(1)对1号猪使用____________处理，使其超数排卵，收集并选取处在____________________期的卵母细胞用于核移植。
(2)采集2号猪的组织块，用____________处理获得分散的成纤维细胞，放置于37 ℃的CO2培养箱中培养，其中CO2的作用是__________________。
(3)为获得更多基因编辑猪，可在胚胎移植前对胚胎进行______________。产出的基因编辑猪的性染色体来自________号猪。
(4)为检测病毒外壳蛋白基因是否被导入4号猪并正常表达，可采用的方法有________(填序号)。
①DNA测序 ②染色体倍性分析 ③体细胞结构分析 ④抗原—抗体杂交
解析 (1)1号猪提供卵母细胞，对其使用促性腺激素处理，可实现超数排卵。用于核移植的卵母细胞通常应发育至减数第二次分裂中期。(2)动物细胞培养前需用胰蛋白酶或胶原蛋白酶将动物组织分散成单个细胞，动物细胞培养时，培养箱中一定浓度的CO2用于维持培养液的pH。(3)采用胚胎分割技术，可获得更多的基因编辑猪。因2号猪为基因提供者，故基因编辑猪的性染色体组成与2号猪相同。(4)可通过DNA测序技术检测病毒外壳基因是否导入4号猪；采用抗原—抗体杂交技术，利用与该病毒外壳蛋白特异性结合的抗体，检测病毒外壳基因是否在4号猪体内正常表达。
答案 (1)促性腺激素 减数第二次分裂中 (2)胰蛋白酶(胶原蛋白酶) 维持培养液的pH (3)分割 2 (4)①④
6．下图是某科研所以小鼠为材料制备某抗原的单克隆抗体及研究胚胎干细胞分化条件的流程图。请回答下列相关问题：
(1)①过程需用__________________________处理以将组织块分散成单个细胞。图中选
用的A细胞一般是传代________________的细胞。图中去核卵母细胞是通过________________________法去除卵母细胞中的核得到的。
(2)胚胎干细胞在形态上的特点是__________________________。③过程需要向培养液中加入________________________________，如牛磺酸、丁酰环腺苷酸等化学物质，从而诱导胚胎干细胞向不同类型的组织细胞分化。
(3)④过程常用的生物诱导因素是________________。④过程中产生的融合细胞的类型有____________________________________(用X、Y细胞表述)。
(4)简述⑤过程中要进行哪两次筛选？
___________________________________________________。
解析 (1)动物细胞培养时，常用胰蛋白酶或胶原蛋白酶将组织块分散成单个细胞。用于核移植的供体细胞一般选用传代10代以内的细胞，以保持细胞正常的二倍体核型。核移植过程中采用显微操作法去除卵母细胞中的细胞核。(2)胚胎干细胞的形态特点是体积小、细胞核大、核仁明显。胚胎干细胞在饲养层细胞上，或在添加抑制因子的培养液中，能够维持不分化的状态。向培养液中加入分化诱导因子，如牛磺酸、丁酰环腺苷酸等化学物质时，就可以诱导胚胎干细胞向不同类型的组织细胞分化。(3)动物细胞融合常用的生物诱导因素是灭活的病毒。由X、Y细胞产生的融合细胞有X自身融合细胞、Y自身融合细胞、X—Y融合细胞。(4)单克隆抗体的制备需要进行两次筛选，第一次筛选是通过具有筛选作用的培养基筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选是通过抗原—抗体杂交筛选出能产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞。
答案 (1)胰蛋白酶或胶原蛋白酶 10代以内 显微操作 (2)体积小、细胞核大、核仁明显 分化诱导因子
(3)灭活的病毒 X自身融合细胞、Y自身融合细胞、X—Y融合细胞
(4)一次是通过具有筛选作用的培养基筛选出杂交瘤细胞，另一次是通过抗原—抗体杂交筛选出能产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞
7．青岛“崂山奶山羊乳腺生物反应器的研制”项目生产的药用蛋白具有表达效率高、成本低、安全性高、易于分离纯化的优点，可产生乙肝表面抗原及抗凝血酶Ⅲ等医药产品，造福人类。据图回答下列问题：
(1)在基因工程中，A表示________，如果直接从苏云金芽孢杆菌中获得抗虫基因，①过
程
使
用
的
酶
区
别
于
其
他
酶
的
特
点
是
________________________________________________________。
(2)在研究过程中，研究人员首先从相关基因组中获取了目的基因，并采用________________对目的基因进行扩增，然后将目的基因与质粒等载体组合形成了重组载
体。在重组载体的构建过程中需要的工具酶有
__________________________________________________________。
(3)将目的基因导入玉米(玉米是单子叶植物)受体细胞的过程中，在③过程中一般采用________________________
，
在
②
过
程
中
一
般
采
用
________________________________________。
(4)由于转基因表达产物存在于山羊的乳汁中，检测其乳汁中是否出现药用蛋白，在分子
水
平
上
的
检
测
方
法
及
结
果
是
什
么
？
________________________________________________________。
解析 (1)在基因工程中，A表示目的基因。限制酶的作用特点是一种该酶(或限制酶)只能识别一种特定的核苷酸序列，并且在特定的位点上切割DNA分子。(2)目的基因的扩增用PCR技术，然后将目的基因与载体(或质粒)组合形成重组质粒，该过程需要用到的工具酶有限制酶、DNA连接酶。(3)③过程表示目的基因导入单子叶植物细胞，一般使用基因枪法；②过程表示目的基因导入动物受体细胞(受精卵)中，一般采用显微注射法。(4)在分子水平上检测转基因山羊的乳汁中是否存在药用蛋白的方法是用相应的抗体进行抗原—抗体杂交。如果出现杂交带，表明乳汁中出现了药用蛋白；如果不出现杂交带，表明乳汁中未出现药用蛋白。
答案 (1)目的基因 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的位点切割DNA分子
(2)PCR技术 限制酶、DNA连接酶 (3)基因枪法 显微注射法
(4)从转基因山羊的乳汁中提取蛋白质，用特异性抗体进行抗原—抗体杂交；如果出现杂交带，表明乳汁中出现了药用蛋白；如果不出现杂交带，表明乳汁中未出现药用蛋白