4． 在参比和样品室中放入空白试液进行“基线扫描”。
5． 在参比和样品室中分别放入空白和样品比色皿，进行光谱扫描。
6． 关闭紫外仪器时，应选择文件菜单中“退出系统”，当计算机屏幕出现关机提示时，点击“确定”，
关闭紫外主机电源。
实验七 紫外差值光谱法测定废水中的微量酚
一、实验目的
1．了解紫外可见分光光度计的使用方法。 2．掌握紫外差值光谱法测定微量酚的基本原理。 二、实验原理
苯酚在紫外区有两个吸收峰，在中性溶液中?max为210nm和270nm，在碱性溶液中，由于形成酚盐，而使该吸收峰红移至235nm和288nm。所谓差值光谱就是指这两种吸收光谱相减而得到的光谱曲线。实验中只要把苯酚的碱性溶液放在样品光路上，把中性溶液放在参比光路上，即可直接绘出差值光谱。
在苯酚的差值光谱图上，选择288nm为测定波长，在该波长下，溶液的吸光度随苯酚浓度的变化有良好的线性关系，遵循比耳定律，即?A=???C?L，可用于苯酚的定量分析。差值光谱法用于定量分析，可消除试样中某些杂质的干扰，简化分析过程，实现废水中的微量酚的直接测定。 三、试剂和仪器
试剂：0.1M KOH溶液。0.2500g/L苯酚标准溶液。
仪器：WFZ-26A紫外可见分光光度计。1cm厚石英比色吸收池2个。 25ml容量瓶12个 四、实验步骤
1．确定测定波长：以蒸馏水作参比，分别绘制苯酚在中性和碱性溶液中的吸收曲线。然后，将苯酚的中性和碱性溶液分别放置在参比和样品光路中，绘制二者的差值光谱曲线，根据该差值光谱曲线，确定其测定波长。
2．绘制标准曲线：用移液管分别移取苯酚标准溶液1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml于5个25ml的容量瓶中，另取同样体积苯酚标准溶液于另5个25ml容量瓶中，分别用水和0.1M KOH稀释至刻度（共需10个25ml容量瓶）。每对容量瓶所对应的溶液浓度分别是
10mg/L、15mg/L、20mg/L、25mg/L、30mg/L。每一对苯酚标准溶液中的苯酚浓度相同，只是稀释溶剂不同。在测定波长下，把碱性溶液稀释的标准溶液放在样品光路上，把中性溶液稀释的标准溶液放在参比光路上，测定吸光度差值。
3．测量未知样品中苯酚含量：用移液管分别移取含酚水样10ml于2个25ml容量瓶中，分别用水和0.1M KOH稀释至刻度。在测定波长下，把碱性溶液稀释的待测试样放在样品光路上，把中性溶液稀释的待测试样放在参比光路上，测定吸光度差值。 五、数据处理
1．用实验步骤2中测得的吸光度差值，绘制吸光度—浓度曲线，计算回归方程。 2．用吸光度—浓度曲线或回归方程，计算水样中的苯酚含量（mg/L）。 六、思考题
1． 苯酚的差值光谱图中有235nm和288nm两个吸收峰，为何选288nm作为测定波长？ 2．本实验所用的差值光谱法和示差分光光度法有何不同？
附录：TU-1810紫外可见分光光度计操作规程
1． 打开仪器电源，仪器开始初始化，一切正常后进入主界面。 2． 选择光谱测量，按F1，进行参数设置：
（1） （2） （3） （4） （5）
光度方式：A 扫描速度：快 采样间隔：1.0 波长范围：400?200nm 纵坐标的范围：0.000?1.000
3． 按“RETURN”键，返回光谱测量界面，放入空白样品，按“AUTO ZERO”键进行基线校正。然后，
放入待测样品，按“START”键，进行光谱扫描。所得吸收光谱曲线显示在主机屏幕上，按F2，输入阈值，按“确认”，系统将自动检索并显示峰值。据吸收曲线选择最佳测定波长。按F4，可打印谱图。 4． 在主界面上，选“定量测定”，按F1，进行参数设置：
（1） （2） （3）
标样法
测量波长：287nm 浓度单位：mg/L
5． 按F1键，进入标样法参数设置，、
（1） （2） （3）
按“1”，输入标样数：5
按“2”，标样序号：依次输入1-5#标样的浓度
在一号池中放入空白样，按“AUTO ZERO”键，进行行空白自动校零。
（4） （5） （6）
按“3”，将样品放入一号池中，按“START”键，测定吸光度。 重复（4）中的操作，直到5个样品测完。 按“4”，绘制工作曲线。
6． 按“RETURN”键，返回定量测量界面，放入空白样品，按“AUTO ZERO”键进行空白自动校零。然
后，放入待测样品，按“START”键，进行水样吸光度测量。界面自动显示测量结果。 7． 按“RETURN”键，返回主界面，直接关主机电源。
实验 八 红外吸收光谱的测定及结构分析
一、实验的目的与要求
1. 掌握红外光谱法进行物质结构分析的基本原理，能够利用红外光谱鉴别官能团，并根据
官能团确定未知组分的主要结构； 2. 了解仪器的基本结构及工作原理； 3. 了解红外光谱测定的样品制备方法； 4. 学会傅立叶变换红外光谱仪的使用。
二、原理
红外吸收光谱法是通过研究物质结构与红外吸收光谱间的关系，来对物质进行分析的，红外光谱可以用吸收峰谱带的位置和峰的强度加以表征。测定未知物结构是红外光谱定性分析的一个重要用途。根据实验所测绘的红外光谱图的吸收峰位置、强度和形状，利用基团振动频率与分子结构的关系，来确定吸收带的归属，确认分子中所含的基团或键，并推断分子的结构，鉴定的步骤如下：
(1)对样品做初步了解，如样品的纯度、外观、来源及元素分析结果，及物理性质(分子量、沸点、熔点)。
(2)确定未知物不饱和度，以推测化合物可能的结构； (3)图谱解析
①首先在官能团区(4000～1300cm－1)搜寻官能团的特征伸缩振动；
②再根据“指纹区”(1300～400cm-1)的吸收情况，进一步确认该基团的存在以及与其它基团的结合方式。
三、仪器与试剂
1.Nicolet 510P FT-IR Spectrometer（美国Nicolet公司）；
2. FW-4型压片机(包括压模等)(天津市光学仪器厂)；真空泵；玛瑙研钵；红外灯；镊子；可拆式液体池；盐片(NaCl, KBr, BaF2等)。
3.试剂：KBr粉末(光谱纯)；无水乙醇(AR)；滑石粉；丙酮；脱脂棉； 4.测试样品：对硝基苯甲酸；苯乙酮等。
四、实验步骤
1. 了解仪器的基本结构及工作原理
2. 红外光谱仪的准备
① 打开红外光谱仪电源开关，待仪器稳定30分钟以上，方可测定；
② 打开电脑，选择win98系统，打开OMNIC E.S.P软件；在Collect菜单下的Experiment
Set-up中设置实验参数；
③ 实验参数设置：分辨率4 cm-1，扫描次数32，扫描范围4000-400 cm-1；纵坐标为
Transmittance
3. 红外光谱图的测试 ①液体样品的制备及测试
将可拆式液体样品池的盐片从干燥器中取出，在红外灯下用少许滑石粉混入几滴无水乙醇磨光其表面。再用几滴无水乙醇清洗盐片后，置于红外灯下烘干备用。将盐片放在可拆液池的孔中央，将另一盐片平压在上面，拧紧螺丝，组装好液池，置于光度计样品托架上，进行背景扫谱。然后，拆开液池，在盐片上滴一滴液体（苯乙酮）试样，将另一盐片平压在上面(不能有气泡)组装好液池。同前进行样品扫描，获得样品的红外光谱图。
扫谱结束后，将液体吸收池拆开，及时用丙酮洗去样品，并将盐片保存在干燥器中。