度分布均匀的理想的圆形斑点。对于一个理想的斑点，用线性扫描即可得到满意的结果；但对一个不规则的斑点，若用线性扫描法就不能给出准确的测量结果。锯齿扫描是采用一个窄光束（1.25mm×1.25mm）对x轴方向及y轴方向进行两维扫描，在这个光束内浓度的变化是可以忽略的，于是可得到斑点浓度的准确含量。光束摆幅最大为30 mm，因此对一个有紫外吸收的斑点，虽然不易被肉眼看见，但也能准确测定其含量。
校正曲线线性化 在薄层光密度法中，由于光束被薄层板上的吸附剂所散射，致使测定的吸光度不与物质含量成正比。不论使用反射法或透射法，均出现物质的含量越高，测定的吸光度偏离线性关系越远的现象。仪器根据Kubelka—Munk的理论方程式，采用“校正曲线线性化器”，将吸光度和物质含量关系以电学方法使其线性化。来自光电倍增管的信号先被一对数放大器转换为吸光度值，然后被校正曲线线性化器程序线性化，以便正比于物质的含量，线性化后的吸光度能读出，并且它的积分值能通过模拟积分器积分。
背景补偿 采用背景补偿可以使吸收光信号在积分起始点处稳定在基线水平位置。在积分范围内光束扫过斑点两端时，可连续补偿背景至基线水平，因此在测量斑点的吸光度时，可得到正确结果。
2、仪器
CS系列双波长薄层色谱扫描仪 玻璃板 10×20cm
微量注射器（或定量毛细管） 10 μL 展开缸 3、试剂
硅胶 色谱用180一200目 羧甲基纤维素
甲基红 分析纯 0.1％ (60%乙醇液)． 甲基橙 指示剂规格 0.06% (水溶液)。 甲基黄 指示剂规格 0.06% (95%乙醇液)。
试 样 内含甲基红0.1％，甲基橙0.06%和甲基黄0.06% 无水乙醇 分析纯。
展开剂 正丁醇(无水)：乙醇(无水)：环己烷(无水)(3︰1︰4) （四）实验内容和步骤 1、点样
取一块已制好的硅胶板(10 × 20 cm)，用微量注射器(或用定量毛细管)吸取甲基橙、 甲基红、甲基黄及试样各1μL，分别点在硅胶板上，如图所示。点样间距为1—1.5cm。注意每次吸取溶液前，微量注射器均应用无水乙醇及所取溶液分别洗涤三次。
2、展开
薄层色谱需在密闭容器中进行。本实验采用倾斜上行法展开斑点。取l0 mL展开剂放入展开缸中，将已点好样的硅胶板斜插人展开槽中，盖好玻璃板，展开槽应尽量放在水平位置。约半小时左右，观察待测组分的斑点是否已与其他组分分开，一般斑点间隔2cm左右即可方便地进行测量。取出硅胶板在通风柜中将展开剂挥发至干，方可进行测定。
3、测量
在薄层扫描仪上扫描测定，样品波长λs＝510nm，参比波长λR＝690nm，测量样品和 对照品斑点吸光度积分值，并计算含量。
（五）思考题
解释甲基橙、甲基红及甲基黄在硅胶板上以正丁醇、无水乙醇和环己烷混合物为展 开剂时，各组分的位置，并说明Rf值不同的原因。
实验30 菠菜叶色素的分离
(综合性实验)
（一）目的要求
1、进一步掌握柱色谱和薄层色谱的操作。 2、熟悉用色谱法对天然产物进行分离和提取。 （二）实验原理
植物绿叶中含有多种天然色素，最常用的有胡萝卜素、叶绿素的叶黄素等，其结构为：