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(3)
PCR 反应体系中，除具备缓冲液、模在
板
DNA 分子和引物外，还应
有
__________[ 填
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序号：① Taq 酶 ②dNTP(dCTP 、 dATP、 dGTP 和 dTTP) ③四种碱基
④ATP ⑤氨基酸 ]
____________ 的碱 (4)PCR 扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破
坏
____________的引物需要 基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相
同但设定更高的退火温度。
______( 填序号：①升 (5)如PCR 反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施
果高退火温有
②降低退火温度 ③重新设计引物 )。 度
(6)若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受 体细胞，原因是 ________________________________( 答出两点即可 ) 。
解析： 酶可催RNA 降解。在从高表MT 蛋白的生物组织中提mRNA 时，
化 达 取 (1)RNA
提取液中添加RNA 酶抑制剂可以防RNA 降解。mRNA 为材料获cDNA 的原理是：
的 止 以 得
cDNA 。 (2) 设计的 在逆转录酶的作用下，mRNA 为模板按照碱基互补配对的原则可以合
以 成 与 MT 基因两端序列互补配对的两种引物，它们之间不能存在互补配对序列，其原因是：避
免引物自连，如果引物自连，会导致引物不能同模DNA 结合，不能发生进一步的链式反
板
应。 (3) PCR 反应体系中，除具备缓冲液、模① 酶和 DNA 分子和引物外，还应在 Taq 板 有 ② dNTP(dCTP 、dATP、 dGTP 和 dTTP) 。 (4)退火意味着引物与模板链相连，退火温度过高会
G 与 C 之间含 破坏引物与模板的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，因
有 3 个氢键，A 与 T 之间含2 个氢键，因此长度相同GC 含量高的引物需要设定更高的退
但 有 火温度。 (5) 如果 PCR 反应得不到任何扩增产物，可能是退火温度过高或引物之间相互配对 (发生引物自连 ) ，导致引物与模板不能相连，所以可以采取的改进措施有： ② 降低退火温度 和 ③ 重新设计引物。
(6) 由于获得的目的基因无复制原点，而且无表达所需的启动子，所以若
要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞。
答案： (1) 防止 RNA 降解 在逆转录酶的作用下，mRNA 为模板按照碱基互补配对的
以
原则可以合成 cDNA
结合，不能发生进一步的链式反应
(2)避免引物自连，从而导致引物不能同模板 DNA
(3)①②
(4)引物与模板 GC 含量高
(5)②③
(6)目的基因无复制原点；目的基因无表达所需启动子
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6． (2019 ·山东、湖北部分重点中学高考冲刺模拟 )如图所示为培育二倍体转基因抗虫玉米的两种思路。 EcoRⅠ、 SmaⅠ、 BamH Ⅰ为限制酶 (箭头所指为酶切位点 )。回答下列问题：
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解析： (1) 题图显示：目的基因中存在 SmaⅠ切割外源
SmaⅠ的识别位点。若使用
DNA ，
SmaⅠ切割。 EcoR
(1)据图，获取目的基因时不能选择 SmaⅠ的原因是它 ________________________ 。选择 EcoRⅠ和 BamHⅠ的优点是可避免目的基因与质粒
(2)与思路 1 相比，思路 米 ________________ 。
________连接。
2 的最大优点是获得的转基因抗虫玉
(3)培育转基因抗虫玉米的核心步骤是 __________________________ ，其目的是使目的基 因在受体细胞中 __________________________________________________________
________________________________________________________________________ ________________________________ 。
(4) 将 重 组 质 粒 导 入 受 精 卵 ， 采 用 最 多 的 方 法 是 农 杆 菌 转 化 法 ， 这 跟 农 杆 菌 的 ____________________________________ 有关。
(5)操作⑤常用的方法是 ________________________ 。
则会破坏外源 DNA 中的目的基因的结构，因此获取目的基因时不能选择 Ⅰ和 BamHⅠ的识别位点不同，形成的黏性末端不同，因此选择 和外源 DNA ，其优点是可避免目的基因与质粒反向连接。
EcoRⅠ和 BamH Ⅰ切割质粒
(2)思路 1 是将重组质粒导入玉米的受精卵中，由该受精卵发育成的植株不一定都是纯合 子，思路 2 是将重组质粒导入由花粉经过脱分化形成的愈伤组织中，该愈伤组织形成的单倍 体幼苗 2 再经过人工诱导，染色体加倍，最终得到的玉米株都是纯合子。可见，与思路 比，思路 2 的最大优点是获得的转基因抗虫玉米都是纯合子 (或答不发生性状分离 )。
(3)培育转基因抗虫玉米采用的是基因工程技术，该技术的核心步骤是基因表达载体的构 建。构建基因表达载体的目的是：使目的基因在受体细胞中稳定存在并可遗传给下一代，同 时使目的基因能够表达和发挥作用。
(4)农杆菌的 Ti 质粒上具有 T- DNA ， T - DNA 可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染 色体上。在培育转基因植物时，采用最多的方法是农杆菌转化法，正是利用了农杆菌的
Ti 质 1 相
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