分析化学实验指导书 - 图文

实验15 吸收曲线的测绘及吸收系数的测定

一、目的要求

1.掌握测定及绘制药物吸收曲线的方法。 2.了解吸收系数的测定。 二、实验原理

在紫外-可见光区,物质对光的吸收主要是分子中电子能级跃迁所致,同时伴随着分子的转动和振动能级的变化,因此电子吸收光谱一般比较简单、平缓。

紫外吸收光谱能表征化合物的显色基团和显色分子母核,作为化合物的定性依据,相同的化合物其紫外吸收光谱一定相同。

实验证明,若溶剂固定不变,化合物吸收曲线所出现的λ它们的数目也一定,从而为鉴别化合物提供了有力的依据。

根据药典规定,吸收系数是指当溶液浓度为1%,液层厚度为1cm时,指定波长的吸收度。

化合物对光的选择吸收的波长以及相应的吸收系数,是该化合物的物理常数,当已知某纯化合物在一定条件下的吸收系数后,即可由上式计算出该化合物的含量。

三、仪器及试剂

1.仪器:紫外-可见分光光度计 量瓶:100ml,10ml 吸量管:5 ml,1 ml

2. 试剂:丹皮酚、乙醇(分析纯) 3. 试液:95%乙醇 四、实验内容与步骤

取丹皮酚纯品0.1g,精密称定至100.0ml量瓶,加95%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀。精密吸取5.00ml于100ml量瓶中,加95%乙醇稀释至刻度,制成丹皮酚储备液备用。

1.吸收曲线的绘制 吸取丹皮酚储备液1.00ml于10ml量瓶内,加95%乙醇稀释至刻度。将此溶液与空白溶液(95%乙醇)分别用两个相同的吸收池盛装后,放置在仪器的比色架上,按仪器使用方法进行操作。从仪器波长范围的上限(或下限)开始,每隔10nm测量一次,在吸收峰和吸收谷处,每隔1nm测量一次,每次测量均需用空白调节100%透光率,

max

、λ

min

或λ

sh

为一定值,且

然后读取测定溶液的透光率(或吸收度),记录不同波长处的测得值。

2.吸收系数的测定 利用上述溶液,在274nm波长处测定其吸收度。 五、注意事项

1.严格按仪器的操作要求进行。

2.每调整一次波长均需用空白重新调节100%透光率。

六、数据处理

1.以波长为横坐标,以吸收度为纵坐标绘制吸收曲线。 2.按照公式E1cm?七、思考题

1.单色光不纯对于测得的吸收曲线有什么影响?

2.利用测定的百分吸收系数与药典比较,讨论产生误差的原因?

1%A,计算百分吸收系数。 C?b实验16 标准曲线法测定芦丁含量

一、目的要求

1.掌握标准曲线制备的方法。

2.掌握标准曲线法测定中药有效成分的方法。 二、实验原理

显色反应需要具备良好的重现性与灵敏性,因此必须控制反应的条件,主要是溶剂种类、试剂用量、溶液酸碱度、反应时间和显色时间等。芦丁为黄酮苷,能与Al生成黄色配合物,在NaNO2的碱性溶液中呈红色,在510nm波长处有最大吸收。据此显色反应用光度法测定芦丁, 应注意控制反应时间、显色时间以及试剂用量。

3+

OHHOOOHOgluOrha2+

OAl

O

显色法的定量方法可采用标准曲线法。 三、仪器与试剂

1.仪器:紫外-可见分光光度计 量瓶:100ml、50ml、10ml 移液管:10 ml 吸量管:1ml、5ml 2.试剂:

亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、乙醇(均为分析纯),芦丁 3.试液:

5%亚硝酸钠溶液,10%硝酸铝溶液,1mol/L氢氧化钠溶液,30%乙醇溶液,0.1mg/ml芦丁对照品,芦丁样品。

四、实验内容与步骤

1.对照品溶液的制备 精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品100mg,置100ml量瓶中,加甲醇70ml,置水浴上微热使溶解,放冷,加甲醇至刻度,摇匀。精密吸取10ml,置100ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得(每1ml中含无水芦丁0.1mg)。

2.标准曲线的制备 精密量取对照品溶液(0.1mg/ml)0.0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml,分别置于10ml量瓶中,各加30﹪乙醇使成5.0ml,各精密加入5﹪亚硝酸钠溶液0.3ml,充分摇匀,放置6min。各精密加入10﹪硝酸铝溶液0.3ml,充分摇匀,放置6min。各加1mol/L氢氧化钠溶液4.0ml,用蒸馏水稀释至刻度,充分摇匀,放置15min,于分光光度计上,在510nm波长下测定吸收度。以吸收度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。

3.样品测定 精密量取芦丁样品液(0.1mg/ml)3.0ml,置10ml量瓶中,按标准曲线制备项下自“各加30﹪乙醇使成5.0ml,??”起依法操作直至测定出样品的吸收度。

五、注意事项

1.加入各种试剂的顺序应按操作方法进行。

2.本显色反应为配位反应,反应速度较慢,故每加入一种试剂后应充分振摇,以利反应完全。

六、数据处理

1.根据测得的对照品的数据,绘制A~C标准曲线或计算回归方程。

2.根据测得的样品的数据,从标准曲线上读出或由回归方程计算出样品溶液中芦丁的

重量(mg),按下式计算:

无水芦丁(﹪)=七、思考题

1.试述标准曲线法的优点。 2.影响显色反应有哪些因素?

标准曲线上读出的浓度(mg/ml)?10ml?100%

取样量(ml)?样品的标示浓度(mg/ml)实验17 维生素B12注射液的定性鉴别、定量分析

一、目的要求

1.熟悉紫外分光光度计的操作方法

2.掌握定性鉴别的方法和吸收系数法的定量方法。 3.了解含量测定、标示量的百分含量及稀释度等计算方法。 二、实验原理

维生素B12是一类含钴的卟啉类化合物,具有很强的生理作用,可用于治疗恶性贫血等疾病。维生素B12不是单一的一种化合物,共有七种。通常所说的维生素B12是指其中的氰钴素,为深红色吸湿性结晶,制成注射液的标示含量有每毫升含维生素B12 50、100或500?g等规格。

维生素B12的水溶液在278±1nm、361±1nm与550±1nm三波长处有最大吸收。药典规定在361nm波长处的吸收度与550nm波长处的吸收度比值在3.15~3.45范围内为定性鉴别

1%的依据。361nm处的吸收峰干扰因素少,药典规定以361±1nm处吸收峰的百分吸收系数E1cm值(207)为测定注射液实际含量的依据。

三、仪器与试剂

1.仪器:紫外-可见分光光度计 石英吸收池 吸量管:5ml 量瓶:10ml

2.试剂:维生素B12注射液

3.试液:100?g/ml维生素B12注射液 四、实验内容与步骤

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