4. 测试参数设置:
图26 测试参数基本界面示意图
测试名称(Test Name):测试名称登记注册后,就可以设置参数菜单。
样本形式(Type):有血清、尿液等选择(“Serum”,“Urine”, “Other-1”, and “Other-2”.)
操作选项(Operation):是否启用这个测试项目。
样本相关参数:
样本体积(Sample Volume):非自动稀释样本的范围是1.6-25ul,如果要机内稀释,范围则是1.6-20ul,可以0.1ul步进;
稀释后样本量(Dilution):有0和10ul可供选择;
样本预稀释比例(Pre-DilutionRate):有1、3、5、10、15、20、25、50、75、100可供选择。选择比例后,仪器自动按照此比例加注稀释液。
此功能会延迟报告结果的速度,整机速度也会延迟一些,但可以大大减少高浓度样本警报的比例。
试剂相关参数:
试剂量(Reagent Volume):0,10-235ul之间,1ul步进。
稀释液(Dilution):试剂稀释液的量,有些浓缩试剂是可以稀释的。每种试剂和稀释液的量不能超过250ul;
R1+S+R2的总量不能超过450ul,不能低于120ul。
试剂吸光度范围(Reagent OD Limit):分为第一试剂吸光度高低限制和第二试剂吸光度高低限制,如果超过这个限制,会提示Y(y)和U(u),要么留空,要么放到最大:-2.0000和3.0000。
公共试剂(common Reagent):这是针对3试剂项目应用的,是在菜单Parameters>Common Test Parameters>CommonReagents中设置的最多10个试剂。不过,这里的三试剂与AU自有的糖化血红蛋白的三试剂概念不同。前者是采用三种试剂完成一个项目的测试,而后者是采用三种试剂完成两个项目的测试,两个项目的波长、方法甚至反应方向都不相同。
反应方法相关参数:
波长(Wave Length):主波长Pri.和付波长Sec.可以选择,主波长必选。
方法(Methed):就是反应方法,END、END1、Rate、Rate1、Fixed、Fixed1可供选择。
反应方向(Reaction Slope):有+和-可供选择,代表正负反应方向;
测量点(Measuring Point):分为Measuring Point-1和Measuring Point-2,每组点都有开始点Fist和结束点Last输入框。
该点的选择与反应方法有关。一定注意AU680的这两组点与AU640的概念不同。
AU640中,Measuring Point-1为主读点,Measuring Point-2为子读点。而AU680,常规使用时,Measuring Point-1是主读点,在双速率法和双固定
点法时是子读点,Measuring Point-2则成为主读点。
举例说明:
Measuring Point的使用
单试剂终点法:Measuring Point-1 Fist(0),Last(Px)。Px是1-27点之间的读点,根据需要设置,这也是一点终点法。
双试剂终点法,带试剂样本空白的:Measuring Point-1 Fist(Pz),Last(Px)。Px是11-27点之间的读点,根据需要设置。Pz是1-10之间的读点,根据需要设置,也就是R2加入之前的一个点,这也是两点终点法。
单速率法和固定点法:Measuring Point-1 Fist(Pw),Last(Px)。Px和Pw是11-27点之间的读点,根据需要设置,Px>pw,都在R2之后。
双速率法和固定点法:
Measuring Point-1Fist(Pz),Last(Pe)。
Measuring Point-2Fist(Pw),Last(Px)。
Px和Pw是11-27点之间的读点,根据需要设置,Px>pw,也就是R2之后的一组读点。
Pz和Pe是1-10点之间的读点,根据需要设置,Pe>Pz,也就是R2之前的一组读点。
反应监测参数:
线性范围(Linrarity Limit),可以单独使用,详见前面的介绍;
延迟时间(Lag Time Check),与吸光度范围结合使用,详见前面的介绍;
吸光度范围(OD Limit),与延迟时间结合使用,详见前面的介绍;
以上只能速率法使用。
动态范围(Dynamic Range),详见前面的介绍;
相关系数(Correlation Factor):与动态范围配合使用,利用直线方程Y=AX+B,进行斜率A和截距B的修正,修改A、B值后,已经测定的结果数值实时改变。默认为1和0。在动态范围检查之后进行相关系数检查。
制造系数(Factor For Maker):与动态范围配合使用,利用直线方程Y=AX+B,进行斜率A和截距B的修正,在动态范围之前进行制造系数检查。
对于某些项目的结果,质控值与靶值总是相差一个范围的数值时,利用直线相关系数和制造系数校正很有必要。
试剂稳定期(Onboard Stability Period):试剂放入试剂仓后的稳定期,超过这个时间则报告试剂失效,提示更换试剂。
图27 LIH样本检查设置界面
LIH样本是脂血(乳糜)Lipemia、黄疸Icterus和溶血Hemolysis的三个首字母缩写,这三种样本对结果的影响很大,因为样本本身的颜色就很重。目前大多采取的方式是上机前人工判断,将这三种样本单独稀释后上机,或者将这三种样本单独修改参数,用样本空白通道的方式进行校正,还有的是上机自动稀释,还有的采用两点终点法和双速率双固定点法来尽可能的消除干扰。
AU自带的LIH参数设置,是机器自动进行LIH样本的定性判定,并在结果上给出提示。
采用LIH分析,需要在公共试剂里添加一个专用的或者非专用的LIH试剂。AU自己有专门的LIH试剂,而非专用的试剂一般是生理盐水或者水或者测试项目本身的试剂,这些都需要在公共试剂界面里进行设置。
在LIH参数设置界面里,LIHReagent要选择专用试剂(Dedicated)或者非专用试剂(Not dedicated),设置好样本量和稀释量,以及第一试剂的量,然后就是设置一个+到五个+的吸光度值。
LIH检测是内定的参数,无法进行更改。大致原理是用专用盐水(或者生理盐水、去离子水、项目R1试剂)与样本混合,分别读取410(主波长)和480nm(付波长)波长下的P1(主读点)和P0(子读点)点吸光度值,570和600nm的P2和P0点吸光度值,660和800nm的P3和P0点吸光度值。也就是说有三个内置的MB定标的终点法项目,分别检测LIH在P1、P2、P3点的数值。
吸光度计算方法是:
脂血(乳糜)Lipemia检测的吸光度值= P3(OD660-OD800)-P3(RBOD660-RBOD800)
也就是P3点的主波长660nm吸光度值减去子波长800nm的吸光度值,然后减去同点的试剂空白相应波长的差。
黄疸Icterus检测的吸光度值=P1OD480-P2OD570)-(P2RBOD660-P3RBOD800)
P1点的480nm吸光度值减去P2点的570nm吸光度值,再减去P2点的660nm和P3点800nm的试剂空白吸光度差值。
溶血Hemolysis检测的吸光度值=P1(OD410-OD480)-(P2RBOD660-P3RBOD800)
P1点的410和480nm的差值减去减去P2点的660nm和P3点800nm的试剂空白吸光度差值。
LIH检查的P0-P3点设置是在Q键菜单里,可以根据需要修改,不过默认的已经足够了,一般都是样本加入后的两三个点。
得到吸光度值数据后,还要经过公式计算才能得到检查值:
LIH检查值=[反应吸光度值*(R1.V+S.V)]/(300)*(18)/(S.V)
计算出的LIH检查值与LIH设置里的LIH判断水平(LIH Judgment Level)进行比较,符合哪一个范围就报告哪一个定性。
AU的手册上,除了说明专用试剂外,对于判断水平的设置只用了一句联系厂家服务人员带过。但在AU640这样的老版本手册中,提供了计算方式和公式。
设置LIH检查,这么多年我仅做过1次,当时是一家医院两台同样的机器,用生理盐水做了10个正常人的标本,计算前几个点的吸光度值,按照公式计算后,得到的检查值乘以20%输入到第一个+号那里,超过这个吸光度就报告一个+号,然后翻倍输入其余几个+号那里。后来几天的测试结果出来后,院方竟然比较满意,从一个+号到五个+号都有出现,重点复查了一个+号的标本,认为取值范围比较准确。
在AU640的说明书里,厂家给出了一个实例,但也声明仅仅是例子,并不代表标准,各实验室要自行确定数值或联系客服。
由于是定性检查,而且占用反应杯很多,每个项目都开展的话,生化速度势必会降低很多。而且并不多收费,所以很多医院并不启用这个功能。
图28 ISE参数设置界面示意图
ISE参数设置:安装ISE模块后这个界面才有效。
在这个界面里,可以选择血清或尿液的K、Na、CL三个电解质项目是否开启;样本量和稀释量的设置,中标液和高低标准液浓度的设置,以及动态范围和相关系数的设置等。
图29 糖化血红蛋白设置界面示意图
糖化血红蛋白(HbA1c):上图是AU专用试剂的糖化血红蛋白参数界面,如果第三方的试剂参数与此类似,照抄或稍微修改即可。根据这个参数做出来的数值有三个,其中T-Hb和HbA1c是直接测定出来的,HbA1c%则是((HbA1c/T-Hb)×91.5)+2.15计算出来的。
采用这个参数,需要固定三个试剂通道,也就是100、101和102,名称分别是HbA1c%,T-Hb和HbA1c,这是不可更改的。
从这张图可以看出,T-Hb和HbA1c是两套反应,有各自的波长、方法、试剂以及读点。
图30 计算项目设置界面示意图
计算项目(Calculated Test):这是设置根据任意几个结果计算另一个结果的界面,给出根据哪几个测试结果(Test Name)和常数(Constant)的值(Value),再经过给出的公式(Formula)进行计算得出的结果。
比如经常用到的AST/ALT比值项目,就可以在这里进行设置,计算后在结果里多出一个AST/ALT项目和数值。