Total 。008 8
2.2 总黄酮的含量测定
2.2.1波长的选择[42]
取槲皮素标准品适量，取槲皮素标准品适量，用甲醇溶解，稀释至适宜浓度，加1M NaAc:1M HAc(3:1)溶液3ml，再加0。1M AlCl3 溶液2ml显色后，在200-500nm波长范围内进行波长扫描，结果在430nm处有最大吸收峰。
2.2.2 槲皮素标准曲线的制备:
精密秤取120 C干燥恒重的槲皮素20mg，65%乙醇溶解后，定量转移至100ml容量瓶中，65%乙醇定容;精密移取0。5ml置10ml容量瓶中，容量瓶中，65%乙醇定容，得到标准溶液(0。1mg/ml)。准确移取标准溶液0，0。1，0。3，0。5，0。7，1。0，1。2ml，分别放入10ml容量瓶中，各加入1M NaAc:1M HAc溶液3ml，再加入0。1M三氯化铝溶液2ml。以95%乙醇稀释至刻度线，放置20min，以\\\零\\\管为空白对照，用分光光度仪在430nm波长下检测光密度，以吸光度为Y，槲皮素浓度为X进行线性回归，表明在1-12μg/ml线性良好。回归方程为:Y=0。0038X+0。0023(r=0。9991)，回归曲线见图12。
图12 20mg槲皮素65%乙醇醇溶解的标准曲线 2.2.3最佳工艺提取结果中总黄酮的含量
按照最佳的提取工艺A3B2C1 (用PH11的碱水浸泡5次，65%的乙醇沉淀)提取5g干养心菜药材粗粉，得到的溶液挥干，称量干浸膏的重量为:0。249g。干的浸膏用65%的乙醇溶解，定量转移至100ml容量瓶，65%乙醇定容;精密移取1ml置10ml容量瓶中，加入1M NaAc:1M HAc溶液3ml，再加入0。1M三氯化铝溶液2ml。以95%乙醇稀释至刻度线，放置20min，分光光度计测得A=0。477，将Y=0。477代入标准曲线方程Y=0。0038X+0。0023(r=0。9991)，得出X=0。125×10-3 g/ml，即5g干药材粉末中总黄酮的含量是0。125g。(0。125/0。249)×100%=50。2%
2.3 处方
养心菜 可溶性淀粉 2.4 养心菜胶囊的制法
分别取三个批次养心菜干药材粗粉200g。用约20倍量的PH11的NaOH碱水浸泡5次，24h/次(每次更换一次现新鲜碱液)。合并浸泡后溶液，过滤，用HCL调节PH至弱酸性。用65%的乙醇沉淀，静置过夜，弃去沉淀，得到澄清溶液浓缩至稠浸膏。
精密称取淀粉14g放入50°C烘箱烘30分钟至干，加入已制得的稠浸膏中，搅拌混合均匀，制成软材过12目筛网制粒，放置烘箱哄干，精密称取0。2g(误差不大于5%)装入胶囊。得到三个不同批次(20050501，20050502，20050503)的养心菜胶囊。
3 讨论
3.1 养心菜药材粉末经系统预试验，证明该药材含有糖类，酚类，鞣质，黄酮，可能含有生物碱，甾体皂苷
3.2 曾以槲皮素及芦丁为对照品，对养心菜药材进行了薄层定性及紫外扫描，结果证明该药中可能含有槲皮素
3.3 对槲皮素的定性，试验了不同的展开剂，以硅胶柱进行分离后再上样展开，结果在甲苯:乙酸乙酯:甲酸(8:2:1)的展开系统中，斑点分离最好，Rf值也较恰当。 3。4 正交实验结果分析得出最佳工艺条件为:A3B2C1，即用PH11的碱水浸泡5次， 加乙醇使含醇量达65%进行醇沉。
3.5 黄酮为养心菜的主要成分之一，该黄酮主要为黄酮苷元，故选槲皮素为对 照品测定其中的总黄酮的含量。本法能较好地测定养心菜中总黄酮的含量，方 法简便，准确，可作为养心菜药材及胶囊的质量指标之一。
3.6 用最佳工艺提取的养心菜中总黄酮的含量达到50。2%，符合国家新药标 准的规定:有效部位的含量占总提取物的50%以上。
第六章:养心菜胶囊的质量标准和初步稳定性研究
一，实验仪器与材料 1 实验仪器
LHH-150SD药品稳定性试验箱 上海一恒科技有限公司 LB-2D崩解时限测定仪 上海黄海药检仪器有限公司 101A-1电热鼓风干燥箱 上海市实验仪器厂 岛津SPD-10A VP高效液相色谱仪
SPD-10A VP 紫外检测器，CMB-102色谱工作站(岛津)，微孔滤膜(0。45μm) 2 实验材料
槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所，批号0081-9904，纯度为99。88%)
养心菜胶囊样品三批(批号20050501，20050502，20050503)，采用拟上市的塑料瓶装。
甲醇(色谱纯)，其他试剂均为分析纯。 二，质量标准的研究 1 性状
三批样品性状观察:本品为胶囊剂，内容物为棕色至棕褐色的颗粒:味苦 2 鉴别
取胶囊的内容物1。5g，置索氏提取器中，加100mL甲醇加热回流至无色，回收甲醇至40mL，将提取液转移至50mL量瓶中，定容，摇匀。精密吸取20mL，加入10mL20%的盐酸溶液，10mL甲醇水解1h，冷却，转移至50mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，将对照品和上述制得的溶液分别点于同一以接甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:甲酸(体积比为8:2:1)为展开剂[1]，展距11cm，取出晾干，喷以三氯化铝溶液，于105 C烘10min后置紫外灯365nm处检视，供试品溶液在对照品槲皮素相应的位置有显相同颜色的荧光斑点(有干扰色)，见图13。 图13 养心菜胶囊的薄层鉴别
注:1养心菜胶囊提取液 2槲皮素对照品液
按中国药典2000年版一部附录IL 所载方法，对试制六批样品的性状，水分，崩解时限，重金属，砷盐，微生物限度等指标进行了考察，检查项目结果见表12 3。 检查
▲水分 采用烘干法(附录IXH ) ，检测限度规定不得超过9。0%;
▲装量差异 限度规定为每粒装量与平均装量相比较，应在±10。0%以内; ▲崩解时限 崩解时间<30分钟(附录XIIA )，经稳定性试验考察，检查 结果均符合要求。
▲重金属按药典【重金属】检查项下二法(附录IXE ) ，重金属 4。1。实验条件 色谱柱:SHIM-PACK VP C18(250mm×4。6mm，10μm) 流动相:甲醇-0。4%磷酸(55:45); 流速:1。0mL●min-1; 检测波长:370nm; 进样量:20μL。 4。2 对照品溶液的配制 精密称取对照品3。04mg，置甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密移取6mL至50mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得含槲皮素7。296μg●mL-1的对照品溶液。 4。3 供试品溶液的配制 精密称取养心菜胶囊内容物1。5g，置索氏提取器中，加100mL甲醇加热回流至无色，回收甲醇至40mL，将提取液转移至50mL量瓶中，定容，摇匀。精密吸取20mL，加入10mL20%的盐酸溶液，10mL甲醇水解1h，冷却，转移至50mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜过滤(0。45μm)，即得。 4。4 养心菜胶囊水解时间的确定 取其内容物3。0g，精密称定，按\\\第二章2。3。4\\\项下同法操作。结果水解1h与1。5h槲皮素的量最基本相同，因此，确定水解时间为1h。 4。5 标准曲线的制备 精密称取槲皮素对照品3。04mg，置于50mL量瓶中，加入甲醇溶液并稀释至刻度，摇匀，精密吸取上述对照品溶液1。0，2。0，4。0，6。0，10。0mL至50mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，按\\\。1\\\项下色谱条件进样，以对照品浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=40386X-14138，r=0。9991，槲皮素在1。216～12。16μg●mL-1范围内呈良好的线性关系。 4。6 系统适应性实验 按\\\。1\\\项下的色谱条件下分别进样20μL对照品溶液和供试品溶液，槲皮素的保留时间为15。8min左右，理论塔板数为7645。4，主成分和相邻杂质峰得到良好的分离，分离度大于5，结果令人满意。对照品和供试品的色谱图见图14。 A C 图14 槲皮素对照品和样品的色谱图 A-槲皮素对照品;C-养心菜胶囊;1-槲皮素 4。7 精密度实验 取上述槲皮素对照品溶液20μL，注入液相色谱仪，连续进样5次，依法测定，结果为1。237μg·mL-1，1。227μg·mL-1，1。223μg·mL-1，1。195μg·mL-1，1。192μg·mL-1，RSD=1。66%。 4。8 稳定性实验 将同一供试品溶液在室温下考察10h，每间隔一定时间进样，共测定5次，结果分 别为0。261 mg●g-1，0。264 mg●g-1，0。258 mg●g-1，0。263 mg●g-1，0。257 mg●g-1，RSD为1。16%，表明供试品溶液在24h内稳定。 4。9 重现性实验 取同一批号胶囊样品5份，按样品测定法测定，测得槲皮素平均含量为0。257mg●g-1，RSD为1。84%。 4。10 回收率实验 精密称取已测含量(0。261mg●g-1)的养心菜胶囊内容物0。75g，加入定量的对照品溶液，按样品测定法测定，平均回收率为100。77%，RSD为1。44%(n=6)。见表9。 表9 养心菜胶囊中槲皮素的回收率实验结果 样品量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /% 0。1308 0。1316 0。1321 0。1301 0。1319 0。1305 0。1182 0。1182 0。1204 0。1204 0。1346 0。1346 0。2516 0。2468 0。2556 0。2498 0。2685 0。2732 101。04 98。80 101。23 99。72 100。75