2．做阿斯匹林、贝诺酯水解试验时，应在水浴中进行，不能直火加热，否则水解产物会因温度过高发生氧化，而影响试验结果。
实验六 阿司匹林制剂容量分析的综合性实验
【实验目的】
1. 掌握两步滴定法测定阿司匹林片剂的含量的原理、操作和计算。 2. 掌握滴定液的标定、F值的计算。 3. 掌握天平和容量仪器的正确操作。
4. 熟悉阿司匹林原料、各种制剂，生物样本中的阿司匹林的测定方法，以及这些方法的特点和应用范围。
【实验原理】
见ppt。 【实验材料】
试药：阿司匹林普通片或肠溶片。
仪器：分析天平，50ml酸式/碱式滴定管，恒温水浴锅，电炉。 【实验内容】
1、查阅有关文献资料，了解阿司匹林的各种含量测定方法，写出综述文章。
2、以小组（4～5人）为单位，派代表对文献内容进行交流、讨论。每组介绍2～3个方法，内容包括原理、操作、计算与方法特点，及其适用范围，提出自己认为合适的含量测定方法。
3、根据各自的任务进一步查阅有关文献，详细摘录实验操作方法，包括标准溶液、试药的配制、标定方法，阿司匹林的含量测定方法，以及所需实验仪器。
4、每组完成样品的含量测定工作（包括仪器的清洗，标准滴定液的配制、标定，试剂的配制，仪器选用与调试，含量测定与计算），写出实验报告。
5、实验报告内容包括：题目、原理、主要仪器、操作方法、原始记录、测定结果、分析讨论。 【实验说明】
1、注意电子天平的规范操作，采用减重秤量法。
2、酸式滴定管滴定时别使活塞松动，碱式滴定管别使气泡进入管路。
3、样品混悬液从研钵转移至容量瓶时应借助小漏斗，并用相应溶剂分次洗涤研钵，洗液并入滤液中，使内容物定量转移至量瓶。
4、过滤用漏斗、烧杯、移液管必须干燥，过滤过程中应注意醇溶液的挥发。
5、根据需用量，自行配制中性乙醇（对所用酚酞指示液显中性）。方法：取乙醇适量，加酚酞指示剂1
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滴，用滴定剂氢氧化钠滴定至显粉红色，即得，另用新配。 6、样品测定与空白试验平行进行。 7、反应物水浴加热后采用流水迅速冷却。
8、标定与测定各平行分析2?3份，计算两次测定的间差或三次测定的RSD。
实验七 有关物质的色谱检查
【实验目的】
1、掌握HPLC法测定原料药中有关物质的原理与限量计算方法。 2、掌握TLC法测定原料药中有关物质的原理与测定方法。 3、熟悉高效液相色谱仪的工作原理和操作方法。 4、熟悉粘合薄层板的制备与活化。
5、了解高效液相色谱仪的主要部件和日常维护 【实验原理】
见ppt。 【实验材料】
试药：硅胶H，硅胶GF254，对二甲氨基苯甲醛，盐酸普鲁卡因注射液，马来酸氯苯那敏及氧氟沙星原料药。
仪器：高效液色谱仪，二极管阵列检测器，ODS 柱，层析缸，玻板，喷雾器，点样用微量注射器或微量吸管。 【实验内容】
（一）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸检查
本品为盐酸普鲁卡因加氯化钠适量使成等渗的灭菌水溶液。为无色的澄明液体。
[检查] 对氨基苯甲酸 精密量取本品，加乙醇制成每1mL中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。另取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1mL中含30μg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录A）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于含有羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14：1：1：4）为展开剂，展开后，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2%对二甲
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氨基苯甲醛乙醇溶液100mL，加冰醋酸5mL制成）喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深。 （二）马来酸氯苯那敏有关物质检查
本品为N，N-二甲基-g（4-氯苯基）-2-吡啶丙胺顺丁烯二酸盐。
[检查] 有关物质 取本品，加氯仿制成每1mL中含50mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加氯仿稀释成每1mL中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（附录A）试验，吸取上述两种溶液各10mL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-稀醋酸（5：3：2）为展开剂，展开后，晾干，在紫外光灯（254nm）下检视。供试品溶液除显氯苯那敏与马来酸两个斑点外，如显其他杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。 （三）氧氟沙星有关物质的检查
本品为（±）-9-氟-2，3-二氢-3-甲基-10-（4-甲基-1-呱嗪基）-7-氧代-7H-吡啶并[1，2，3-de]-[1，4]苯并恶嗪-6-羧酸。为白色或微黄色结晶性粉末。 [检查] 有关物质 照高效液相色谱法测定（附录B）。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05mol/L枸橼酸溶液-乙腈（79：21）用三乙胺调节pH值至4.0为流动相；流速约为每分钟1.2mL；检测波长为293nm。理论板数按氧氟沙星峰计算应不低于2500。
测定法 取本品，加流动相制成每1mL中含1mg的溶液，作为供试品溶液；量取适量，加流动相稀释成每1mL中含0.05mg的溶液，作为对照溶液。取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主
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成分色谱峰的峰高为满量程的20%；再取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍，供试品溶液色谱图上各杂质峰面积的和不得大于对照溶液色谱图主峰面积的1/5。并用二极管阵列检测器检测样品峰的纯度。 【实验说明】
1.薄层色谱分析中为使斑点集中，点样应分次点加，每次点加后，俟其自然干燥、低温烘干或经温热气流吹干。
2.薄层板放入层析缸时，薄板底边应水平浸入展开剂中，待展开至溶剂前沿距玻板顶端2～3cm时，取出薄层板。
3.展开缸必须密封，为使缸内展开剂饱和，薄层板放入前可在层析缸内壁贴滤纸条，让滤纸条一端浸入展开剂中，密封层析缸，待系统平衡后再将薄层板放入，展开。 4.HPLC测定中流动相使用前必须经过滤膜过滤和超声脱气。
5.HPLC测定完毕后，必须用水冲洗系统30分钟以上，然后再用甲醇冲洗。更换流动相时必须先停泵，待压力降至零时，将滤头提出液面，置另一流动相溶液中。
实验八 槐花药材中总黄酮的质量分析
一．实验目的
1.掌握比色法测定槐花药材中总黄酮含量的方法及原理。 2. 熟悉槐花药材的薄层色谱鉴别法。 二．实验原理
槐花为豆科植物Sophora japonica L的干燥花及花蕾。夏季花开放或花蕾形成时采收，及时干燥，除去枝，梗及杂质。前者习称“槐花”，后者习称“槐米”。槐花药材的主要有效成份是黄酮类化合物，其中芦丁的含量最高，所以槐花药材的鉴别及含量测定均以芦丁为指标成分。
芦丁（C27H30O16,610.51）
黄酮类化合物在碱性条件下与铝盐发生配位反应，生成红色的配位化合物，使得最大吸收波长红移至可见光区，且具有较高的吸收系数。黄酮类与铝盐的配位反应是定量完成的，因此可采用比色法测定槐花
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