23. 写出青霉素G的分子结构式，并说明与其理化性质之间的关系及存在问题，以及半合
成青霉素改进的机理是什么？
1不溶于水，溶于醋酸丁酯○2其钠盐和钾盐溶于水○3水溶液在室温（1）青霉素的理化性质：○
4用粉针，注射前新鲜配制 下易分解○
1.过敏反应○2.不耐酸，不可口服○3.只对G+菌有效，抗菌谱窄○4.不耐酶，产生（2）存在问题：○
耐药性
ONH1耐酸原因：是由于青霉素V侧链上的苯氧基具有吸电子作用，使羰基氧原 (3)改进机理：○SHH子上的孤电子对作为亲核试剂进攻β-内酰胺环的能力减弱的结果
2耐酶原因：在6位侧链酰胺基上引入具有较大空间位阻的基团阻止药物与酶的活性中心作COOH○
OH用，保护药物分子中的β-内酰胺环
3广谱的半合成青霉素：在酰基α-位上引入极性亲水性基团-NH2、-COOH、-SO3H等侧链○
上的羧基、氨基是产生对革兰氏阴性菌活性的重要基团。 24. β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸作用机理是什么？如何应用？ （1）作用机理：
从化学结构上来看克拉维酸是由β-内酰胺和氢化异噁唑并合而成，在氢化异噁唑氧原子的旁边有一个sp2杂化的碳原子，形成乙烯基醚结构，C-6已无酰胺侧链存在， β-内酰胺环周围的立体位阻比青霉素要小得多，因此，极易受到β-内酰胺酶结构中亲核基团的进攻。克拉维酸遇亲核试剂进攻β-内酰胺环时，可导致其β-内酰胺环开环，形
成亚胺结构，再经互变异构生成克拉维酸的异构体。
正是这种高度不稳定性决定了克拉维酸是β-内酰胺酶的不可逆抑制剂。它能对β-内酰胺酶的活性部位如羟基或氨基进行不可逆酰化。使β-内酰胺酶彻底失活，因此可以说克拉维酸是一种自杀机制的酶抑制剂。
本品仅有微弱的抗菌活性，但可与多数β-内酰胺酶牢固结合，生成不可逆的结合物，是有效的β-内酰胺酶抑制剂，对无论是革兰阳性菌或革兰阴性菌产生的β-内酰胺酶均有效。
（２）应用方法：常与青霉素类药物配伍使用，提高疗效。
细胞工程
植物细胞
1体细胞再生○2愈伤组织再生 1. 植物组织再生的途径：○
2. 植物愈伤组织：脱分化后的植物细胞经过细胞分裂，产生无组织、无明显极性的松散细
胞团（细胞排列疏松、无规则）
3. 细胞工程制药：是细胞工程技术在制药工业方面的应用
4. 细胞工程：是指应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的理论与方法,
按照人们的需要和设计,在细胞水平上的遗传操作,重组细胞结构和内含物,以改变生物的结构和功能，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术.
5. 褐变（酶促、非酶促）：是指食品在加工过程中或长期贮存于湿热环境下，其所含的氨
基化合物与还原糖相遇经过一系列反应生成褐色聚合物的现象 （1） 酶促褐变：由过氧化物酶引起的褐变、由酚酶引起的褐变
（2） 非酶促褐变：羰胺反应（美拉德反应）、焦糖化作用、抗坏血酸氧化褐变 6. 外植体消毒所用试剂和浓度：75%乙醇、1%NaClO4、0.1%洁尔灭
7. MS培养基：
1大量元素：NH4NO3 、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4 ○
2微量元素：○KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、
CoCl2·6H2O
3铁盐：FeSO4·7H2O、Na2-EDTA·2H2O ○
4有机物质：肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇（维生素B6）○、盐酸硫胺素（维生素B1）、
甘氨酸。
8. 人工种子构成的三大因素：人工胚乳、人工种皮、胚。 9. 毛状根培养
（1） 毛状根是由发根农杆菌含有的Ri质粒引起的。Ri质粒有两个主要功能区：
T-DNA区和Vir区。
1T-ＤＮＡ上有生长素合成基因ｔｍｓ１和ｔｍｓ２，指导ＩＡＡ的合成。○（因
此转化产生的毛状根，在培养时不需要添加外源生长素，为激素自养型）
2在通常状态下，○Ｒｉ质粒上Ｖｉｒ区的基因处于抑制状态，当发根农杆菌感染
寄主植物时，受损伤的植物细胞合成的乙酰丁香酮使Ｖｉｒ区处于抑制状态的基因被激活，产生一系列限制性核酸内切酶，在酶的切割作用下产生Ｔ－ＤＮＡ链，Ｔ－DNA进入植物细胞核内，整合进植物细胞的基因组。
3T-DNA在植物细胞中得到转录和翻译，刺激植物细胞形成毛状根 ○
（２）毛状根培养生产次级代谢产物有何优点：
1由Ri质粒转化的毛状根生长快、○激素自养型，在培养时不需要添加外源激素，
易于培养
2毛状根分化程度高，○产生次级代谢产物能力强。能大量合成某些悬浮培养的细
胞不能或者很少合成的次级代谢产物。
3通过T-ＤＮＡ改造，易于采用基因工程途径提高次级代谢产物产量 ○
10. 体外细胞培养可以传50代PH：7.2—7.4
11. 生物制药：采用现代生物技术,借助某些微生物、植物、动物生产医药品的系列工业化
生产过程
动物细胞
1. 动物细胞培养：是模拟体内生理环境使分离的动物细胞在体外生存、增殖的一门技术。
（1） 器材：培养基（氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐、辅酶、激素、生长因
子）包括天然、合成（DMEM、ＲＰＭＩ１６４０）、无血清培养基三种
（2） 取材
1胰蛋白酶溶液：水解细胞间的蛋白质，加血清终止反应○2（3） 细胞消化液：○
3传代培养时从0.25íTA消化液：解离细胞（两者常结合使用，增加效果）○
组织块消化分散得到单个细胞
（4） 离心 （５）培养
培养板用之前先浸酸（中和电荷、杀菌）→洗→消毒灭菌 2. 举例说明动物细胞培养在生物技术制药中的作用
杂交瘤技术产生单克隆抗体、病毒疫苗的生产、重组蛋白生产
3. 贴壁培养：大多数哺乳动物细胞必须附着在带适量正电荷的固体表面才能生长，属于贴
壁依赖性细胞
4. 接触抑制现象：是指由于细胞互相接触而抑制细胞运动性的现象。
5. 细胞重组：指从活细胞中分离出细胞器及其组分，在体外一定条件下将不同细胞来源的
细胞及其组分重组，使其重新装配成具有生物活性的细胞或细胞器。