基本项目测定方法 凯氏氮
（2） 稀释操作： ? 一般稀释法
按照选定的稀释比例，用虹吸法沿筒壁先引入部分稀释水（或接种稀释水）于1000ml量筒中，加入需要量的均匀水样，再引入稀释水（或接种稀释水）至800ml，用带胶版的玻棒小心上下搅匀。搅拌时勿使搅棒的胶版漏出水面，防止产生气泡。
按不经稀释水样的测定相同操作步骤，进行装瓶、测定当天溶解氧和培养5d后的溶解氧。
另取两个溶解氧瓶，用虹吸法装满稀释水（或接种稀释水）作为空白试验。测定5d前后的溶解氧。
? 直接稀释法：直接稀释法是在溶解氧瓶内直接稀释。在已知两个
容积相同（其差< 1ml）的溶解氧瓶内，用虹吸法加入部分稀释水（或接种稀释水），再加入根据瓶容积和稀释比例计算出的水样量，然后用稀释水（或接种稀释水）使刚好充满，加塞，勿留气泡于瓶内。其余操作与上述一般稀释法相同。
BOD5测定中，一般采用叠氮化钠改良法测定溶解氧。如遇干扰物质，应根据具体情况采用其他方法（详见溶解氧测定方法）。
计算
1．不经稀释直接培养的水样
BOD5（mg/L）=c1-c2
式中，c1--水样在培养前的溶解氧浓度（mg/L）； c2--水样经5d培养后，剩余溶解氧浓度（mg/L）。
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2． 经稀释后培养的水样
BOD5（mg/L）=
?C1?C2???B1?B2?f1
f2式中，B1---稀释水（或接种稀释水）在培养前的溶解氧（mg/L）； B2--稀释水（或接种稀释水）在培养后的溶解氧（mg/L）； f1--稀释水（或接种稀释水）在培养液中所占比例； f2--水样在培养液中所占比例。
注：f1 、f2的计算：例如培养液的稀释比为3%，即3份水样，97份稀释水，则f1=0.97，f2=0.03。 精密度与准确度
三个实验室分析含5mg/L葡萄糖的统一分发标准液的BOD5值，实验室内相对标准偏差为5.6%；实验室间相对标准偏差为32%。
三个实验室分析含300mg/L葡萄糖（BOD5为210 mg/L）的统一分发标准液的BOD5值，实验室内相对标准偏差为2.1%；实验室间相对标准偏差为2.1%。 注意事项
（1） 水中有机物的生物氧化过程，可分为两个阶段。第一阶段为有
机物中的碳和氢，氧化生成二氧化碳和水，此阶段称为碳化阶段。完成碳化阶段在20℃大约需要20d左右。第二阶段为含氮物质及部分氨，氧化为亚硝酸盐及硝酸盐，称为硝化阶段。完成硝化阶段在20℃时需要约100天。因此，一般测定水样BOD5时，硝化作用很不显著或根本不发生硝化作用。但对于生物处
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理池的出水，因其中含有大量的硝化细菌。因此，在测定BOD5时也包括了部分含氮化合物的需氧量。对于这样的水样，如果我们只需要测定有机物降解的需氧量，可以加入硝化抑制剂，抑制硝化过程。为此目的，可在每升稀释水样中加入1ml浓度为500mg/L的丙烯基硫脲（ATU，C4H8N2S）或一定量固定在氯化钠上的2-氯代-6-三氯甲基吡啶（TCMP，Cl—C5H3N—C—CH3），使TCMP在稀释样品中的浓度约为0.5mg/L。
（2） 玻璃器皿应彻底洗净。先用洗涤剂浸泡清洗，然后用稀盐酸浸
泡，最后依次用自来水、蒸馏水洗净。
（3） 在两个或三个稀释比的样品中，凡消耗溶解氧大于2mg/L和剩
余溶解氧大于1mg/L时，计算结果时，应取其平均值。若剩余溶解氧小于1mg/L，甚至为零时，应加大稀释比。溶解氧消耗量小于2 mg/L，有两种可能，一是稀释倍数过大；另一种可能是微生物菌种不适应，活性差，或含毒物质浓度过大。这时可能出现在几个稀释比中，稀释倍数大的消耗溶解氧反而较多的现象。
（4） 为检查稀释水和接种液的质量，以及化验人员的操作水平，可
将20ml葡萄糖—谷氨酸标准溶液用接种稀释水稀释至1000ml，按测定BOD5的步骤操作。测得的BOD5的值应在180-230mg/L之间。否则应检查接种液、稀释水的质量或操作技术是否存在问题。
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（5） 水样稀释倍数超过100倍时，应预先在容量瓶中用水初步稀释
后，再取适量进行最后稀释培养。
亚硝酸盐
亚硝酸盐（NO2--N）是氮循环的中间产物，不稳定。根据水循环条件，可被氧化成硝酸盐，也可被还原成氨。亚硝酸盐可使人体正常的血红蛋白（低铁血红蛋白）氧化成为高铁血红蛋白，发生高铁血红蛋白症，失去血红蛋白在体内输送氧的能力，出现组织缺氧的症状。亚硝酸盐可于仲胺类反应生成具致癌性的亚硝胺类物质，在pH值较低的酸性条件下，有利于亚硝胺类的形成。
水中亚硝酸盐的测定方法通常采用重氮—偶联反应，使生成红紫色染料。方法灵敏、选择性强。所用重氮和偶联试剂种类较多，最常用的，前者为对氨基苯磺酰胺和对氨基苯磺酸，后者为N-（1-萘基）-乙二胺和α-萘胺。
亚硝酸盐在水中可受微生物等作用而很不稳定，在采集后应尽快进行分析，必要时以冷藏抑制微生物的影响。
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