40.答案当微生物以单批培养的方式培养到指数期的后期时，以一定速度补充新鲜培养基与原生长物搅拌均匀。

利用溢流的方式以同样的流速不断流出培养物，使培养物达到动态平衡。

微生物可长期保持在指数期时的平衡生长状态和稳定的生长速率的培养方法。

41.答案根据恒浊器或恒化器进行微生物连续培养的原理，应用于大规模工业发酵中的连续培养称为连续发酵。

其优点为：高效：可简化单批发酵中进料、出料、灭菌，洗罐等常规操作，节约工时，提高设备利用率；便于仪表控制；产品质量较稳定；节约劳力、动力、热力、使水、电、汽的负荷均匀合理。

42.答案在连续发酵中，由于菌体处于长期高速繁殖状态，菌种易因变异而退化。

无法避免变异的发生，特别是容易产生比原生产菌株生长速率高、营养要求低和低谢产物少的负变类型。

易受杂菌污染。

因此连续发酵的连续时间是有限的。

目前采用连续发酵进行生产的有：酵母菌体，乙醇、乳酸和丙酮丁醇发酵，假丝酵母石油脱蜡，浮游生物生长。

43.答案最适生长温度可简称为：“最适温度”，其意义是指某种细菌分裂代时最短或生长速率最高时的培养温度。

最适生长温度对同一微生物的生长量，发酵速度，代谢产物累积量的影响不相同。

最适温度不等于生长量最高时的培养温度。 最适温度不等于发酵速度最高时的培养温度。 最适温度不等于累积代谢产物量最高时的培养温度。

44.答案微生物生长温度的范围有3个重要指标称为生长温度的三基点。

最高生长温度。 最适生长温度。

45

最低生长温度。 45.答案

46.答案①厌氧菌因缺乏SOD，因而极易被生物体内产生的超氧化物阴离子自由基（

）毒害致死。

②超氧阴离子自由基是活性氧的形式之一，含有奇数电子，带负电荷，它既具有分子性质，又有离子性质，反应力极强，性质极不稳定，在细胞内可破坏各种重要的生物高分子和质膜，也可形成其他活性氧化物，对生物体极其有害。

③厌氧菌体内因无SOD，故不能将H2O2。

④厌氧菌体内无细胞色素氧化酶，大多数还缺乏过氧化氢酶。

⑤在有氧时，厌氧菌无法生活，故易受致死。

47.答案灭菌：采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。

杀菌：菌体虽死，但形体尚存。

溶菌：菌体被杀死后，细胞发生溶化、消失的现象。 （

48.答案消毒是一种采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌，而对被消毒的物体基本无害的措施。

例如：对皮肤、水果和饮用水进行药剂消毒的方法。

毒害而歧化成

例如：对啤酒、牛奶、果汁和酱油等消毒处理的巴氏消毒法。

49.答案利用某种理化因素完全抑制微生物的生长繁殖，从而达到防止食品等发生霉腐的措施。

措施：

4℃或0℃，－20℃，－70℃，－196℃保存食物、药品和菌种。

缺氧：用除氧剂防止食品和粮食的霉腐；， 干燥：晒干或红外线干燥法对食品粮食进行干燥 处理，或在密闭条件下，用石灰、氯化钙等作为吸湿剂；，

高渗：高糖、高盐溶液进行糖渍和盐腌；， 高酸度：用乳酸菌产生的乳酸来抑制杂菌生长，如泡菜等；，

防腐剂：加入苯甲酸、山梨酸等防腐剂。 50.答案

这种突变株即使在有磺胺存在的条件下仍能大量合成叶酸；从而获得了抗磺胺的能力并对磺胺产生了耐药性。

53.答案磺胺类药物是细菌生长必需的代谢物??对氨基苯甲酸（PABA）的抗代谢物。

细菌所必需的PABA可自行合成，也可外源获得，若自行合成则PABA与二氢蝶啶在二氢叶酸合成酶的作用下，合成二氢叶酸，然后再通过二氢叶酸还原酶的作用，生成四氢叶酸。

磺胺的结构与PABA极其相似，两者竞争性地与二氢叶酸合成酶结合，阻止或取代了PABA掺入到叶酸分子中去，从而阻断了细菌细胞中重要组分叶酸的合成。

叶酸是一种辅酶，在氨基酸、维生素的合成中起重要作用。缺乏此酶，细胞活力受到明显破坏。

磺胺抑制细菌的生长是因为许多细菌需要自行合成叶酸生长，而人和动物可利用现成的外源叶酸，故不受磺胺的干扰，所以磺胺类药物可杀灭进入人体的病原细菌。

54.答案由于：抗生素产生者已不仅仅限于微生物，已扩展至整个生物界；

抗生素已不仅仅是抑制细菌，现已扩展到对病毒、癌细胞、寄生虫、红蜘蛛和螨类等对象。

抗生素已不仅仅局限于新陈代谢过程中产生的化

51.答案所谓石炭酸系数指：在一定时间内被试药物能杀死全部供试菌的最高稀释度与达到同效的石炭酸的最高稀释度的比率。

一般规定时间为处理10分钟，供试菌为伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)。

例如：某药剂以1：300的稀释度在10分钟内杀死所有供试菌，而达到同效的石炭酸的最高稀释度为1：100则该药的石炭酸系数

P.C=

=3。

学物质，还应包括用生物加上化学或生物化学方法合成的半合成抗生素。

55.答案为了解决在抗生素使用中出现的菌体耐药性和副作用等问题，已对各种天然抗生素的结构进行化学改 造。凡经化学方法改造后的抗生素、称为半合成抗生素。

例如半合成青毒素

52.答案有的细菌通过突变，改变了二氢叶酸合成酶的性质，合成了一种对磺胺药物不敏感的酶类。

56.答案实验室培养法：

46

固体培养法：a.好氧菌的培养：斜面、平板、克氏扁瓶、茄子瓶平板；b.厌氧菌的培养：高层琼脂柱、Hungate滚管、厌氧培养皿、厌氧手套箱、厌氧罐。

液体培养法：a.好氧菌的培养：试管液体、三角瓶浅层、摇瓶、台式发酵罐；b.厌氧菌的培养：加还原剂（有机、无机），封凡士林-石蜡层。

生产实践：

固体培养法：a.好氧菌的培养：各种曲法培养；b.厌氧菌的培养：堆积培养法。

液体培养法：a.好氧菌的培养：浅盘发酵、发酵罐深层通气培养；b.厌氧菌的培养：厌氧发酵罐（无通气、不搅拌），

57.答案好氧菌的曲法培养：将接过种的固体基质摊铺在容器表面，如曲盘、竹帘、曲槽（通风曲）或装入塑料袋中进行培养。曲法培养既可使微生物获得充分的氧气，又利于微生物生长中热量的及时释放。

厌氧菌的堆积培养：一般系指酵母菌在无氧条件下的乙醇发酵，即白酒的生产，多采用大型深层地窑进行堆积式的固体发酵。

58.答案营养物，温度，pH值，氧气。

59.答案比浊法：测细菌生长后的浊度，可用”721“分光光度计在450～650nm处测定，选用带侧臂的三角瓶更好。

生理指标法：

测含氮量：以微生物培养后粗蛋白的总量作为生长量的指标，根据测得的总氮量乘以6.25即得粗蛋白量。

测含碳量：将待测样品混入1ml水或缓冲液中，用2ml2％重铬酸钾溶液在100℃下加热30分钟，冷却后加水稀释至5ml，于580nm处测OD值可推算出生长量。

其他：磷、DNA、RNA、ATP、DAP和N-乙酰胞壁酸的含量，以及产酸、产气、产CO2、耗氧、粘度和产热等指标，均可用于生长量的测定。

60.答案细菌生长的最适pH值为7.0～8.0，放线菌生长的最适pH值为7.5～8.5，酵母菌生长的最适pH值为3.8～6.0，霉菌生长的最适pH值为4.0～5.8，

47

61.答案在实验室中为保证液体培养中菌体对氧的需要一般使用锥形瓶，瓶口敷以8层纱布，利于通气，进行振荡培养，加大溶氧量。

适当的装液量也与氧的供应有关，一般为：500ml锥形瓶，装液量以50～100ml为宜。

工业发酵中一般通入无菌空气并结合有效的搅拌，以保证菌体对氧气的需求。通气量因菌而异。 第八章 微生物遗传与育种 一、复习题（74小题）

1.试述当初科学家是如何利用噬菌体感染实验来证明核酸是遗传物质基础的。

2.何谓转座因子？转座因子共分哪几类？转座作用为什么会导致基因突变？试从突变机制与突变效应两方面比较转座作用与移码突变的区别。

3.何谓移码突变？简述吖啶类化合物诱发移码突变的机制。为什么移码突变只能算是DNA分子的微小损伤？

4.试述亚硝酸引起DNA突变的分子机制。 5.说明5-溴尿嘧啶为什么既能引起微生物发生突变又能引起微生物发生回复突变。它对哪些状态的微生物起诱变作用或不起诱变作用？

6.试述紫外线的诱变机制、光复活作用及其机制。 7.试述艾姆斯试验检测化学致癌物的理论依据、主要步骤和其实践意义。

8.在筛选营养缺陷型菌株时，若将诱变后的酵母或霉菌培养在含有制霉菌素的基本培养基中，为什么能达到淘汰野生型和浓缩缺陷型的目的？

9.在筛选营养缺陷型菌株时，若将诱变后的细菌培养在含有青霉素的基本培养基中，为什么能达到淘汰野生型和浓缩缺陷型的目的？

10.试述利用逐个检出法检出营养缺陷型的主要步骤及其原理。

11何谓转化？试述转化的具体过程。

12.何谓转化？细菌进行转化的必要条件是什么？ 13.何谓转化？何谓转染？转染与转化有何不同？ 14.何谓转导？何谓转染？转染与转导有何不同？ 15.HFT（高频转导）裂解物是如何形成的？

16.LFT（低频转导）裂解物是如何形成的？ 17.何谓转导？试比较普遍转导与局限转导的异同。 18.为什么Hfr菌株与F-菌株发生接合时，大多数情

-+

况下F菌株不能变成F菌株？

38.何谓质粒？试述其特点及其在基因工程中的作用。

39*何谓基因突变？试述其共同特点。

40.试述营养缺陷型突变株在理论研究和生产实践工作中的应用。

二、参专答案（74小题）

1.答案用标记（32P，35S）T2与E.coli，混合，经短

32

时间保温后。在组织捣碎机中剧烈搅拌。离心，发现P35

全部都与细菌一起出现在沉淀物中，而全部S都在上

19.试比较F+菌株与F-菌株接合以及Hfr菌株与F-菌株接合的不同。

20.试比较F+与F-，Hfr与F-，F'与F-菌株接合时，在转性与转移供体菌基因两方面的区别。

21.将重组载体导入大肠杆菌细胞有哪几种方法？试简述之。

22.作为基因工程载体需具备哪些条件？ 23.试比较低频转导和高频转导的异同。

24.什么叫溶源转变？它与转导有何本质上的不同？

25.为什么流产转导子在选择性培养基平板上只能形成微小菌落？

26.试简述流产转导的特点。

27.试比较完全普遍性转导与流产普遍转导的主要区别。

28.何谓完全缺陷噬菌体？何谓部分缺陷噬菌体？它们各自是如何形成的？在转导中各起什么作用？

29.为什么λ局限转导噬菌体只能通过诱导溶源菌产生而不能由裂解性感染产生？

30.试述大肠杆菌Hfr菌株与F-菌株的接合过程。 31.在大肠杆菌接合作用中性菌毛的作用是什么？ 32.在基因工程中可通过哪3种途径获得目的基因的DNA片段？

33.试述微生物在基因工程技术各环节中的用途。 34.试述微生物具有哪些独特生物学特性才使它成为遗传学、生物化学、分子生物学等重要学科的研究对象。

35.在F因子上与接合作用有关的基因区称为什

+

么？为什么F菌株可作为接合作用的供体菌？

清液中。

以上实验说明噬菌体蛋白质外壳在细胞外，只有T2的核酸进入细胞内，最终释放出完整子代T2。说明只有核酸才是该噬菌体的全部遗传信息载体。

2.答案转座因子：染色体组中或染色体组间能改变自身位置的一段DNA序列，称为转座因子。

转座因子共分3类：IS，Tn，Mu噬菌体。 转座效应：在转座因子的跳跃过程中，往往导致基因重排、染色体的断裂或重接，从而产生重组交换，或使某些基因启动或关闭，结果导致基因突变。

转座作用的突变机制是一种遗传因子从基因组的一个位点转移至另一个位点。它能在转录水平上影响一个操纵子内一系列基因的表达。移码突变的突变机制是DNA分子中非三的整倍数的核苷酸的增加或缺失造成该基因突变位点后的全部密码子的阅读框架发生错误。它是在转译水平上影响一个基因的表达。

3.答案移码突变：指诱变剂使DNA分子中的一个或少数几个核苷酸的增加或缺失，从而使该基因突变部位后面全部遗传密码的阅读框架发生错误的突变。

吖啶类诱发移码突变机制可能是：吖啶类化合物的分子结构类似于一个嘌呤-嘧啶对，故能嵌入DNA两相邻碱基对之间造成双螺旋扭曲。在DNA复制过程中造成碱基的增加或减少，从而使该基因突变部位后面全部遗传密码阅读框架发生错误。

移码突变只能算DNA微小损伤的原因是：移码突变只涉及该基因中突变部位后面全部遗传密码的阅读框架发生错误。换言之移码突变只涉及一个基因突变，而不影响突变部位后面其他基因的正常读码。

48

36.举例说明R质粒怎样引起细菌种群的变异及其机制。

37.简述根癌土壤杆菌诱发冠瘿癌形成过程的主要步骤。