Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的 。

（2）步骤②中，重组胚胎培养到 期时， 可从其内细胞团分离出ES细胞。 （3）步骤③中，需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的 设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有 酶的酶切位点。

（4）为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的 ，用抗Rag2

蛋白的抗体进行杂交实验。

【答案】（1）细胞核 （2）囊胚 （3）核苷酸序列 HindⅢ和PstⅠ （4）蛋白质

【考点定位】动物细胞工程和胚胎工程。

【名师点睛】本题意在考查考生识记所列知识点，并能运用所学知识做出合理的判断或得出正确的结论的能力。

38.(2014·山东卷.40) 人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：

（1）htPA基因与载体用_________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用_________技术。

（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其__________。采集的精子需要经过__________，才具备受精能力。

（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行__________。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的__________。

（4）若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。 【答案】（1）同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶） DNA分子杂交 （或核酸探针） （2）超数排卵 获能 （3）显微注射法 性别鉴定 全能性 htPA（或人组织纤溶酶原激活物）

【试题解析】

（1）构建重组表达载体时，要用同种限制性核酸内切酶，对目的基因与载体切割，再通过DNA连接酶连接。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用DNA分子杂交技术。

（2）促性腺激素能促进性腺产生卵母细胞，对供体母羊注射促性腺激素，可获取更多的卵（母）细胞，超数排卵。刚采集的精子没有受精能力，需要经过获能，才具备受精能力。

（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是显微注射法。药用蛋白可在转htPA基因母羊的羊乳中获得，为获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定。早期胚胎细胞具有全能性，利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体。

（4）目的基因是否成功表达的依据是看能否获得由目的基因控制合成的蛋白质。 【考点定位】基因工程与胚胎工程的知识。

【名师点睛】本题意在考查能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，能用文字、图表以及数学方式等多种表达形式准确地描述生物学方面的内容。能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论的能力。

39.(2014·海南卷.31)[生物—选修3：现代生物科技专题]（15分） 下面是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图。

请据图回答：

⑴获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在 酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在 作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的 氨基酸序列，推测出响应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的 序列，再通过化学方法合成所需基因。

⑵利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有 、 、4种脱氧核苷酸三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。

⑶由A和载体B拼接形成的C通常称为 。

⑷在基因工程中，常用Ca2＋处理D，其目的是 。 【答案】（1）转录酶 DNA聚合酶 氨基酸 脱氧核苷酸 ⑵引物 目的基因模板（A基因） ⑶基因表达载体 ⑷使其成为感受态细胞，使大肠杆菌更容易吸收重组DNA分子

【考点定位】基因工程。

【名师点睛】本题意在考查考生理论联系实际，综合运用所学知识解决自然界和社会生活中的一些生物学问题的能力。

40.(2014·新课标全国Ⅰ卷.40)[生物－选修3：现代生物科技专题]（15分） 某研究者用抗原（A）分别免疫3只同种小鼠（X、Y和Z），每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价（能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数），结果如下图所示。

若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞（染色体数目为40条），并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞（染色体数目为60条）按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。

回答下列问题：

（1）制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上，则小鼠最少需要经过 次免疫后才能有符合要求的。达到要求的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是 小鼠，理由是 。

（2）细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交廇细胞外，可能还有 ，体系中出现多种类型细胞的原因是 。

（3）杂交瘤细胞中有 个细胞核，染色体数目最多是 条。 （4）未融合的B淋巴细胞经过多次传代培养后都不能存活，原因是 。

【答案】 （1）4 Y Y小鼠的血清抗体效价最高（2）B淋巴细胞相互融合形成的细胞、骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞 细胞融合是随机的，且融合率达不到100% （3）1 100 不能无限增殖

【考点定位】动物细胞工程。

【名师点睛】本题意在考查考生识记所列知识点，并能运用所学知识做出合理的判断或得出正确的结论的能力。

41.(2014·天津卷.8)嗜热土壤芽胞杆菌产生的β—葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：

Ⅰ.利用大肠杆菌表达BglB酶

⑴PCR扩增bglB基因时，选用 基因组DNA作模板。

⑵下图为质粒限制酶酶切图谱。bglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入 和 不同限制酶的识别序列。