实验15 吸收曲线的测绘及吸收系数的测定
一、目的要求
1．掌握测定及绘制药物吸收曲线的方法。 2．了解吸收系数的测定。 二、实验原理
在紫外-可见光区，物质对光的吸收主要是分子中电子能级跃迁所致，同时伴随着分子的转动和振动能级的变化，因此电子吸收光谱一般比较简单、平缓。
紫外吸收光谱能表征化合物的显色基团和显色分子母核，作为化合物的定性依据，相同的化合物其紫外吸收光谱一定相同。
实验证明，若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的λ它们的数目也一定，从而为鉴别化合物提供了有力的依据。
根据药典规定，吸收系数是指当溶液浓度为1％，液层厚度为1cm时，指定波长的吸收度。
化合物对光的选择吸收的波长以及相应的吸收系数，是该化合物的物理常数，当已知某纯化合物在一定条件下的吸收系数后，即可由上式计算出该化合物的含量。
三、仪器及试剂
1．仪器：紫外-可见分光光度计 量瓶：100ml，10ml 吸量管：5 ml，1 ml
2． 试剂：丹皮酚、乙醇（分析纯） 3． 试液：95％乙醇 四、实验内容与步骤
取丹皮酚纯品0.1g，精密称定至100.0ml量瓶，加95％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取5.00ml于100ml量瓶中，加95%乙醇稀释至刻度，制成丹皮酚储备液备用。
1．吸收曲线的绘制 吸取丹皮酚储备液1.00ml于10ml量瓶内，加95％乙醇稀释至刻度。将此溶液与空白溶液（95％乙醇）分别用两个相同的吸收池盛装后，放置在仪器的比色架上，按仪器使用方法进行操作。从仪器波长范围的上限（或下限）开始，每隔10nm测量一次，在吸收峰和吸收谷处，每隔1nm测量一次，每次测量均需用空白调节100％透光率，
max
、λ
min
或λ
sh
为一定值，且
然后读取测定溶液的透光率（或吸收度），记录不同波长处的测得值。
2．吸收系数的测定 利用上述溶液，在274nm波长处测定其吸收度。 五、注意事项
1.严格按仪器的操作要求进行。
2.每调整一次波长均需用空白重新调节100％透光率。
六、数据处理
1．以波长为横坐标，以吸收度为纵坐标绘制吸收曲线。 2．按照公式E1cm?七、思考题
1．单色光不纯对于测得的吸收曲线有什么影响？
2．利用测定的百分吸收系数与药典比较，讨论产生误差的原因？
1%A，计算百分吸收系数。 C?b实验16 标准曲线法测定芦丁含量
一、目的要求
1．掌握标准曲线制备的方法。
2．掌握标准曲线法测定中药有效成分的方法。 二、实验原理
显色反应需要具备良好的重现性与灵敏性,因此必须控制反应的条件,主要是溶剂种类、试剂用量、溶液酸碱度、反应时间和显色时间等。芦丁为黄酮苷,能与Al生成黄色配合物,在NaNO2的碱性溶液中呈红色,在510nm波长处有最大吸收。据此显色反应用光度法测定芦丁, 应注意控制反应时间、显色时间以及试剂用量。
3＋
OHHOOOHOgluOrha2+
OAl
O
显色法的定量方法可采用标准曲线法。 三、仪器与试剂
1．仪器：紫外-可见分光光度计 量瓶：100ml、50ml、10ml 移液管：10 ml 吸量管：1ml、5ml 2．试剂：
亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、乙醇（均为分析纯），芦丁 3．试液：
5%亚硝酸钠溶液，10%硝酸铝溶液，1mol/L氢氧化钠溶液，30%乙醇溶液，0.1mg/ml芦丁对照品，芦丁样品。
四、实验内容与步骤
1．对照品溶液的制备 精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品100mg，置1