9．由于基因工程是人为改变遗传信息的操作，因此必须注意被操作基因的安全，进行
严格的监控，质粒载体的安全性是十分重要的。请问质粒载体的安全条件包括哪几 个方面? 10．为什么野生型的?噬菌体DNA不宜作为基因工程载体? 11． 什么是蓝白斑筛选法?
12． 蓝白斑筛选法为什么也会有假阳性? 13． M13系列载体具有哪些优缺点? 14．黏粒载体具有哪些特点与不足?
15．辅助噬菌体DNA和相应的噬菌粒是如何协同工作的? 16． 如果知道某一基因的功能及其相应的蛋白质的氨基酸序列组成，可以通过何种方法 克隆该基因?
17． 什么是基因文库?
18． 什么是基因组文库(genomic library)?构建基因组文库，涉及哪些基本过程?它同遗
传学上的基因库有什么不同?
19． 什么是cDNA文库(complementDNAlibrary)?同基因组文库有何差别?
20． 黏性末端连接法是最常用的连接方法，具有许多优点，但是也有一些不足，请指出 这些不足之处。
21．什么是同聚物加尾连接法(homopolymer tails joining)?用何种方法加尾?具有哪些优 缺点?
22．何谓接头连接法(1inker ligation)?
23．什么是同裂酶?为什么说用同裂酶进行体外重组效率最高?
24．为了大量获得许多用于生化鉴定的产物，你想将拟南芥中的一个序列已知、编码单
体酶蛋白的基因在单细胞微生物中表达，你如何确保最终能得到产物?
25．某一质粒载体具有Tetr和Kanr的表型，在Kan抗性基因内有一Bgl I的切点。现用
Bgl I切割该载体进行基因克隆，问：(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素?(2)培
养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型?(3)如何利用抗性变化筛选到含有插入片 段的重组体?
26． 以pBR322 DNA作为载体，从四环素抗性基因区克隆外源DNA时，可采用环丝氨
酸富集法筛选重组体，说明其基本原理和基本操作过程。
27． 放射性抗体检测法(radioactive antibody test)的基本原理是什么?
28． 什么是随机引物(random primer)?如何标记DNA? 29．什么是印迹(blotting)杂交?
30．什么是原位菌落杂交(colony hybridization)? 31．说明Southern杂交的原理和方法。
32．Northern印迹与Southern印迹有什么不同?
33．建立了一个基因文库后，如何鉴定一个携带目的基因的克隆?
答案： 1． 答：
限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则，即属名+种名+株名的各一个首字母，再加上
序号。 基本原则： 3-4个字母组成，方式是：属名+种名+株名+序号； 首字母： 取属名的第一个字母，且斜体大写；第二字母： 取种名的第一个字母，斜体小写； 第三字母： (1)取种名的第二个字母，斜体小写；
(2)若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替。
第四字母： 若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定， 但用正体。 顺序号： 若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、
Ⅱ、Ⅲ、? 等，用正体。 2． 答：
Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限 制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松 动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因 条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二