－NH3? pK8.5。问在哪种pH（2.0，6.0，13.0）条件下，用电泳分离这三种三肽效果最好？
10．血红蛋白含铁量为0.34%，血红蛋白的最小相对分子质量是多少？实验数据表明血红蛋白的相对分子质量是64500，计算血红蛋白含有几个铁原子？
11．向1.0L浓度为1.0mol/L的处于等电点的甘氨酸溶液中加入0.3mol的HCL，问所得溶液的pH值是多少？如果加入1.0L浓度为0.3mol的NaOH以替代HCL时，溶液的pH值是多少？
12．试以IgG为例，简述免疫球蛋白分子的结构特点。 13．氨基酸混合物的分离可用哪些方法？
14．从某种植物中分离得到一种脯氨酸羟化酶的抑制剂，将它喂食大鼠，会导致其血管变脆，牙龈出血，为什么？人类患维生素C缺乏症时也会出现上述症状，为什么？
15．分别计算谷氨酸的?－COOH四分之三被解离时溶液的pH；赖氨酸的?－NH3+五分之一被解离时溶液的pH。（?－COOH pKa＝4.25，?－NH3+ pKa＝10.53）
16．将含有天冬氨酸（pI＝2.98）、甘氨酸（pI＝5.97）、苏氨酸（pI＝6.53）、亮氨酸（pI＝5.98）、赖氨酸（pI＝9.84）的pH3.0柠檬酸缓冲液，加到预先用同样缓冲液平衡过的Dowex－50的将阳离子交换树脂中，用缓冲液洗脱，这5种氨基酸将按什么顺序洗脱下来？
17．有一个A肽，经过酸水解后分析氨基酸组成，得知由Lys、His、Asp、Ala、Val、Tyr和两Glu及两个NH3分子组成。 （1）FDNB与A肽反应后，水解得到DNP－Asp。 （2）用羧肽酶水解A肽，得到游离Val。
（3）用胰蛋白酶水解A肽，得到两种肽段。一个肽段（Lys、Asp、Glu、Ala、Tyr）在pH6.4时净电荷为零；另一个肽段（His、Glu、Val）与FDNB反应后，水解得到DNP－His，且此肽段在pH6.4时带正电荷。
（4）用糜蛋白酶水解A肽，得到两种肽段。一个肽段（Asp、Ala、Tyr）在pH6.4时净电荷为零；另一个肽段（Lys、His、2Glu、Val）在pH6.4时带正电荷，求A肽的氨基酸序列。 18．简述制备单克隆抗体的基本步骤。
19．蛋白质A和B各有一个配体X的结合部位，蛋白质A的解离常数Kd为1.0×10－6mol/L，蛋白质B的解离常数Kd为1.0×10－9mol/L。问（1）哪一个蛋白质对配体的亲和力高？（2）将这两个蛋白质的解离常数Kd转换为结合常数Ka。 20．谷氨酸各个基团的解离常数及等电点分别是pK1α－COOH为2.19，pK2α－N+H3为9.67，pKRR－COOH为4.25，pI为3.22。
（1）Glu-和Glu=各一半时的pH值 （2）Glu总是带正电荷的pH范围
（3）Glu±和Glu-能作为缓冲液使用的pH范围
21．人工合成的多聚L脯氨酸，能够形成胶原三螺旋结构中的一个单股螺旋的构象，试问：
13
(1)多聚L脯氨酸能否形成三螺旋?为什么?
(2)你认为多聚(甘—脯—甘—脯)能否组成类似胶原的三螺旋结构?为什么?
六、参考答案
（一）名词解释或概念比较
1．氨基酸是含有至少一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物，氨基一般连接在?－碳原子上。氨基酸是肽和蛋白质的构件分子。
2．肽键是一个氨基酸的?－羧基与另一个氨基酸的?－氨基缩合形成的酰胺键。肽是指两个或两个以上氨基酸通过肽键形成的聚合物。
3．多肽链在二级结构或超二级结构基础上折叠成两个或多个趋于紧密的近乎球状的三维实体，这种实体称为结构域。结构域是大分子球状蛋白质三级结构的折叠单位，一般由100－200个氨基酸残基构成。
4．由一条多肽链组成或由有共价键连接的多条多肽链组成的蛋白质称为单体蛋白，例如溶菌酶和胰凝乳蛋白酶。由两个或两个以上亚基组成的蛋白质称为寡聚蛋白，亚基之间是非共价间连接的。例如血红蛋白是一个由4个亚基组成的寡聚蛋白，寡聚蛋白具有别构作用。
5．蛋白质的构象是指蛋白质的立体结构或空间结构，表示在蛋白质分子中由于单键的旋转所产生的所有原子或基团的空间排列。一个蛋白质构象有无数种，构象的变化不需要共价键的断裂，只需要单键的旋转。在生物体内，蛋白质往往只有一种构象，称为天然构象。
构型表示在立体异构体中其取代基团的空间排布。构型的改变必须要有共价键的断裂和重新生成。构型的改变会引起光学性质的变化，而且D?型和L?型异构体可以区分和分离。
6．一个氨基酸的?－氨基与另一个氨基酸的?－羧基脱水缩合形成的酰胺键称为肽键，肽键具有平面性质。
7．在较温和条件下，以可控制的方式使蛋白质与某种试剂（称化学修饰剂）起特异反应，以引起蛋白质中个别氨基酸残基的侧链基团发生共价化学改变。可用于研究某个氨基酸残基的功能或改变蛋白质的理化性质。
8．水介质中的球状蛋白质的折叠总是趋向于把疏水残基埋藏在分子的内部，这种现象称为疏水作用。蛋白质溶液系统的熵增加是疏水作用的主要动力。
9．是一个协助新合成的多肽链正确折叠和转运的蛋白质家族。它们能够抑制新生肽链的不恰当的聚集，排除与其它蛋白质的不合理结合，协助多肽链的正确折叠和跨膜转运，协助寡聚蛋白的组装。
10．是一种利用抗原－抗体反应检测特异蛋白质的方法。首先对蛋白质样品进行凝胶电泳分离，将被分离开的蛋白质转移到硝酸纤维素膜上，然后相继用第一抗体、酶标第二抗体以及底物进行处理，只有含待测蛋白质的条带显示颜色。 11．别构效应可以分为同促效应和异促效应。同促效应发生作用的部位是相同的，例如都是催化部位，即一种配体的结合对其它部位的同种配体的亲和力的影响。异促效应发生作用的部位是不相同的，即活性部位的结合行为受到别构部位与效应物结合的影响。
14
12．氧与血红蛋白的结合深受pH和CO2浓度的影响。H和CO2浓度增加，使得血红蛋白的氧合曲线向右移动，提高了O2从血红蛋白的释放量。
13．一个单独的抗体或T细胞受体只能结合抗原内的一个特定的分子结构，这个分子结构称为抗原决定簇或表位。抗原决定簇可以是蛋白质分子表面的氨基酸基团或糖链上的单糖残基。
14．分子量小于5000的化合物一般没有抗原性，不能引起免疫反应。如果将这些小分子化合物共价连接到蛋白质上，这种形式的小分子可以引起免疫反应。这种自身无抗原性，与载体结合以后有了抗原性的物质称为半抗原。
15．亲和层析是利用蛋白质分子对其配体分子特有的识别、结合能力建立起来的高效的分离纯化方法。把待纯化的蛋白质的特异配体共价连接到载体表面，将此载体装入层析柱。当蛋白质混合物加到层析柱上时，待纯化的蛋白质与配体特异结合，吸附在层析柱上，而其它的蛋白质（杂蛋白）不能被吸附，通过洗脱可以除去。最后用含游离配体的溶液可以将与配体结合的蛋白质洗脱下来。
16．必须氨基酸是指人（或其它脊椎动物）自己不能合成，需要从食物中直接获得的氨基酸，例如赖氨酸、苏氨酸等氨基酸。非必须氨基酸是指人（或其它脊椎动物）自己能从简单的前体合成的，不需要从食物中直接获得的氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸等氨基酸。
17．小分子化合物能自由穿过半透膜扩散到水或缓冲液中，而生物大分子（例如蛋白质）不能透过半透膜，被截留在半透膜内。用此技术可以将小分子化合物与生物大分子分离。
18．是将等电点聚焦电泳和SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳结合起来的一种电泳方法。首先，先进行等电点聚焦电泳，按照蛋白质的等电点差异分离；然后，再进行SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳，按照蛋白质的大小差异分离。染色后得到的电泳图是二维分布的蛋白质图。
19．是一种用来测定多肽和蛋白质氨基酸序列的方法。用异硫氰酸苯酯与多肽的N末端的氨基酸反应，从多肽链的N末端切下第一个氨基酸残基，用层析法可以测定这个被切下的氨基酸残基。回收余下的多肽链（少了一个氨基酸残基），再进行下一轮Edman降解循环，切下N末端的第二个氨基酸残基，并测定。重复循环过程，直到测定出整个多肽的氨基酸序列。 20．氨基酸、肽和蛋白质分子都是两性分子，使得这些分子带有的净电荷为零时，对应的溶液的pH值称为等点电。结构不同的两性分子，等电点不同。
21．多克隆抗体是识别一个蛋白质（抗原）的不同抗原决定簇的多种抗体的混合物。单克隆抗体由同一个B细胞克隆合成并分泌，是一种均一的抗体，识别同一个抗原决定簇。
22．仅由氨基酸组成的蛋白质称为单纯蛋白质，例如核糖核酸酶和肌动蛋白。由氨基酸和其它各种化学成分组成的蛋白质称为綴合蛋白质，其中非蛋白质部分称为辅基或配体，例如糖蛋白和脂蛋白。
23．由相同亚基组成的寡聚蛋白称为同寡聚蛋白，例如乳酸脱氢酶LDH1，由4个H亚基组成。由两种或两种以上亚基组成的寡聚蛋白称为杂寡聚蛋白，例如血红蛋白，由2个α亚基和2个β亚基组成。
24．是一种高分辨率的蛋白质分离技术，也可以用于测定蛋白质的等电点。将蛋白质混合物放在具有pH梯度的电泳介质中，在外电场的作用下蛋白质移动并聚焦（停留）在等于其等电点的pH梯度处，形成一个很窄的区带。
+
15
(二) 填空题 1. 两性离子 2. 2.97，7.59
3. 苯丙氨酸，色氨酸，酪氨酸；色氨酸 4. 离子交换层析，茚三酮 5. 苯异硫氰酸酯或Edman
6. 纤维状蛋白质，球状蛋白质，膜蛋白 7. 极性，非极性 8. 异构酶，伴侣蛋白
9. X射线衍射法 / X射线晶体结构分析 10. 协同效应，变构，波尔 11. 甲硫氨酸 12. 赖氨酸，精氨酸
13. 丝氨酸，苏氨酸，酪氨酸 14. 非极性或疏水，极性或亲水 15. 谷氨酸，缬氨酸
16. 胰岛β细胞，信号肽，胰岛素原，C肽 17. 同源蛋白质，不变残基，可变残基 18. 胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，弹性蛋白酶 19. 大小，电荷性质
20. 高级结构 / 二、三和四级，一级 21. 4，可变，不变 22. 3.6 23. 共价
24. 天冬酰胺，丝氨酸，苏氨酸 25. B, C, A, D 26. 组氨酸的咪唑基 27. 盐溶，盐析
28. 等电点聚焦电泳，毛细管电泳，聚丙烯酰胺凝胶电泳
29. 沉降速度法 / 沉降平衡法，凝胶过滤法，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法
16