环境工程微生物学实验技术
1、实验课前需对实验内容进行预习，提前设计好实验方案。 2、实验过程中要注意无菌操作。 五、实验报告要求
1、记录实验方法及步骤。 2、列表说明检测结果。 六、相关基础知识
参考教材《环境工程微生物学》和《环境微生物学》。
36
环境工程微生物学实验技术
实验七：污水处理水质指示性微生物观测
一、实验目的
1、学习显微镜的原理、构造及使用； 2、掌握微生物的形态观察；
3、通过活性污泥中生物相的观察，了解好氧生物法处理污水的本质。 4、区分污水中原生动物和后生动物。 5、掌握各种微生物对水质的指示性作用。 二、实验内容与方案
1、显微镜的原理、构造及使用
图7-1所示是通常检验微生物用的光学生物显微镜。 其机械部分主要包括：
1）镜筒 镜筒长度一般是160mm。它的上端装目镜，下端装物镜回转板。回转板上一般有三个物镜。
2）载物台 载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔，使下面的光线可以通过。两旁有弹簧夹，用以固定标本或载玻片。有的载物台上装有自动推物器。
3）调节器 镜筒旁有两个螺旋，大的叫粗调节器，小的叫细调节器，用以升降镜筒，调节物镜与被观察物体之间的距离。
1-接目镜；2-镜筒；3-回转板；4-接物镜；5-集光器；6-光圈；7-反光镜8-粗调节器 9-细调节器；10-镜臂；11-弹簧夹；12-载物台；13-倾斜关节；14-支柱；15-镜座
图7-1 普通光学显微镜
37
环境工程微生物学实验技术
光学部分主要包括：
1）目镜 一般使用的显微镜有2-3个目镜，其上刻有―5×‖、―10×‖、―15×‖等数字符号，意即放大5倍、10倍、15倍。这三种透镜的焦距分别为50mm、25mm、15mm，线视场分别为20mm、14mm、10mm。
2）物镜 物镜装在回转板上，可分低倍镜、高倍镜和油镜三种，相应的放大倍数是10×（或5×）、40×（或50×）、100×（或90×），相应的工作距离是7.63mm、0.5mm、0.198mm。
显微镜的总放大倍数等于物镜与目镜放大倍数的乘积。观察微生物时，常用放大10倍或15倍的目镜。目镜装在镜筒上端，在使用过程中并不经常变动，通常所谓的低倍镜、高倍镜或油镜的观察，主要是只使用不同物镜而言。例如用10×目镜和40×物镜（高倍镜）所得物象的放大倍数是400倍。
油镜的放大倍数最大（90或100），放大倍数这样大的镜头，焦距就很短，直径就很小。从标本玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入油镜），有些光线因折射或全反射，不能进入镜头，致使射入的光线较少，物象显现不清。所以为了不使通过的光线有所损失，须在油镜和镜片中间加入与玻璃折射率（n=1.52）相仿的镜油（香柏油，n=1.55）。因为这种物镜使用时须加镜油，所以我们称它为油镜（图7-2）。一般的低倍镜或高倍镜使用时不加油，所以也称干镜。
使用低倍镜和高倍镜时，一般作活体的观察，不进行染色。在观察原生动物时，低倍镜主要用来区别原生动物的种类和观察它的活动状态，而高倍镜则可以看清微生物的结构特征。油镜在大多数情况下是用来观察染色的涂片。
图7-2 油镜光路图
3）集光器 集光器在载物台的下面，用来集合反光镜反射来的光线。集光
38
环境工程微生物学实验技术
器可以上下调整，中央装有光圈，用以调节光圈的强弱。当光线过强时，应缩小光圈或把集光器向下移动。
4）反光镜 反光镜装在显微镜的最下方，有平凹两面可自由选择及转动方向，以反射光线至集光器。一般在低放大倍数时用平面反光镜，在高放大倍数时用凹面反光镜。
光学显微镜的光路见图7-3。
1.聚光镜；2.载玻片；3.标本；4.盖玻片；5.物镜；6.场镜；7.像平面；8.目镜
图7-3 光学显微镜光路图
低倍镜的使用方法如下：
⑴置显微镜于固定的桌上，窗外不宜有障碍视线之物； ⑵拨动回转板，把低倍镜移到镜筒正下方和镜筒连接而对直；
⑶拨动反光镜向着光线的来源处（对光时应避免太阳直射，可向着自然光、日光灯或显微镜照明灯）。同时用肉眼对准目镜（选用适当放大倍数的目镜）仔细观察，调节反光镜（光线较强的天然光源宜用平面镜，光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜），使视野完全成为白色，表示光线已反射到镜里；
⑷把载玻片放在载物台上，要观察的标本放在圆孔的正中央；
39