29. 沉降速度法 / 沉降平衡法，凝胶过滤法，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 30. 亲和层析法

31. 1－100nm，带有同种电荷，能形成水化层

32. 抗原决定簇与抗体结合部位构象互补，二者各有对应的化学基团通过作用力使二者结合（离子键、氢键等）

33．色氨酸，组氨酸，脯氨酸 34．内质网，高尔基体 35．双电层，水化层

36．固定血红素，保护血红素铁免遭氧化，为氧分子提供一个合适的结合部位 37．盐析法，有机溶剂沉淀法，重金属盐沉淀法，生物碱试剂沉淀法，加热变性沉淀法 38．紫外差光谱法，荧光和荧光偏振法，圆二色性法，核磁共振法

（三）选择题

1．A 2．C 3．C 4．C 5．A 6．D 7．B 8．D 9．D 10．A 11．D 12．A 13．C 14．D 15．C 16．D 17．A 18．A 19．B 20．C 21．B 22．D 23．D 24．D 25．A 26．C 27．A 28．B 29．B 30．C 31．A 32．A 33．B 34．D 35．A 36．B

（四）是非题

1．对 2．错 3．错 4．错 5．错 6．对 7．对 8．错 9．错 10．对 11．错 12．错 13．对 14．错 15．错 16．对 17．对 18．错 19．对 20．错 21．错 22．错 23．错 24．对 25．错 26．错 27．错 28．错 29．错 30．错 31．错 32．对 33．对 34．对 35．对 36．对 37．对 38．对 39．错 40．对

（五）简答与计算

1．Tyr－Gly－Gly－Phe－Leu

2． (1)多聚亮氨酸的R基团不带电荷，适合于形成。螺旋。 (2)异亮氨酸的β碳位上有分支，所以形成无规则结构

(3)在pH7.0时，所有精氨酸R的基团都带正电荷，正电荷彼此相斥，使氢键不能形成，所以形成无规则结构。

(4)在pHl3.0时，精氨酸的R基团不带电荷，并且β碳位上没有分支，所以形成α螺旋。

(5)在pHl.5时，谷氨酸的R基团不带电荷，并且芦碳位上没有分支，所以形成α螺旋。

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(6)因为苏氨酸β碳位上有分支，所以不能形成α螺旋。

(7)脯氨酸和羟脯氨酸折迭成脯氨酸螺旋，这脯氨酸螺旋是不同于α螺旋的有规则结构。

一个小肽的氨基酸顺序的测定用异硫氰酸苯酯；多肽链的氨基末端的确定用丹磺酰氯；一个没有二硫键的蛋白质的可逆变性用尿素；芳香族氨基酸残基的羧基一侧肽键的水解用胰凝乳蛋白酶；甲硫氨酸的羧基一侧肽键的裂解用溴化氰；通过氧化途径将二硫键打开用过甲酸。 3．pI=（2.19＋4.25）/2 ＝3.22

谷氨酸的等电点应是3.22。 在pH3.22时，?－COOH和?－COOH共解离1个基团，即Glu分子处于净电荷为零的两性离子状态。

4．在伸展的多肽链中，每一个氨基酸残基长度是0.36nm。该肽链的长度是0.36?100?36nm。氨基酸残基的平均分子量为120（也可为110），则该蛋白质的分子量是100?120?12000

5．牛胰核糖核酸酶变性－复性实验。天然的牛胰核糖核酸酶在8 mol/L的尿素或6mol/L的盐酸胍存在下，用β硫基乙醇处理后，分子内的4个二硫键断裂，紧密的球状结构伸展成松散的无规卷曲构象，活性丧失。用透析法将变性剂除掉后，牛胰核糖核酸酶能回复到天然构象，活性能达到原来活性的95％以上。而8个半胱氨酸随机结合，形成正确构象的概率是1/10。

这说明牛胰核糖核酸酶肽链上的氨基酸序列信息控制肽链折迭成正确的天然构象。

6．Lys，His和Arg的含量较高。静电相互作用。组蛋白的pI值是10.8，在生理条件下组蛋白带大量的正电荷，而DNA的磷酸基团带大量的负电荷。

7．长时间储存的血液中，红血球经过酵解途径消耗2，3－BPG。2，3－BPG的浓度下降会使得血红蛋白氧合曲线左移，P50值变小，卸载氧的能量下降，造成运送氧的效率下降。如果这样的血用于输血，可能引起病人窒息。

8．如果一个抗体同时对两个分子量不同的蛋白质都有作用，则分子量较低的蛋白质非常可能是分子量较高蛋白质的降解产物。证明抗原性相同的方法，可以用免疫双扩散，有时分子量较小的肽链不能产生免疫沉淀反应，则可用免疫抑制实验。可是也有相当数量的蛋白质可以具有相同或相似的免疫原性，能产生免疫交叉反应，但是结构上仍有差异。为此，要证明一个组份是否另一个蛋白质的降解产物，更有效的方法是比较两者的酶解图谱。例如，早年用的双向图谱，以及近年来常用的HPLC。最为有效的方法是酶解产物的质谱比较。然而，这些方法均较免疫反应复杂，而且耗时。

9．pH=6.0比pH=2.0或pH=13.0时电泳能提供更好的分辨率。因为在pH=6.0时，这三种肽的净电荷分别是+1，-1，0。在pH=2.0时，这三种肽的净电荷分别是+2，+1，+2。在pH=13.0时，这三种肽的净电荷分别是-1，-2，-2。 10．16400/mol，4个 11．2.71，9.23

5

30

12．IgG分子由两条相同的重链和两条相同的轻链组成，四条肽链间有二硫键连接。重链的分子量为53000左右，轻链的分子量为22000左右。重链和轻链各分两个区域，重链N?端1?4为可变区，C?端3?4为恒定区，轻链N?端1?2为可变区，C?端1?2为恒定区。重链的可变区和轻链的可变区共同组成一个抗原结合部位。

13．分配柱层析、纸层析、薄层层析、离子交换层析、气相色谱、高效液相色谱。

14．脯氨酸羟化酶可以催化脯氨酸残基转变为羟基脯氨酸残基，产生大量氢键结合位点，稳定胶原三股螺旋及胶原纤维的结构。胶原纤维是血管的结构成分，如果抑制脯氨酸羟化酶的作用，会引起血管变脆、牙龈出血。维生素C是保证脯氨酸羟化酶和赖氨酸羟化酶活性所必须的组分。人和灵长类动物不能以葡萄糖为原料合成维生素C，因此缺乏维生素C会引起脯氨酸和赖氨酸残基无法羟化，出现上述症状。 15．4.7，9.9

16．Asp，Thr，Gly，Leu，Lys

17．Asn－Ala－Tyr－Glu－Lys－His－Gln－Val 18．以制备A蛋白的单克隆抗体为例。

（1）用A蛋白作抗原免疫小鼠脾脏，制成B淋巴细胞悬液。 （2）繁殖小鼠骨髓病细胞。

（3）制得的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，产生杂交瘤细胞系。 （4）杂交瘤细胞转移到只有杂交瘤细胞才能生长的介质中进行选择培养。 （5）用ELISA筛选出分泌A蛋白质单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

（6）对所得的杂交瘤细胞株进行扩大化培养，从培养物中分离纯化所需的单克隆抗体。 19．（1）蛋白质B对配体的亲和力高

（2）蛋白质A的结合常数Ka＝1.0×10（mol/L） 蛋白质B结合常数Ka＝1.0×10（mol/L） 20．（1）Glu和Glu各50%时的pH值为9.67 （2）pH＜3.22时Glu总带正电荷 （3）Glu和Glu缓冲范围在pH4.25左右

21．多聚脯氨酸不能形成形成胶原样的三股螺旋，因为胶原特有的(甘—脯—X)n结构。多聚(甘—脯—甘—脯)虽然具有类似胶原的特征结构，然而，和多聚(甘—脯—甘—脯)中的6个残基(甘—脯—甘—脯—甘—脯)中，只有一个甘氨酸的定位和胶原中的甘氨酸相当，即少了一半定位正确的甘氨酸。因此，有可能形成类似胶原状的三股螺旋结构，但是比较松散，稳定性明显降低。

±

--=

9

－16

－1

31