第九章 荧光分析法
实验二十九 荧光法测定硫酸奎尼丁的含量
一、目的与要求
1. 掌握荧光法的定量分析方法（标准曲线法）。 2. 熟悉930型荧光光度计的使用方法。
二、方法提要
奎尼丁为抗疟药奎宁得右旋体，属生物碱类抗心律失常药，其结构如下：
基于本品分子具有喹啉环结构，可产生荧光这一特性，在实验中用930型荧光光度计测量其荧光强度，由标准曲线法求出本样品的含量。
三、仪器及试剂
1.930型荧光光度计； 2.硫酸奎尼丁对照品； 3.硫酸奎尼丁。
四、操作步骤
1.标准溶液的制备 精密吸取用硫酸溶液（0.05mol/L）配制的硫酸奎尼丁标准液（100ug/ml）1.00、2.00、3.00、4.00及5.00ml容量瓶中，各加硫酸溶液（0.05mol/L）稀释至刻度，摇匀，待测。
2．样品溶液的制备 精密称取奎尼丁样品约50mg置于50ml容量瓶中，用硫酸溶液（0.05mol/L）溶解并稀释至刻度，摇匀。吸取此溶液0.50ml，于100ml容量瓶内，用硫酸溶液（0.05mol/L）溶解并稀释至刻度，摇匀，待测。
3.测定
（1）选择合适的荧光滤光片：将激发光滤光片（暂用360nm的）置于被测液前面的光径中，将波长稍长于360nm的滤光片放在被测液后的光径中，接通仪器电源开关，打开样品室箱盖，旋动调零电位器，使电表指针处于“0”位，仪器预热20分钟，放入某一浓度的标准溶液，测定其荧光强度，必要时调节刻度旋钮及灵敏度钮（注意：一经调节，此两钮不得变动）。更换波长再长一些的滤光片，依次同上法测定各滤光片的荧光强度，选择荧光强度最强的一块荧光滤光片作测定用。
（2）选择合适的激发光滤光片：将已选择好的荧光滤光片（暂定420nm）固定，用各种波长的滤光片代替360nm的一块激发光滤片其波长要小于荧光滤光片的波长。依次同上法测定其荧光强度，选择荧光最强的一块激发光滤光片作测定用。
（3）将浓度最大的硫酸奎尼丁标准溶液（10ug/ml）放入比色皿中，调节刻度旋钮至满刻度（必要时可调节灵敏度钮使满刻度）；然后从稀浓度至高浓度依次测定其余的奎尼丁标准溶液，用硫酸溶液（0.05mol/L）作空白，并一一记下荧光强度；最后测定样品液与空白液。在测定数据中扣除空白溶液的荧光度。
4.画出F—C硫酸奎尼丁的标准曲线，并计算样品中硫酸奎尼丁的百分含量。
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五、思考题
1．测量样品溶液，标准溶液时，为什么要同时测定硫酸的空白溶液？
2.选择360nm、400nm两块滤光片分别作激光滤光片时，对测定结果有误差异？
第十章 红外分光光度法
实验三十 红外分光光度计的性能检查
一.目的与要求
1.了解红外分光光度计的工作原理及其操作方法。 2.了解红外分光光度计的性能及检查方法。
二、方法与提要
通过仪器性能检测，了解仪器分辨率的高低及波数准确性的测定。
三、仪器与标样
1.光栅红外风光光度计 2.聚苯乙烯薄膜
四、操作步骤
将波数调至4000cm-1然后调0%T及100%T，放聚苯乙烯薄膜于样品光路上，用标准狭缝程序及标准扫描时间，绘制聚苯乙烯薄膜的红外吸收光谱（图12-1）
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规定标准（1990年版中国药典附录中规定）
1.分辨率 要求在3110～2850cm-1范围内应能清晰地分辨出不饱和碳氢与饱和碳氢伸展振动的七个峰，从约1583cm-1最高至约1590cm-1最低点的波谷深度应不小于12%T，从约2851cm-1最高点至约2870cm-1最低点的波谷深度不小于18%T。
2.波数准确性 用2851cm-1,1601cm-1,1028cm-1,907cm-1处的吸收峰对波数进行校正，波数精度在2000～400cm-1区间为<±4cm-1，4000～2000cm-1间应<±8cm-1。
六、思考题
1.聚苯乙烯薄膜的光栅光谱和棱镜光谱有无区别?在波数3100cm-1～2800cm-1间的分辨率是否相同。
2.试解析聚苯乙烯薄膜主要峰的归属。
实验三十一 样品的红外光谱测定
一、 目的与要求
1. 熟悉固体样品制备和红外光谱的测绘方法及仪器的使用规程。
2. 了解样品光谱是标准光谱（SADTLER红外标准光谱）的核对。
二、 方法与提要
实验时可选用固定样品和液体样品，绘制红外光谱，然后进行光谱解析，查阅标准红外
光谱定性，要求样品纯度>98%，且不含水。
三、 .仪器及药品
1. 光栅红外风光光度计 2. 阿司匹林，乙苯
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四、 操作步骤
（一）固定样品红外光谱的测定
1.压片法 称取干燥样品约1mg在玛瑙研钵中磨细，加入干燥的溴化钾 （过200目筛）细粉
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约200mg，继续研磨混匀，将磨好的物料加到压片专用模具的模中（￠13mm），铺匀，合上模具置油压机上先抽气约2分钟以除去混在粉末中的湿气及空气，再边抽气边加压至150～180kg/cm2压制2～5分钟。取出压成透明片状的物料，装入样品架待测。
2.糊状法 取少量干燥样品在玛瑙研钵中研细，滴入几滴石蜡油继续研磨至均匀的浆糊状，取此浆糊状物涂在可拆液体池的窗片上或空白KBr片上，即可测定。
3.阿司匹林红外光谱的测绘 将上述制备的样品置仪器样品光路中，参比光路放空白溴化钾片作为补偿，选择适当的增益，狭缝程序及扫描时间，在4000～400cm范围间录制其吸收光谱。阿司匹林红外光谱如图12-2【图】
（二）液体样品红外光谱的测绘
1.液体池法 将液体样品注入固定厚度密封液体池或装入可拆式液体池内，放入光路中测定。 溶液法系将样品制成1～10%溶液以0.1～0.5mm厚液体池测定，用溶剂在参比光路中作为补偿。 2.夹片法 取两片KBr空白片，将适量液样滴在一片上，再盖上另一片，装入样品架中夹紧，放入光路中测定。
3.乙苯红外光谱的测绘 见固体样品红外光谱测绘3. 乙苯的红外光谱见图12—3.
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