SOP-ZL-TY040-01 微生物计数检查法 第 9 页 共 14 页 各品种项下规定的微生物限度标准解释如下： 101cfu：可接受的最大菌数为20； 102cfu：可接受的最大菌数为200;

103cfu：可接受的最大菌数为2000，依此类推。

若供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的检査结果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下的规定，判供试品不符合 规定。

4 稀释液、冲洗液及培养基

稀释液配制后，应采用验证合格的灭菌程序灭菌。

pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、pH6.8 无菌磷酸盐缓冲液、pH 7.2无菌磷酸盐缓冲液、pH7.6无菌磷酸盐缓冲液照缓冲液配制后，过滤，分装，灭菌。如需要，可在上述稀释液灭菌前或灭菌后加人表面活性剂或中和剂等。

0.9%无菌氯化钠溶液取氯化钠9.0g, 加水溶解使成1000ml，过滤，分装，灭菌。 5 培养基及其制备方法

培养基可按以下处方制备，也可使用按该处方生产的符合要求的脱水培养基。配制后，应按验证过的高压灭菌程序灭菌。 5.1 胰酪大豆胨液体培养基(TSB)

胰酪胨 17.0g 氯化钠 5.0g 大豆木瓜蛋白酶水解物 3. 0g 磷酸氢二钾 2.5g 葡萄糖/无水葡萄糖 2. 5g/2. 3g 水 1000ml 胰酷胨 17.0g 氯化钠 5.0g 大豆木瓜蛋白酶水解物 3.0g 磷酸氢二钾 2.5g 葡萄糖/无水葡萄糖 2.5g/2.3g 水 1000ml

除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节pH 使灭菌后在25℃的pH 值为7.3±0.2，加入葡萄糖，分装，灭菌。胰酪大豆胨液体培养基置20～25℃培养。 5.2 胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)

胰酪胨 15.0g 琼脂 15.0g 大豆木瓜蛋白酶水解物 5.0g 水 1000ml 氯化钠 5.0g

除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH 使灭菌后在25℃的p H 值为7.3±0.2，加人琼脂，加热溶化后，摇匀，分装，灭菌。 5.3 沙氏葡萄糖液体培养基(SDB)

动物组织胃蛋白酶水解物 葡萄糖 20.0g

SOP-ZL-TY040-01 微生物计数检查法 第 10 页 共 14 页 和胰酪胨等量混合物 10.0g 水 1000ml

除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH使灭菌后在25℃的pH 值为5.6 ±0.2，加人葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。 5.4 沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)

动物组织胃蛋白酶水解物 琼脂 15.0g 和胰酪胨等量混合物 10.0g 水 1000ml 葡萄糖 40.0g

除葡萄糖、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH 使灭菌后在25℃的pH 值为5.6±0.2，加人琼脂，加热溶化后，再加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。 如使用含抗生素的沙氏葡萄糖琼脂培养基，应确认培养基中所加的抗生素量不影 响供试品中霉菌和酵母菌的生长。 5.5 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA)

马铃薯（去皮） 200g 琼脂 14.0g 葡萄糖 20.0g 水 1000ml

取马铃薯，切成小块，加水1000m l,煮沸20～30分钟，用6～8 层纱布过滤，取滤液补水至1000m l,调节pH使灭菌后在25℃的pH 值为5.6±0.2 ,加入琼脂，加热溶化后，再加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。 5.6 玫瑰红钠琼脂培养基

胨 5.0g 玫瑰红钠 0.0133g 葡萄糖 10.0g 琼脂 14.0g 磷酸二氢钾 l.Og 水 1000ml 硫酸镁 0. 5g

除葡萄糖、玫瑰红钠外，取上述成分，混合，微温溶解，加入葡萄糖、玫瑰红钠，摇匀，分装，灭菌。

5.7 硫乙酵酸盐流体培养基

胰酪胨 15.0g 氯化钠 2.5g 酵母浸出粉 5.0g 新配制的0.1% 刃天青溶液 1.0ml 无水葡萄糖 5.0g L-胱氨酸 0. 5g 硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂 0.75g (或硫乙醇酸）（0.3ml) 水 1000ml

除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加人葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH , 使灭菌后在25℃的pH 值为7.1 土0.2。分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色)不超过培养

SOP-ZL-TY040-01 微生物计数检查法 第 11 页 共 14 页 基深度的1/2。灭菌。在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。

除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃ 培养。 5.8 肠道菌增菌液体培养基

明胶胰酶水解物 10.0g 二水合磷酸氢二钠 8.0g 牛胆盐 20.0g 亮绿 5mg 葡萄糖 5.0g 水 1000ml 磷酸二氢钾 2.0g

除葡萄糖、亮绿外，取上述成分，混合，微温溶解，调节p H 使加热后在25℃的pH 值为7.2 ± 0.2 ,加人葡萄糖、亮绿，加热至100°C 30分钟，立即冷却。 5.9 紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基

酵母浸出粉 3 .0g 中性红 30mg 明胶胰酶水解物 7.0g 结晶紫 2mg 脱氧胆酸钠 1.5g 琼脂 15.0g 葡萄糖 10.0g 水 1000ml 氯化钠 5.0g

除葡萄糖、中性红、结晶紫、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节p H 使加热后在25℃的p H 值为7.4±0 2。加入葡萄糖、中性红、结晶紫、琼脂，加热煮沸（不能在高压灭菌器中加热）。

5.10 麦康凯液体培养基

明胶胰酶水解物 20.0g 溴甲酚紫 10mg 乳糖 10.0g 水 1000ml 牛胆盐 5.0g

除乳糖、溴甲酚紫外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH 使灭菌后在25℃的pH 值为7.3 ± 0.2，加入乳糖、溴甲酚紫，分装，灭菌。 5.11 麦康凯琼脂培养基

明胶胰酶水解物 17.0g 中性红 30.Omg 胨 5.0g 结晶紫 1mg 乳糖 10.0g 琼脂 13.5g 脱氧胆酸钠 1.5g 水 1000ml 氯化钠 5.0g

除乳糖、中性红、结晶紫、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH 使灭菌后在25℃

SOP-ZL-TY040-01 微生物计数检查法 第 12 页 共 14 页 的pH 值为7.1±0.2，加人乳糖、中性红、结晶紫、琼脂，加热煮沸1 分钟，并不断振摇，分装，灭菌。

5.12 RV 沙门菌增菌液体培养基

大豆胨 4.5g 六水合氯化镁 29.Og 氯化钠 8.0g 孔雀绿 36mg 磷酸氢二钾 0.4g 水 1000ml 磷酸二氢钾 0.6g

除孔雀绿外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH使灭菌后在25℃的pH 值为5.2±0.2。加人孔雀绿，分装， 灭菌，灭菌温度不能超过115℃。 5.13 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基不

酵母浸出粉 3.0g 氯化钠 5.Og L-赖氨酸 5.0g 硫代硫酸钠 6.8g 木糖 3.5g 枸橼酸铁铵 0.8g 乳糖 7.5g 酚红 80mg 蔗糖 7.5g 琼脂 13.5g 脱氧胆酸钠 2.5g 水 1000ml

除三种糖、酚红、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH 使加热后在25℃的p H 值为7.4±0.2 , 加人三种糖、酚红、琼脂，加热至沸腾，冷至50℃倾注平皿（不能在高压灭菌器中加热）。

5.14 三糖铁琼脂培养基(TSI)

胨 20.0g 硫酸亚铁 0.2g 牛肉浸出粉 5.0g 硫代硫酸钠 0.2g 乳糖 10.0g 0.2%酚磺酞指示液 12.5ml 蔗糖 10.0g 琼脂 12.0g 葡萄糖 1.0g 氯化钠 5.0g 水 1000ml

除三种糖、0.2%酚磺酞指示液、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节p H 使灭菌后在25℃的pH 值为7.3±0.1，加入琼脂，加热溶化后，再加人其余各成分，摇匀，分装，灭菌，制成高底层(2～3cm)短斜面。 5.15 溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基

明胶胰酶水解物 20.0g 溴化十六烷基三甲铵 0.3g 氯化镁 1.4g 三甲铵 0.3g 硫酸钾 10.0g 琼脂 13.6g