分析化学实验指导新版

第九章 荧光分析法

实验二十九 荧光法测定硫酸奎尼丁的含量

一、目的与要求

1. 掌握荧光法的定量分析方法(标准曲线法)。 2. 熟悉930型荧光光度计的使用方法。

二、方法提要

奎尼丁为抗疟药奎宁得右旋体,属生物碱类抗心律失常药,其结构如下:

基于本品分子具有喹啉环结构,可产生荧光这一特性,在实验中用930型荧光光度计测量其荧光强度,由标准曲线法求出本样品的含量。

三、仪器及试剂

1.930型荧光光度计; 2.硫酸奎尼丁对照品; 3.硫酸奎尼丁。

四、操作步骤

1.标准溶液的制备 精密吸取用硫酸溶液(0.05mol/L)配制的硫酸奎尼丁标准液(100ug/ml)1.00、2.00、3.00、4.00及5.00ml容量瓶中,各加硫酸溶液(0.05mol/L)稀释至刻度,摇匀,待测。

2.样品溶液的制备 精密称取奎尼丁样品约50mg置于50ml容量瓶中,用硫酸溶液(0.05mol/L)溶解并稀释至刻度,摇匀。吸取此溶液0.50ml,于100ml容量瓶内,用硫酸溶液(0.05mol/L)溶解并稀释至刻度,摇匀,待测。

3.测定

(1)选择合适的荧光滤光片:将激发光滤光片(暂用360nm的)置于被测液前面的光径中,将波长稍长于360nm的滤光片放在被测液后的光径中,接通仪器电源开关,打开样品室箱盖,旋动调零电位器,使电表指针处于“0”位,仪器预热20分钟,放入某一浓度的标准溶液,测定其荧光强度,必要时调节刻度旋钮及灵敏度钮(注意:一经调节,此两钮不得变动)。更换波长再长一些的滤光片,依次同上法测定各滤光片的荧光强度,选择荧光强度最强的一块荧光滤光片作测定用。

(2)选择合适的激发光滤光片:将已选择好的荧光滤光片(暂定420nm)固定,用各种波长的滤光片代替360nm的一块激发光滤片其波长要小于荧光滤光片的波长。依次同上法测定其荧光强度,选择荧光最强的一块激发光滤光片作测定用。

(3)将浓度最大的硫酸奎尼丁标准溶液(10ug/ml)放入比色皿中,调节刻度旋钮至满刻度(必要时可调节灵敏度钮使满刻度);然后从稀浓度至高浓度依次测定其余的奎尼丁标准溶液,用硫酸溶液(0.05mol/L)作空白,并一一记下荧光强度;最后测定样品液与空白液。在测定数据中扣除空白溶液的荧光度。

4.画出F—C硫酸奎尼丁的标准曲线,并计算样品中硫酸奎尼丁的百分含量。

65

五、思考题

1.测量样品溶液,标准溶液时,为什么要同时测定硫酸的空白溶液?

2.选择360nm、400nm两块滤光片分别作激光滤光片时,对测定结果有误差异?

第十章 红外分光光度法

实验三十 红外分光光度计的性能检查

一.目的与要求

1.了解红外分光光度计的工作原理及其操作方法。 2.了解红外分光光度计的性能及检查方法。

二、方法与提要

通过仪器性能检测,了解仪器分辨率的高低及波数准确性的测定。

三、仪器与标样

1.光栅红外风光光度计 2.聚苯乙烯薄膜

四、操作步骤

将波数调至4000cm-1然后调0%T及100%T,放聚苯乙烯薄膜于样品光路上,用标准狭缝程序及标准扫描时间,绘制聚苯乙烯薄膜的红外吸收光谱(图12-1)

66

规定标准(1990年版中国药典附录中规定)

1.分辨率 要求在3110~2850cm-1范围内应能清晰地分辨出不饱和碳氢与饱和碳氢伸展振动的七个峰,从约1583cm-1最高至约1590cm-1最低点的波谷深度应不小于12%T,从约2851cm-1最高点至约2870cm-1最低点的波谷深度不小于18%T。

2.波数准确性 用2851cm-1,1601cm-1,1028cm-1,907cm-1处的吸收峰对波数进行校正,波数精度在2000~400cm-1区间为<±4cm-1,4000~2000cm-1间应<±8cm-1。

六、思考题

1.聚苯乙烯薄膜的光栅光谱和棱镜光谱有无区别?在波数3100cm-1~2800cm-1间的分辨率是否相同。

2.试解析聚苯乙烯薄膜主要峰的归属。

实验三十一 样品的红外光谱测定

一、 目的与要求

1. 熟悉固体样品制备和红外光谱的测绘方法及仪器的使用规程。

2. 了解样品光谱是标准光谱(SADTLER红外标准光谱)的核对。

二、 方法与提要

实验时可选用固定样品和液体样品,绘制红外光谱,然后进行光谱解析,查阅标准红外

光谱定性,要求样品纯度>98%,且不含水。

三、 .仪器及药品

1. 光栅红外风光光度计 2. 阿司匹林,乙苯

.

四、 操作步骤

(一)固定样品红外光谱的测定

1.压片法 称取干燥样品约1mg在玛瑙研钵中磨细,加入干燥的溴化钾 (过200目筛)细粉

67

约200mg,继续研磨混匀,将磨好的物料加到压片专用模具的模中(¢13mm),铺匀,合上模具置油压机上先抽气约2分钟以除去混在粉末中的湿气及空气,再边抽气边加压至150~180kg/cm2压制2~5分钟。取出压成透明片状的物料,装入样品架待测。

2.糊状法 取少量干燥样品在玛瑙研钵中研细,滴入几滴石蜡油继续研磨至均匀的浆糊状,取此浆糊状物涂在可拆液体池的窗片上或空白KBr片上,即可测定。

3.阿司匹林红外光谱的测绘 将上述制备的样品置仪器样品光路中,参比光路放空白溴化钾片作为补偿,选择适当的增益,狭缝程序及扫描时间,在4000~400cm范围间录制其吸收光谱。阿司匹林红外光谱如图12-2【图】

(二)液体样品红外光谱的测绘

1.液体池法 将液体样品注入固定厚度密封液体池或装入可拆式液体池内,放入光路中测定。 溶液法系将样品制成1~10%溶液以0.1~0.5mm厚液体池测定,用溶剂在参比光路中作为补偿。 2.夹片法 取两片KBr空白片,将适量液样滴在一片上,再盖上另一片,装入样品架中夹紧,放入光路中测定。

3.乙苯红外光谱的测绘 见固体样品红外光谱测绘3. 乙苯的红外光谱见图12—3.

68

联系客服:779662525#qq.com(#替换为@)