了,因为这个工具个性化太强,不好举例说明。大家可以在以后的学习中自己实践。现在要教大家一个简单的定量方法-等高线定量法。他的好处和坏处最前面已经有过阐述,请大家斟酌使用。
等高线定量法:十分简单快捷。首先打开您的电泳照片,不用任何泳道或者条带识别步骤,直接执行“Volumn-Volumn Contour Tool”,将变成绿色加号的鼠标指向您感兴趣的Bands,在Bands的外围轻轻点击一下,Quantity One会为您自动描绘出这个band的等高线轮廓范围。
提示:
其实在Volumn工具中不止只有等高线可以使用,还有Freehand(手工绘制)、圆形、方形等工具。这些工具都可以用来圈定Band的范围。只是我觉得等高线法在这其中是最好的工具。Quantity One有一个很明显的缺点就是“Edit”工具中居然没有“Undo”的选项!如果我们对圈定的等高线不满意而又不能使用“Undo”怎么办?可以用鼠标指向我们想删除的Band,然后用“Del”键删除。
现在我们就可以直接看结果了。执行“Volumn-Volumn Analysis Report”,在弹出的“Volumn Report Options”选项卡中选择你感兴趣的项目,然后按“Done”按钮,在随后的报告单中就会显示出关于你圈定的Band的相关信息了。其中“Adj.Vol.”和“% Adj.Vol”最为重要,因为他们是背景排除后的Band相对量。
提示:
在“Volumn Report Options”中大家注意一个参数“Backgroud Substruction Method”。如果您自己选择了一块不含Band的凝胶区域作为背景区(可以使用“Volumn-Volumn Rec tool”圈定一块不含Band的方向区域做背景。圈定后双击该区域,在弹出的“Volumn Properties”选项中选择该区域作为“Backgroud”),这时您最好选择“Globe”方式;如果您没有选择一块区域作背景则选择“local”方式做背景去除。
提示:
如果您想像刚才轨迹法定量时直接让等高线法的“Volumn-Volumn Analysis Report”中包含直接的定量值,可以在您自己跑的Maker band上用Volumn工具标记,然后再双击打开“Volumn Properties”选项,在“Volumn Type”中选择“Standard”,并将数值填入下面的“Concentration”框中。这样一来您就可以直接在“Volumn-Volumn Analysis Report”得到真实的定量值了。