （1）计算药动学隔室模型参数k21、k10与k12； （2）计算中室与总体表观分布容积（VC与V）； （3）计算生物半衰期t1/2(β)；
（4）分别按公式法和梯形面积法计算血药浓度-时间曲线下面积（AUC）； （5）将药物动力学参数记录于表19-5。
表19-5 氨茶碱静注后的药物动力学参数 A（μg/ml） B（μg/ml） α（h-1） VC（L） k12（h-1） k21（h-1） β（h-1） t1/2(β)（h） V（L） k10（h-1） AUC（μg·h/ml）积分法 AUC（μg·h/ml）梯形面积法
实验四 血药浓度法测定口服给药的药动学参数与生物利用度
一、实验目的
1．掌握用血药浓度法测定制剂生物利用度的方法。