第二章
1、目前，常用的植物细胞培养基种类有哪些？各有什么特点？ 1）MS培养基 特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的平衡溶液。
2）B5培养基 其主要特点是含有较低的铵，这是因为铵对不少培养物的生长有抑制作用。 3）White培养基 其特点是无机盐数量较低，适于生根培养 4）N6培养基 其特点是成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高。
5）KM8P培养基 其特点是有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合培养。
2、简要说明MS培养基的基本组成。 1）大量元素母液配制
MS培养基的大量元素主要包括硝酸铵（NH4NO3）、硝酸钾(KNO3)、磷酸二氢钾（KH2PO4）、硫酸镁（MgSO4?7H2O）和氯化钾（CaCl2,CaCl2?2H2O）五种化合物。 2）微量元素母液配制
MS培养基的微量元素由7种化合物（除Fe外）组成MnSO4?4H2O、ZnSO4?7H2O、H3BO3、KI、NaMoO4?2H2O、CuSO4?5H2O、CoCl2?6H2O。 3）铁盐母液配制
MS培养基中的铁盐是硫酸亚铁（FeSO4?4H2O）和乙二胺四乙酸二钠（Na2?EDTA）的螯合物，必须单独配成母液。 4）有机母液的配制
MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、烟酸硫胺素和盐酸吡哆素。 5）激素母液配制
MS培养基中的激素有生长素类、细胞分裂素
3、配制培养基时，为什么要先配制母液？如何配制母液？
1）配制母液不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取，而且还便于低温保藏。 2）基本培养基中的大量元素、微量元素、维生素等一般都分别配制成母液。
4、常用的灭菌方法有哪些，各有哪些优缺点？
1）湿热灭菌（高压蒸汽灭菌） 优点：高温高压蒸汽对生物材料有良好的穿透力，能造成蛋白质变性凝固而使微生物死亡，是一种最有效的灭菌方法。 缺点：如果是对培养基或液体溶液灭菌，灭菌时间与需要灭菌的培养基或液体溶液的体积密切相关，时间不足达不到灭菌效果，时间过长培养基内的化学物质遭到破坏，影响培养基成分。 2）过滤除菌 优点：
3）干热灭菌 缺点：干热灭菌存在能源消耗大、浪费时间、安全性差问题
4）紫外线灭菌 缺点：由于紫外线穿透物质的能力很弱，所以只适于空气中和物体表面的灭菌，而且要求距照射物质以不超过1.2m为宜。
5）熏蒸消毒 优点： 方法简便，只需要把消毒的空间关闭紧密即可。
1
6）药剂喷雾消毒
5、动物细胞培养常用的培养基组成成分有哪几类，在离体培养过程中有哪些作用？ 1）天然培养基 对促进细胞生长繁殖、粘附及中和物质的毒性有一定作用。
2）合成培养基 血清的加入对培养非常有效，但对培养产物的分离纯化和检测会造成不便。
3）无血清培养基 细胞外基质能帮助细胞附着和铁壁；低分子营养成分是细胞生长和代谢所需的；激素与生长因子促进细胞生长繁殖；酶的抑制剂，保护细胞不受培养基内残留酶的损伤。
6、初代培养时，接种的一般程序是什么？
1）在接种前打开超净工作台紫外灯照射20~30min，关闭紫外灯后，打开超净工作台的风机10min以上，开始无菌操作。
2）接种人员先洗净，在缓冲室内换好经过消毒的工作服，带上口罩，并换上拖鞋等。 3）上超净工作台后，用酒精棉球认真擦拭双手，特别是指甲处，然后擦拭工作台面及四周，装有培养基的培养器皿和盛外植体的烧杯也要用酒精擦拭消毒后，再放进工作台。 4）先用酒精棉球擦拭接种工具，然后在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌或放在接种器械灭菌器中灭菌，灭菌后放在器械架上使其自然冷却。
5）把植物材料放在75%乙醇中浸泡约30s，再用0.1%的升汞中浸泡5~10min，浸泡时刻进行搅动，使植物材料与消毒剂有良好的接触，然后用无菌水