分析化学实验指导书 - 图文

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3.荧光强度测定:根据上述激发光谱和发射光谱扫描结果,确定一组波长(?em和?em),

使之对二组分都有较高的灵敏度,并在此组波长下测定前述标准系列各溶液和未知溶液的荧光强度If。

五.仪器操作步骤:

注意:1、工作曲线的测定和未知液测定时应保持仪器设置参数的一致; 2、开机时先开氙灯再开计算机;关机时先关计算机再关主机电源。

六、结果处理:

以各标准溶液的If为纵坐标,分别以邻-羟基苯甲酸或间-羟基苯甲酸的浓度为横坐标制作工作曲线。根据pH=5.5的未知液的荧光强度,可以从邻-羟基苯甲酸的工作曲线上确定邻-羟基苯甲酸在未知液中的浓度;根据pH=12时未知液的荧光强度与pH=5.5时未知液的荧光强度的差值,可从间-羟基苯甲酸的工作曲线上确定未知液中间-羟基苯甲酸的浓度。

七、思考题:

maxmaxmax1、?maxex、?em各代表什么?为什么对某种组分其?ex和?em处的荧光强度应基本相同?

2、从实验可以总结出几条影响物质荧光强度的因素?

实验26 柱色谱法测定氧化铝活度

(一)目的要求

1、掌握吸附柱色谱制备、洗脱等一般操作方法。 2、熟悉用柱色谱法测定氧化铝的活度。 (二)实验原理

1、氧化铝的吸附能力等级测定方法较常用的为Brockmann法,观察氧化铝对多种偶氮染料的吸附情况衡量氧化铝的活度。所采用的染料按吸附性递增的排列顺序为:偶氮苯(1号)﹤对甲氧基偶氮苯(2号)﹤苏丹黄(3号)﹤苏丹红(4号)﹤对氨基偶氮苯(5号)﹤对羟基偶氮苯(6号)。他们的结构和溶液颜色如下:

NNNNOCH3

偶氮苯(淡黄色) 对甲氧基偶氮苯(淡黄色)

HOH3CNNNHNN

苏丹黄(橙色) 苏丹红(紫红色)

NNNH2NN

OH

对氨基偶氮苯(黄色) 对羟基偶氮苯(黄色)

2、根据上述染料的吸附情况,可将氧化铝的活度分为五级,吸附能力越小,活度级别越高。

活度级别 I 染料位置 II III IV V 柱上层 柱下层 流出液 2 1 3 2 1 4 3 2 5 4 3 6 5 4 (三)仪器与试剂

1、色谱柱(长10cm,内径1.5cm)2根 2、带橡皮套的玻璃棒1根 3、小漏斗1个 4、10mL量筒2个 5、脱脂棉及圆形滤纸若干

6、六种染料溶液 偶氮苯、对甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、对氨基偶氮苯、对 羟基偶氮苯各20mg,分别溶于10mL纯的无水苯中,加入适量石油醚使成50mL。

7、苯和石油醚混合液(1︰4) 8、氧化铝样品(活度待测) (四)实验内容和步骤

1、色谱柱的制备 准备2根洁净干燥的高10cm,内径1.5cm的色谱管,于管底垫一

层脱脂棉(注意不要太紧),垂直夹在滴定台上,然后把待测氧化铝通过一干燥小漏斗,仔细装入色谱管中至高达6cm处(约6g),用一带橡皮套的玻璃棒轻轻地均匀地敲打至氧化铝高度达约5cm处,然后在其表面覆盖以圆形滤纸一层即得。

2、氧化铝活度的测定

①打开活塞,于1号色谱柱中加入1、2号染料溶液各5mL(预先混匀)等溶液全部通过后,立即以干燥的苯和石油醚混合液(1︰4)淋洗色谱柱,控制流速为20~30滴/min。

②于2号色谱柱中加入2、3号染料溶液各5mL(预先混匀),进行同样的实验。 ③观察和记录各色谱柱中染料的颜色和位置,判断氧化铝的活度级别。 (五)注意事项

1、用于配制染料溶液的石油醚及苯必须是无水的(可用无水硫酸铜检查)。若市售 商品含水量太大,则需预先处理,否则影响结果的准确性。

2、脱脂棉用量要少,要平整,但不要塞得太紧,以免流速太慢。

3、色谱柱必须均匀紧密,表面应力求水平,染料溶液应小心加入地,勿使氧化铝表 面受到扰动。

4、倒入染料液时,注意先把活塞打开,以利空气排出。 5、流出液用小烧杯收集,倒入回收瓶中。 6、整个实验必须无水操作 (六)思考题

1、根据各染料的结构,说明他们的极性顺序。

2、如1号色谱管流出液为淡黄色,柱下层为淡黄色;2号色谱管流出液为无色,柱 下层为淡黄色,柱上层为橙黄色。此氧化铝活度为几级?

实验27 纸色谱法分离氨基酸

(一)目的要求

1、掌握纸色谱的操作方法。

2、熟悉纸色谱法在分离鉴定方面的应用。 (二)实验原理

氨基酸为无色化合物,利用它们与水合茚三酮显现蓝紫色(脯氨酸显黄色除外),可将

分离的的氨基酸斑点显色,其反应机理如下:

OOOHO+H2OOHOO

茚三酮 水合茚三酮

OOOH+H2NOHCHCOOHRNCH2R+H2O+CO2OOOOONCH2RNCHRNH2+RCHOOOHONH2OOHOOHO+HON+H2OOHOOHO

(蓝紫色)

(三)仪器及试剂

1、玻璃展开筒 150×300mm

2、色谱用滤纸(纸条) 98×240 mm(可用定性滤纸代替) 3、毛细管 2μL 4、喷雾瓶 50 mL 5、空压机

6、展开剂 正丁醇︰甲酸︰水(60︰12︰8)

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