与原来的DNA断链连接起来。这样完成的修复能使DNA恢复原来的结构(1分)。
4. PCR在基因分析和基因诊断中有哪些应用?
进行DNA体外扩增1分、基因克隆 1分(或PCR原理2分), 分析基因拷贝数1分(定性定量分析)(PCR-SSCP或DNA序列分析或甲基化分析) 1分,基因突变的诊断1分。
5. RNAi技术的原理是什么?
长双链RNA被细胞内的双链RNA(1分)特异性核酸酶切成21-23个碱基对的短双链RNA,称为小干扰性RNA(1分),siRNA与细胞内的某些酶和蛋白质形成复合体(1分),该复合体可识别与siRNA有同源序列的mRNA(1分),并在特异的位点将该mRNA切断(1分)。(或基本意思一致也给分)。
6. 葡萄糖不存在和乳糖存在时乳糖操纵子如何进行复合调控?
葡萄糖不存在CAP1分发挥正调控作用1分,乳糖存在,阻遏蛋白由于诱导剂的存在1分而失去负调控作用1分,基因被打开,启动转录1分(或基本意思一致也给分)。
7. 什么是诱导表达和阻遏表达?
在特定环境信号刺激下1,有些基因的表达表现为开放或增强1,这种表达方式称为诱导表达1,相反,有些基因的表达表现为关闭或下降1,这种表达方式称为阻遏表达1。(或基本意思一致也给分)
8. 基因治疗的基本策略有哪些? 基因置换(1分):指将特定的目的基因导入特定细胞,通过定位重组,以导入的正常基因置换基因组内原有的缺陷基因。 基因添加(1分):通过导入外源基因使靶细胞表达其本身不表达的基因。 基因干预(1分):采用特定的方式抑制某个基因的表达,或者通过破坏某个基因的结构而使之不能表达,以达到治疗疾病的目的。 自杀基因治疗(1分):将“自杀”基因导入宿主细胞中,这种基因编码的酶能使无毒性的药物前体转化为细胞毒性代谢物,诱导靶细胞产生“自杀”效应1分。 (或答基因修饰,基因抑制也给分)
四、 论述题:(每题15分,共30分)
1. 在基因克隆过程中,重组DNA导入大肠杆菌后如何筛选和鉴定阳性克隆? i. 传学方法1分 1. 抗生素筛选法:(单抗生素筛选、双抗生素筛选1分 2. 蓝-白筛选(α互补) 1分)
ii. 免疫学方法(western blot)1分:标记抗体1分,表达蛋白1分 iii. 核酸杂交法1分:探针互补(杂交)1分,变性1分
iv. PCR技术(DNA序列分析)1分:设计特异性引物1分,鉴定扩增产物1分 v. 酶切鉴定1分,内切酶选择,电泳检测图谱1分 总分15分,论述得当加1分
2. 分别以大肠杆菌和人类为例,比较原核生物与真核生物基因、基因组的各自特点。
原核生物 真核生物
结构基因连续(无内含子) 断裂基因(有内含子), RNA合成需剪接1分 RNA合成无剪接 1分
有操纵子结构,1分 一般无操纵子结构1分
结构基因转录为多顺反子 结构基因转录为单顺反子 1分 (多基因同时转录) 1分 (各基因分别转录)
双链环状DNA分子,单复制起点1分 染色体DNA,多复制起点1分
可有质粒 线粒体DNA
基因组小,基因密度高,1分 基因组大,基因密度低,重复序列多1分
重复序列少 非编码序列多于编码序列 1分 非编码区主要是调控序列 1分 有多基因家族和假基因