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细菌的生理
1、名词解释：热原质；细菌素；内毒素；外毒素。 ⑴ 热原质：又称致热原，是细菌合成的一种注入人体或动物体内能引起发热反应的物质。 ⑵ 细菌素：某些细菌菌株产生的一类仅对近缘细菌具有抗菌作用的蛋白质称为细菌素。 ⑶ 内毒素：即革兰阴性菌细胞壁的脂多糖，其毒性成分为脂质A，当菌体死亡裂解后才释放，是革兰阴性菌的主要致病物质。 ⑷ 外毒素：是多数革兰阳性菌和少数革兰阴性菌在生长繁殖过程中释放到菌体外的蛋白质，其毒性强，为细菌重要的致病物质。
2、简述细菌生长繁殖的基本条件有哪些？为什么专性厌氧菌在有氧环境中不能生长繁殖？ 细菌个体的生长繁殖方式：二分裂繁殖；繁殖速度：细菌分裂数量倍增所需时间，即代时，多数为20-30分钟。TB（结核杆菌）约18小时，产气荚膜梭菌为8分钟。 细菌生长繁殖的基本条件：
⑴ 充足的营养物质：包括水、碳源、氮源、无机盐、生长因子等； ⑵ 合适的pH值：大多病原菌的最适pH值为7.2-7.6； ⑶ 适宜的温度：大多数病原菌的最适温度为37oC； ⑷ 必要的气体环境。
专性厌氧菌不能在有氧环境中生长繁殖的原因：
⑴ 缺乏Eh高的呼吸酶（细胞色素和细胞色素氧化酶）；
⑵ 缺乏分解有毒氧基团的酶（超氧化物歧化酶SOD、触酶、过氧化物酶）
3、细菌的合成代谢产物种类及其在医学上的意义？
⑴ 与致病性有关的合成代谢产物：热原质/致热原、毒素和侵袭性酶； ⑵ 供治疗用的合成代谢产物：抗生素、细菌素、维生素； ⑶ 与鉴别细菌有关的合成代谢产物：色素。
4、细菌的生长曲线可分为几期？各自的主要特点是什么？
细菌生长曲线：是将一定量的细菌接种于适宜培养基中进行培养，连续检测细菌在不同培养时间的活菌数目（以菌落形成单位cfu表示），以cfu为纵坐标，培养时间为横坐标，可以作出一条反映细菌生长数变化规律的曲线，即生长曲线。包括迟缓期、对数期、稳定期、衰退期这四个时期。
⑴ 迟缓期：代谢活跃，菌体增大，积累酶、辅酶和中间代谢产物，不分裂繁殖，为细菌大量繁殖作好物质准备。
⑵ 对数期：细菌繁殖迅速，菌数呈几何级数增长，细菌的生物学性状典型，对外界环境作用敏感，适用于研究细菌的生物学性状和进行药物敏感实验，一般在培养后8-18小时。 ⑶ 稳定期：细菌数仍在增加，死菌数与活菌数形成一种动态平衡。其特点：形态、染色性等生物学性状常有改变；芽孢，毒素、抗生素等产生；若向培养系统补充营养物质，取走代谢产物，改善培养条件则可延长稳定期。
⑷ 衰亡期：死亡菌数增多，超过活菌数，细菌形态显著改变，生理活动趋于停止。一般不用该期细菌作鉴定和研究工作。
5、根据细菌代谢时对分子氧的需求与否，可将细菌分为哪几类？
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根据细菌代谢时对氧气要求的不同，可将细菌分为专性需氧菌；微需氧菌；兼性厌氧菌；专性厌氧菌四大类。
专性厌氧菌不能在有氧环境中生长繁殖的原因：缺乏Eh高的呼吸酶（细胞色素和细胞色素氧化酶）；缺乏分解有毒氧基团的酶（超氧化物歧化酶SOD、触酶、过氧化物酶）。
细菌检验技术
1、名词解释：培养基；分离培养；纯培养；菌落；细菌的生化反应；IMViC试验；KIA试验；CAMP试验；荚膜肿胀试验。
⑴ 培养基：由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品称为培养基。
⑵ 分离培养：临床标本中含有多种细菌，可经过划线接种到固体培养基表面分散开，经过18-24小时培养后可得到单个菌落。这种将混杂的细菌在固体培养基表面分散开的培养方法称为分离培养。或：将增菌培养物或含菌量多的标本如粪便、脓汁等，直接在平板上划线分离，将其中的目的菌分离出来的培养方法。
⑶ 纯培养：挑取一个菌落移种到另一培养基中，长出的细菌为纯种，该方法称为纯培养。 ⑷ 菌落：单个细菌在固体培养基上生长繁殖形成的单一的肉眼可见的细菌集团，称菌落。许多菌落融合在一起形成菌苔。
⑸ 细菌的生化反应：用生化试验的方法，检测细菌对各种基质（糖、蛋白质等）的代谢作用以及形成的代谢产物，从而对细菌鉴别的反应。（原理：细菌内所具有的酶不同，因而对营养物质的分解能力也不同，产生的代谢产物也不同，据此可鉴别不同细菌。） ⑹ IMViC试验：吲哚（I）、甲基红（M）、VP（V）及枸橼酸盐利用（C）四种试验，常用于肠道杆菌的鉴定，合称IMViC试验。如大肠埃希菌的结果是 ：+ + - -；产气杆菌的结果是：- - + +。
⑺ KIA试验：即双糖铁—半固体培养基，它是一种复合性的检查生化反应的培养基，可检查4种反应，即葡萄糖、乳糖的发酵反应，是否产生H2S，有无动力等。目前多使用国产双糖铁琼脂粉（KIA），比较方便，效果也好，但只能配制成斜面培养基，不能配成半固体培养基，因而无法观察细菌的动力。KIA试验主要用于肠杆菌科细菌的鉴定和鉴别。
⑻ CAMP试验：B群链球菌产生一种细胞外CAMP因子，可增强金黄色葡萄球菌β-溶血素的活性，因此，血平板上，在两菌（B群链球菌与金黄色葡萄球菌）交界处出现箭头状溶血区。该试验主要用于B群链球菌的鉴定。 ⑼ 荚膜肿胀试验：某些细菌的荚膜与同型抗血清作用后增厚变宽，此试验为荚膜肿胀试验。可作为肺炎链球菌等细菌的血清学诊断。
2、简述细菌染色标本检查的基本程序、复染色法基本程序与常用方法。 细菌染色标本检查的基本程序：涂片－→干燥－→固定－→染色。 复染色法基本程序：初染→媒染→脱色→复染
常用方法：革兰染色法和抗酸染色法，尤其是革兰染色法在细菌学检验中有重要意义。
3、革兰染色的原理、染液组成、染色方法、结果判断、影响因素与临床意义。 革兰染色原理：
⑴ 通透性说：主要是由于两类细菌的细胞壁成分和结构的不同。革兰阴性菌细胞壁中含有
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较多类脂质，而肽聚糖含量较少。当用酒精脱色时，溶解了类脂质，增加了细胞的通透性，使结晶紫和碘的复合物易于渗出，细胞脱色，经复染后，染上复染液(复红)的颜色；而革兰阳性菌细胞壁中肽聚糖含量多且交联度大，类脂质含量少，经酒精脱色后，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，酒精不易进入菌体脱色，故细胞仍保留初染液(结晶紫)的颜色。
+
⑵ 化学说：G菌菌体含有大量的核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫牢固结合，使已着色的菌体不易脱色。
+-+-⑶ 等电点说：G菌（PI2-3）低于G菌（PI4-5），G菌带负电荷比G菌要多，G+菌易与带正
电荷的碱性染料（结晶紫）结合牢固，因而不易脱色。
革兰染色染液组成：结晶紫染液、卢戈碘液、 95％乙醇、稀释石炭酸复红。 染色方法：结晶紫染液（初染） 1 分钟，水洗――卢戈碘液（媒染） 1 分钟，水洗――95％乙醇（脱色） 30 秒至 1 分 钟，水洗――稀释石炭酸复红（复染 ）1 分钟 ，水洗后，待干后用油镜进行观察。
结果判断：革兰阳性菌呈紫色，革兰阴性菌呈红色。 影响革兰染色的因素：
⑴ 操作因素：涂片的厚、薄；标本是否固定好；染色与脱色时间的长短。
⑵ 染液因素：卢戈碘液放置时间过长； 95％乙醇挥发；结晶紫与草酸铵混合时间太长等。 ⑶ 细菌因素：细菌种类；细菌菌龄。 影响革兰染色的关键步骤是脱色。
革兰染色的临床意义：⑴ 鉴别细菌；⑵ 选择药物；⑶ 与致病性有关。
4、请写出抗酸染色的染液组成、染色方法及染色结果、原理。 染液组成与染色方法：
固定 加温3-5min 脱色
标本 —→ 5%石碳酸复红 —→ 3%盐酸酒精—→美蓝复染—→ 镜检 染色结果：
红色：抗酸性细菌如结核杆菌 兰色：非抗酸性细菌
原理：由于结核杆菌细胞壁中含大量脂质，一般不易着色，若经加温或延长染色时间而着色后又能抵抗强脱色剂盐酸酒精的脱色，故又称抗酸杆菌。
5、简述细菌细胞壁染色的方法与结果。 方法：
自然干燥 固定15min 3～5min
制片 →→→→ 10%鞣酸 →→→→ 0.5%龙胆紫 →→→→ 镜检 水洗 水洗
结果：有细胞壁的细菌仅菌体周边染成紫色，菌体内部无色；无细胞壁的细菌（如L型细菌）可见整个菌体浓染呈紫色。
6、简述细菌不染色标本镜检的常用方法与用途。 常用方法：压滴法、悬滴法、（暗视野聚光法、相差显微镜检查法等）。 应用：主要用于观察活菌的动力和运动方式。 注意事项：检测细菌动力时需注意其真正运动还是分子运动，前者时由于鞭毛引起的有方向性的位移，而后者只是在原地颤动，是由于水分子撞击细菌而引起的布朗运动，无鞭毛的细菌也可有此种分子运动。
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7、简述培养基制备的一般程序与原则。
不同的培养基制备程序不尽相同，但配制一般培养基的程序基本相似，分为以下几个步骤： 调配 → 熔化 → 矫正pH值 → 过滤澄清 → 分装 → 灭菌 → 检定/质量检验 → 保存。 培养基的种类很多，但一般制备原则有三条：⑴ 足够和适当的营养成份。⑵ 合适的酸碱度。⑶ 绝对无菌。 培养基灭菌要求：
⑴ 基础培养基：121℃高压蒸汽灭菌15~30min。 ⑵ 含糖/明胶培养基：113 ℃灭菌15min。
⑶ 鸡蛋、血清培养基：血清凝固器间歇灭菌3天3次（75 ℃30min → 80 ℃30min → 85 ℃30min）。
⑷ 不耐高温的液体成分如血清、尿素、细胞培养液等：滤过除菌。
8、简述在细菌学检验中常用的接种方法有哪些？
细菌接种时，应根据待检标本的种类、检验目的及所用培养基的类型选择不同的接种方法。 ⑴ 平板划线接种法……分离培养，主要用于固体培养基的接种。
★目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。 ★方法：
★分区划线法：适用于含菌量较多的标本如粪便、脓汁 ★连续划线法：适用于含菌量较少的标本.
⑵ 琼脂斜面接种法：用于纯种增菌、保存菌种或生化反应。 ⑶ 半固体培养基接种法（穿刺接种法）：用于观察细菌动力或生化反应。 ⑷ 液体培养基接种法：用于纯种增菌或生化反应。
⑸ 倾注平板法：用于水、牛乳、饮料、尿液等液体标本及药物、化妆品等的细菌计数。 方法：是将经灭菌生理盐水适量稀释(通常作10-1～10-5稀释)的标本lml，置于灭菌平皿内。注入10～15ml已融化并冷至50℃左右的适宜培养基，凝固后，将平板倒置于37℃培养18～24h，计算菌落形成单位（colony forming unit, CFU）。求出每毫升或每克标本中所含活菌数。1ml 标本中活菌数= 全平板CFU×稀释倍数。
我国规定生活饮用水的标准是：1 ml 水中细菌总数≤100cfu。 ⑹ 涂布接种法 ：用于纸片药敏试验和生物制品菌苗的生产。
9、简述细菌的培养方法有哪些？
根据不同标本及培养目的的不同，可采取不同的方法进行培养，常用的有普通（一般）培养法（又叫需氧培养法）、二氧化碳培养法、微需氧培养法及厌氧培养法。 ⑴ 普通培养（需氧培养）：
★培养温度：35~37 ℃ （采用恒温培养箱） ★培养时间：18~24h（个别细菌例外） ⑵ 二氧化碳培养法：5~10%CO2。
★ 烛缸培养法：能自动调节CO2的含量和温度，使用较为方便。
★ 二氧化碳培养箱：取有盖磨口标本缸或玻璃干燥器，在盖及磨口处涂以凡士林。
将接种细菌的培养基放入缸中，加盖密封。随燃烧产生的CO2增加，蜡烛自行熄灭，此时缸内CO2浓度约为5%～10%。置37℃孵箱孵育。 ★ 化学法（重碳酸钠-盐酸法）：按每升容积重碳酸钠0.4g与1mol/L盐酸0. 35ml比
例，分别取两试剂置于容器内，放置于标本缸或干燥器内，密封后倾斜容器，使
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