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⑴ 涂片革兰染色镜检：G+葡萄状排列的球菌
⑵ 血琼脂平板上分离培养：直径2～3mm、金黄色、光滑突起的圆形菌落，有时可见β-溶血环
⑶ 主要生化鉴定试验：血浆凝固酶试验、耐热核酸酶试验、发酵甘露醇、（Staphaurex胶乳凝集试验、API葡萄球菌鉴定试剂盒等）
（四）患儿，男，5岁。发热伴头痛，呕吐2天，服用退热药及抗生素后，症状无改善，头痛加剧，自诉颈部痛，烦躁。入院时喷射状呕吐，体温39 ℃，神志尚清。右眼结膜及全身皮肤有针头状至绿豆大小不等的红色出血点，咽部充血，颈强直。脑脊液检查：外观混浊，白细胞数量明显增加，以中性粒细胞为主。将脑脊液离心沉淀后取沉渣涂片，革兰染色镜检，发现中性粒细胞内外均有革兰阴性双球菌。 思考题：
⑴ 引起本病最可能的病原菌是什么？还需做哪些微生物学检查以确定诊断？进行微生物学检查时应注意什么问题？
⑵ 该菌是如何传播的？所致疾病怎样进行特异性预防？
提示1：引起本病最可能的病原体是脑膜炎奈瑟菌。脑脊液离心沉淀涂片，中性粒细胞内外见革兰阴性双球菌，结合患儿临床表现和脑脊液检查特点可初步诊断为脑膜炎奈瑟菌。可进一步将脑脊液标本增菌后接种于巧克力培养基，培养48h后，如形成无色、圆形、隆起、光滑、透明或半透明、似露滴状的小菌落，取菌落涂片染色镜检可进一步明确诊断。
提示2：病原菌主要经呼吸道飞沫传播，鼻咽部局部繁殖后入血，导致中枢神经系统感染。多数人感染后表现为带菌状态，只有极少数人发展成脑膜炎。
提示3：脑膜炎奈瑟菌抵抗力很弱，对干燥、寒冷、热力及常用化学消毒剂等均很敏感。因此在采集和送检疑为脑膜炎病人的材料时要注意保暖保湿，迅速送检，最好是床边接种。
提示4：对儿童注射荚膜多糖疫苗。我国因流行的菌群以A群为主，目前我国使用的为A群脑膜炎奈瑟菌疫苗。
肠杆菌科
1、名词解释：迁徙生长现象； KIA试验；肥达试验；外斐反应；MIU试验。
⑴ 迁徙生长现象：是指变形杆菌在固体培养基上呈扩散性生长，形成以接种部位为中心的厚薄交替、同心圆形的层层波状菌苔，称为迁徙生长现象。
⑵ KIA试验：即双糖铁—半固体培养基，它是一种复合性的检查生化反应的培养基，可检查4种反应即葡萄糖、乳糖的发酵反应，是否产生H2S，有无动力等。目前多使用国产双糖铁琼脂粉（KIA），比较方便，效果也好，但只能配制成斜面培养基，不能配成半固体培养基，因而无法观察细菌的动力。
双糖铁培养基（KIA）的用途：主要用于观察肠杆菌科细菌是否分解乳糖、葡萄糖产酸产气、是否产生H2S。
⑶ 肥达试验：是用已知伤寒杆菌菌体（O）抗原和鞭毛（H）抗原以及甲型副伤寒杆菌（A）抗原和肖氏沙门菌鞭毛（B）抗原与受检者血清作试管或微孔板凝集试验，以测定受检者血清中有无相应抗体及其效价，为协助临床对肠热症诊断的一种血清学试验。
⑷ 变形杆菌的菌株X19、X2、Xk的O抗原与某些立克次体有共同抗原成分，可发生交叉反应。因此OX19、OX2、OXk可代替立克次体抗原与患者血清做定量凝集试验，辅助
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诊断立克次体病，称外斐反应（Weil-Felix test）。
⑸ MIU试验：即动力、吲哚、脲酶试验的合称。主要用于肠杆菌科细菌的鉴别，如大肠埃希菌MIU为+ + - 。
2、肠杆菌科细菌在SS琼脂平板上的菌落特征。 肠道非致病菌：红色菌落，如大肠杆菌等。
肠道致病菌：无色菌落。如伤寒杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌等 乳糖发酵试验：初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌 【附】肠道选择性培养基
☆SS平板：含乳糖、中性红指示剂、胆 盐、煌绿、硫代硫酸钠等 ☆麦康凯（Mac）平板：含乳糖、中性红指示剂、胆盐等
☆中国蓝平板：含乳糖、中国蓝和玫瑰红酸指示剂。大肠杆菌形成紫黑色带金属光泽菌落 ☆EMB平板：含乳糖、伊红和美蓝指示剂 选择性培养基的特点：
均含有乳糖和酸碱指示剂：
细菌分解乳糖产酸，使培养基pH降低，指示剂呈酸性变色，指示剂不同，菌落呈现不
同的颜色。分解乳糖的细菌呈有色菌落，不分解乳糖的细菌为无色菌落 含有不同的抑制剂：
对革兰阳性菌和非致病菌有不同程度的抑制作用，因此可以选择性的培养肠道致病菌。
3、大肠埃希菌所致的疾病的种类由于哪些？简述致腹泻大肠埃希菌的种类以及主要的临床
意义。EHEC主要血清型以及引起的病种是什么？ 大肠埃希菌所致的疾病的种类有：
⑴ 肠外感染：以化脓性炎症多见。如：尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎、腹膜炎、阑尾炎、手术创口感染、新生儿败血症与脑膜炎。（条件致病，细菌居住部位改变引起的肠外感染以化脓性感染和尿路感染最为常见。）尿路感染还需尿菌落计数：＞10万／ml尿液有诊断意义，采用倾注平板法进行计数。 ⑵ 肠道感染：腹泻。
引起腹泻大肠埃希菌的种类及其所致疾病 （1）肠产毒型大肠埃希菌（ETEC）：是婴幼儿和旅游者腹泻的重要病原菌（霍乱样腹泻）（2）肠侵袭型大肠埃希菌（EIEC）：主要引起儿童和成人菌痢样腹泻。 （3）肠致病型大肠埃希菌（EPEC）：是婴幼儿腹泻的主要病原体，严重者致死。 （4）肠出血型大肠埃希菌（EHEC）：为出血性结肠炎和溶血性尿毒综合征的病原体。 （5）肠集聚型大肠埃希菌（EAEC）：可引起婴儿持续性腹泻、脱水、血便。
肠出血型大肠埃希菌(EHEC)主要血清型是0157 ：H7，可引起出血性结肠炎、溶血性尿毒综合征（HUS）。
EHEC的鉴定：
生化反应符合大肠杆菌：在肠道选择平板上为发酵乳糖的有色菌落；在KIA上多为＋＋＋－；IMViC为＋＋－－；尿酶试验－。 血清学分型：有50多个型，代表为O157:H7
O157:H7则需接种在山梨醇麦康凯琼脂（SMAC）平板上，35℃培养18~24h后可见红色中等大小菌落。再与O157血清做胶乳凝集试验。
凡山梨醇阴性的大肠埃希菌0157：H7分离株无须再做毒素的检测，因为均产生Vero毒素。
目前，美国CDC已将0157：H7血清型列为实验室常规检测项目。
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4、志贺菌属和沙门菌属的主要致病物质、主要临床特征与临床常见病种。 志贺菌属
致病物质：菌毛；内毒素；志贺毒素。
所致疾病：经肠道传染，引起细菌性痢疾，有3种临床类型，即急性菌痢、慢性菌痢、中毒性菌痢。
主要临床特征：发热；脓血粘液便；腹痛、里急后重；甚至神志障碍，中毒性休克。 沙门菌属
致病物质：菌毛、耐酸应答基因、Vi抗原、内毒素、肠毒素。 所致疾病：肠热症（Enteric fever/typhoid fever）：伤寒和副伤寒；肠炎型即食物中毒；败血症；带菌者。
主要临床特征：伤寒??持续高热、相对缓脉、肝脾肿大、玫瑰疹、外周血白细胞数下降。
5、细菌性痢疾与肠热症的标本如何采集？请简述志贺菌的检验方法与鉴定依据。
细菌性痢疾标本采集：粪便或肛拭子；新鲜脓血黏液便；立即送检或床边接种；保存于30％甘油盐水或卡-布培养基。在治疗前采集粘液脓血便作床边接种，不能及时接种可置甘油缓冲盐水中送检。
肠热症的标本采集：发病第1周：血液；发病第2周起：粪便；发病第3周起：粪便、尿液；肠热症全程：骨髓。 检验方法：
1. 将待检标本接种肠道选择平板，35℃培养18～24小时。
2. 若标本含菌量少，可先增菌（GN增菌液）4～6小时再分离培养。 3. 挑取无色半透明菌落，进行初步生化反应鉴定。
挑取可疑菌落接种KIA、MIU培养基
若符合KIA：KA－－；MIU：－ －/＋ －， 再作志贺菌多价诊断血清玻片凝集试验 4. 符合志贺菌生化反应特征可进行血清学鉴定
5. 血清学鉴定先用志贺氏多价诊断血清作玻片凝集试验，若凝集再用A、B、C、D群诊
断血清鉴定到种、型。
6. 血清学鉴定需注意K抗原的阻断作用，并应考虑是否为EIEC。
若出现生化反应符合，血清学不凝集现象，应考虑K抗原的阻断作用，可将菌液加热100℃15～30min后，重复凝集试验，仍不凝集可考虑EIEC，需进行鉴别。
志贺菌鉴定依据：
肠道选择平板上无色半透明菌落 KIA：K A － － MIU：－ －/＋ －
与志贺菌多价诊断血清和各群血清凝集
注意与EIEC、类志贺邻单胞菌、动力不明显的沙门菌鉴别 志贺菌鉴别：
与EIEC鉴别：醋酸盐、葡萄糖铵利用试验和黏质酸盐产酸试验，EIEC均阳性，志贺菌均阴性。
与伤寒沙门菌鉴别：因两菌在KIA上极其相似，可用动力、H2S和因子血清O9相鉴别。
6、简述EIEC与志贺菌的异同点。
两者都是革兰阴性杆菌，生化反应特点相似：发酵葡萄糖产酸不产气、不发酵或迟缓发
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酵乳糖、多数菌株动力阴性、赖氨酸脱羧酶阴性。
与志贺菌的鉴别试验：醋酸盐、葡萄糖铵利用试验和黏质酸盐产酸试验，EIEC均阳性，志贺菌均阴性。
EIEC常见的血清型：O152、O124
7、肥达试验的结果如何分析？
⑴ 正常抗体水平：人们因沙门菌隐性感染或预防接种，血清中可含有一定量的有关抗体，其效价随地区而有差异。一般是O抗体（TO）凝集效价≥1：80，伤寒沙门菌H（TH）凝集效价≥1：160，引起副伤寒的沙门菌H（PA/PB/PC）凝集价≥1：80时才有诊断价值。
⑵ 动态观察：有时单次效价增高不能定论，可在病程中逐周复查。若效价逐次递增或恢复期效价比初期≥4倍才有意义。 ⑶ O与H抗体在诊断上的意义： 结果 O抗体高，H抗体高 O抗体不高，H抗体不高 意义 伤寒患者；近期接种伤寒疫苗 ① 未接触过伤寒抗原（未感染或接种）； ② 检测时间过早，O抗体还未产生； ③ 机体免疫机能缺失或低下 ① 感染史或接种史； ② 非特异性回忆反应 ① 伤寒感染或接种早期； ② 与伤寒沙门菌O抗原有交叉反应的其他 沙门菌（如肠炎沙门菌）感染。 O抗体不高，H抗体高 O抗体高，H抗体不高 ⑷ 肥达试验阴性原因： ① 发病早期曾用大量或多种抗生素治疗； ② 患者免疫功能低下。故本试验阴性时，不宜匆忙地否定临床诊断。
8、肺炎克雷伯菌初次分离时菌落有何特点？
兼性厌氧，营养要求不高，在初次分离培养基上形成较大、凸起灰白色的粘液型菌落，菌落大而厚实、光亮，相邻菌落易发生融合，用接种针沾取时可挑出长丝状细丝。在MAC培养基上发酵乳糖产酸，形成较大的黏液型、红色的菌落，红色可扩散至菌落周围的培养中。
形态结构：G-杆菌，无鞭毛、无芽胞, 有菌毛，有明显的荚膜。 基本生化反应特征：
具有肠杆菌科生化共性（葡萄糖 +、H2O2 +、氧化酶 -） 葡萄糖酸盐 +、苯丙氨酸脱氨酶 – KIA：AA + - IMViC：- - + + 脲酶：＋
血清学鉴定：荚膜肿胀试验
9、简述变形杆菌的鉴定依据有哪些？
变形杆菌属是一群动力活泼、H2S、苯丙氨酸脱氨酶和脲酶均阳性的细菌。广泛存在于
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