x
3.荧光强度测定：根据上述激发光谱和发射光谱扫描结果，确定一组波长（?em和?em），
使之对二组分都有较高的灵敏度，并在此组波长下测定前述标准系列各溶液和未知溶液的荧光强度If。
五．仪器操作步骤：
注意：1、工作曲线的测定和未知液测定时应保持仪器设置参数的一致； 2、开机时先开氙灯再开计算机；关机时先关计算机再关主机电源。
六、结果处理：
以各标准溶液的If为纵坐标，分别以邻-羟基苯甲酸或间-羟基苯甲酸的浓度为横坐标制作工作曲线。根据pH=5.5的未知液的荧光强度，可以从邻-羟基苯甲酸的工作曲线上确定邻-羟基苯甲酸在未知液中的浓度；根据pH=12时未知液的荧光强度与pH=5.5时未知液的荧光强度的差值，可从间-羟基苯甲酸的工作曲线上确定未知液中间-羟基苯甲酸的浓度。
七、思考题：
maxmaxmax1、?maxex、?em各代表什么？为什么对某种组分其?ex和?em处的荧光强度应基本相同？
2、从实验可以总结出几条影响物质荧光强度的因素？
实验26 柱色谱法测定氧化铝活度
（一）目的要求
1、掌握吸附柱色谱制备、洗脱等一般操作方法。 2、熟悉用柱色谱法测定氧化铝的活度。 （二）实验原理
1、氧化铝的吸附能力等级测定方法较常用的为Brockmann法，观察氧化铝对多种偶氮染料的吸附情况衡量氧化铝的活度。所采用的染料按吸附性递增的排列顺序为：偶氮苯（1号）﹤对甲氧基偶氮苯（2号）﹤苏丹黄（3号）﹤苏丹红（4号）﹤对氨基偶氮苯（5号）﹤对羟基偶氮苯（6号）。他们的结构和溶液颜色如下：
NNNNOCH3
偶氮苯（淡黄色） 对甲氧基偶氮苯（淡黄色）
HOH3CNNNHNN
苏丹黄（橙色） 苏丹红（紫红色）
NNNH2NN
OH
对氨基偶氮苯（黄色） 对羟基偶氮苯（黄色）
2、根据上述染料的吸附情况，可将氧化铝的活度分为五级，吸附能力越小，活度级别越高。
活度级别 I 染料位置 II III IV V 柱上层 柱下层 流出液 2 1 3 2 1 4 3 2 5 4 3 6 5 4 （三）仪器与试剂
1、色谱柱（长10cm,内径1.5cm）2根 2、带橡皮套的玻璃棒1根 3、小漏斗1个 4、10mL量筒2个 5、脱脂棉及圆形滤纸若干
6、六种染料溶液 偶氮苯、对甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、对氨基偶氮苯、对 羟基偶氮苯各20mg，分别溶于10mL纯的无水苯中，加入适量石油醚使成50mL。
7、苯和石油醚混合液（1︰4） 8、氧化铝样品（活度待测） （四）实验内容和步骤
1、色谱柱的制备 准备2根洁净干燥的高10cm，内径1.5cm的色谱管，于管底垫一
层脱脂棉（注意不要太紧），垂直夹在滴定台上，然后把待测氧化铝通过一干燥小漏斗，仔细装入色谱管中至高达6cm处（约6g），用一带橡皮套的玻璃棒轻轻地均匀地敲打至氧化铝高度达约5cm处，然后在其表面覆盖以圆形滤纸一层即得。
2、氧化铝活度的测定
①打开活塞，于1号色谱柱中加入1、2号染料溶液各5mL（预先混匀）等溶液全部通过后，立即以干燥的苯和石油醚混合液（1︰4）淋洗色谱柱，控制流速为20～30滴/min。
②于2号色谱柱中加入2、3号染料溶液各5mL（预先混匀），进行同样的实验。 ③观察和记录各色谱柱中染料的颜色和位置，判断氧化铝的活度级别。 （五）注意事项
1、用于配制染料溶液的石油醚及苯必须是无水的（可用无水硫酸铜检查）。若市售 商品含水量太大，则需预先处理，否则影响结果的准确性。
2、脱脂棉用量要少，要平整，但不要塞得太紧，以免流速太慢。
3、色谱柱必须均匀紧密，表面应力求水平，染料溶液应小心加入地，勿使氧化铝表 面受到扰动。
4、倒入染料液时，注意先把活塞打开，以利空气排出。 5、流出液用小烧杯收集，倒入回收瓶中。 6、整个实验必须无水操作 （六）思考题
1、根据各染料的结构，说明他们的极性顺序。
2、如1号色谱管流出液为淡黄色，柱下层为淡黄色；2号色谱管流出液为无色，柱 下层为淡黄色，柱上层为橙黄色。此氧化铝活度为几级？
实验27 纸色谱法分离氨基酸
（一）目的要求
1、掌握纸色谱的操作方法。
2、熟悉纸色谱法在分离鉴定方面的应用。 （二）实验原理
氨基酸为无色化合物，利用它们与水合茚三酮显现蓝紫色（脯氨酸显黄色除外），可将
分离的的氨基酸斑点显色，其反应机理如下：
OOOHO+H2OOHOO
茚三酮 水合茚三酮
OOOH+H2NOHCHCOOHRNCH2R+H2O+CO2OOOOONCH2RNCHRNH2+RCHOOOHONH2OOHOOHO+HON+H2OOHOOHO
（蓝紫色）
（三）仪器及试剂
1、玻璃展开筒 150×300mm
2、色谱用滤纸（纸条） 98×240 mm（可用定性滤纸代替） 3、毛细管 2μL 4、喷雾瓶 50 mL 5、空压机
6、展开剂 正丁醇︰甲酸︰水（60︰12︰8）