6.答案灭菌物体含菌量的影响：含菌量越高，杀死最后一个微生物个体所需时间越长。天然原料含菌量高，化学试剂含菌量少。

灭菌锅内空气排除程度的影响：空气排除不净，虽压力增高，但实际温度达不到，不能最后杀死芽孢。

灭菌对象的体积：不宜进行大容量培养基的灭菌。 灭菌对象的pH值影响：pH6.0～8.0时微生物不易死亡，pH?6.0时易死亡。

加热与散热速度：灭菌彻底与否与预热速度快慢，灭菌后的散热速度有关，均不宜过快或过慢。 7.答案①好氧菌的培养：浅盘培养：在大型的盘状容器内进行浅层液体静止培养，如早期的柠檬发酵。

②发酵罐深层液体培养：在密闭的罐形培养容器内进行液体深层发酵，需通气搅拌。如生产菌体，酶制剂，氨基酸和有机酸的发酵罐发酵法。

③厌氧菌的培养：大型发酵罐：不通气无搅拌，如丙酮丁醇的液体深层发酵。

8.答案自然环境中到处都有微生物孳生，其中一部分是对人类有害的微生物，它们通过气流、相互接触或人工接种等方式传播到合适的基质或生物对象上造成种种危害，成为污染。

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其危害是：1）工农业产品、食品的霉腐变质；2）实验室中微生物、动植物组织细胞纯培养物的污染；3）培养基养或生化试剂的染菌；4）微生物发酵工业中的杂菌污染；5）人体、动植物体受病原微生物的感染而患各种疾病。

控制措施：1）利用高温灭菌；2）利用热水或蒸汽消毒、杀灭病原菌；3）利用消毒剂对皮肤、水果、皮肤、饮用水消毒；4）用低温、缺氧、干燥、高渗、高酸度或加防腐剂进行防腐；5）用抗生素、磺胺等药物或中草药进行化疗。 9.答案否：

温度：在不同生理代谢过程中，微生物并不一定需要最适的生长温度，特别是具有产量意义的代谢产物的合成往往需要低于最适生长温度。如产黄青霉165小时的发酵过程中分四段控制温度

比

30?C恒温培养者青霉素产量提高了14.7％。

通气量：在发酵前期给予低通气量有利于菌体大量增殖，至对数期往往采用较高通气量，以利于产物的积累（如短小芽孢杆菌209号菌株碱性蛋白酶的生产前期（10小时以前）通气量1：0.2~0.3，后期（11小时到结束）通气量1：0.4~0.5）。

pH值：同一微生物在不同的生长阶段和不同的生理生化过程中也有不同的最适pH要求。黑曲霉在pH2.0~2.5范围内有利于产柠檬酸,在pH2.5~6.5范围内 以菌体生长为主，而在pH7左右时，则以合成草酸为主。10.答案微生物外环境中的pH变化很大，但内环境中的pH相当稳定，一般都接近中性，只有在周质空间中的酶和胞外酶的最适pH才比较接近环境的pH值。

内环境中中性的pH值可免除DNA、ATP和叶绿素等成分被酸破坏，或RNA、磷脂等被碱破坏。

pH值可间接影响培养基中营养物质的离子化程度，从而影响微生物对营养物质的吸收。

pH值可间接影响环境中有害物质对微生物的毒性。

pH值可间接影响代谢反应中各种酶的活性等。 11.答案

13.答案

12.答案

14.答案D-环丝氨酸，万古霉素，瑞斯托霉素或杆菌肽，青霉素，头孢菌素；（顺序可颠倒，或其他具同样功能的抗生素）

15.答案设法使群体中的所有微生物细胞尽可能都处于同样的细胞生长和分裂周期中的培养方法，即同步培养。

通过同步培养而使细胞群体处于分裂步调一致的状态，称为同步生长。

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16.答案通过环境条件来诱导同步性，如变换温度、光线或向处于稳定期的培养物中添加新鲜培养基。

通过物理学方法从随机的不同步细菌群体中选择出同步的群体，一般可采用选择性过滤或梯度离心法。 17.答案细菌的生长速率等于零；细胞形态变大或增长；细胞内RNA尤其是rRNA含量增高，原生质呈碱性；合成代谢活跃，核糖体、酶类和ATP合成加快，易产生诱导酶；对外界不良条件，例如NaCl溶液浓度、温度和抗生素反应敏感。

18.答案生长速率常数R最大，代时（G）最短；经胞进行平衡生长，菌体内各种成分最均匀；酶系活跃，代谢旺盛。

19.答案细胞开始贮存糖原、异染颗粒和脂肪等贮藏物；多数芽孢杆菌在稳定期开始形成芽孢；有的微生物在稳定期开始合成抗生素等次生代谢产物。

20.答案在衰亡期中细菌个体死亡的速率超过新生的速率，整个群体呈现负生长；细胞形态多样，产生膨大、不规则的退化形态；有的细菌因蛋白水解酶活力的增强发生自溶；有的微生物在衰亡期产生或释放抗生素或其他次生代谢产物；芽孢杆菌在衰亡期释放出芽孢。 21.答案除菌种外以下3个因素可影响生长曲线延滞期的长短：

①接种龄：如果用对数期接种龄的“种子”接种，则子代培养物的延滞期就短；如以延滞期或衰亡期的“种子”接种，则子代培养物的延滞期就长，如果以稳定期“种子”接种则延滞期居中。

②培养基成分：接种到营养丰富的天然培养基要比接种到营养单调的组合培养基中的延滞期短；接种到同种培养基要比接种到它种培养基的延滞期短。

③接种量：接种量大，延滞期短，反之则长。 22.答案营养物尤其是生长限制因子耗尽；营养物比例失调，例如C/N比值不合适等；酸、醇、毒素或H2O2等有害代谢产物的累积；pH、氧化还原电势等物理、化学条件不适宜。

23.答案外界环境对菌体生长越来越不利；细胞内分解代谢大大超过合成代谢，从而导致菌体死亡。

24.答案把少量纯种行二分分裂的单细胞细菌接种到恒容积的液体培养基中；在适宜的温度、通气条件下（厌氧菌不能通气）进行培养；随培养时间的延长，细菌群体将有规律地生长；以细菌细胞数目的对数作为纵坐标，以培养时间作为横坐标，可绘制出一条有规律的曲线，称之为细菌的典型生长典线。

25.答案稳定期是以生产菌体与菌体生长相平行的代谢产物（例如单细胞蛋白、乳酸等）为目的的一些发酵生产的最佳收获期；是对某些生长因子，例如维生素和氨基酸等进行生物测定的必要前提；对稳定期到来的原因进行研究可促进连续培养技术的设计和研究。 26.答案根据微生物的生长速率常数（growth rate constant）即分裂代数的不同作为划分生长曲线4个时期的依据。

典型生长曲线分为：延滞期、指数期、稳定期和衰亡期4个时期。

27.答案根据培养器内微生物的生长密度，用光电控制系统控制培养液的流速以取得高密度、生长速度恒定的微生物细胞的连续培养器称为恒浊器。

当培养基的流速低于微生物的生长速度时，菌体密度增高，通过光电系统的调节，使培养液流速加快。

当菌体密度降低时，则通过光电系统的控制，降低培养液的流速，以达到恒密度培养的目的。 28.答案保持培养液流速不变，通过控制作为生长限制因子的某种营养物的浓度，使微生物始终在低于其最高生长速率条件下进行生长繁殖的连续培养器，称为恒化器。

菌体密度随时间的延长而增高。

生长限制因子的浓度随时间的增长而降低。 两者相互作用的结果，使微生物的生长速率与新鲜培养基的流速相平行，可获得生长速率均一、菌体密度稳定的菌体。

29.答案多数细菌为专性好氧菌，例如铜绿色假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa），

专性好氧菌必须在有分子氧的条件下才能生长。 有完整的呼吸链，以分子氧作为最终氢受体。 细胞内含有超氧化物歧化酶和过氧化氢酶。

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30.答案许多细菌是兼性厌氧菌，肠杆菌科的各种细菌， 例如，大肠杆菌，产气肠杆菌等，均为兼性厌氧性细菌。

兼性厌氧菌在有氧或无氧条件下均能生长，但在有氧情况下生长得更好。

在有氧时靠呼吸产能，无氧时借发酵或无氧呼吸产能。

细胞含SOD和过氧化氢酶。

31.答案一些细菌为微好氧菌，例如氢单胞菌（Hydrogenomonas），微好氧菌是一些只能在较低的氧分

33

压（1?10～3?10Pa）下才正常生长的微生物。通过呼

不一定在酸性条件下生活，但能耐受酸性条件的微生物称为耐酸性微生物，例如乳酸菌。

36.答案测体积：待测培养液置于刻度离心管中进行自然沉降或离心，观察沉淀物体积。

吸链并以氧为最终氢受体而产能。

32.答案一般的乳酸菌多数是耐氧菌。例如乳酸乳杆菌（Lactobacillus lactis），

耐氧菌可在有分子氧存在的条件下进行厌氧生活。

生长不需要氧，分子氧对它们无毒害。 无呼吸链，依靠专性发酵产能。

细胞内存在SOD和过氧化物酶，缺乏过氧化氢酶。33.答案一些细菌为厌氧菌。例如梭菌属的丙酮丁醇梭状芽孢杆菌（Clostridium acetobutylicum）。

分子氧对厌氧菌有毒害作用，短期接触空气，也会抑制生长甚至致死。

在空气或含10％CO2的空气中，在固体培养基表面也不生长，只在深层的无氧或低氧化还原势的环境下才能生长。

其生命活动所需能量通过发酵、无氧呼吸、环式光合磷酸化或甲烷发酵来提供。

细胞内缺乏SOD和细胞色素氧化酶，大多数缺乏过氧化氢酶。

34.答案凡是最适生长pH值偏于碱性范围内的微生物称为嗜碱微生物，例如尿素分解菌。

不一定要在碱性条件下生活，但能耐受较碱的条件的微生物，称为耐碱微生物，例如某些链霉菌。 35.答案凡是最适生长pH值偏于酸性范围内的微生物称为嗜酸微生物，例如硫杆菌属的细菌可在pH1～2的条件下生存。

时。

37.答案液体稀释法：对未知菌样作连续的10倍系列稀释，根据估计数，从最适宜的3个连续的10倍稀释液中各取5ml试样，接种到3组共15支装有培养液的试管中，经培养后，记录每组稀释度出现生长的试管数，查MPN（最大可能数量）表，根据样品的稀释倍数可计算出其中的活菌含量。

平板菌落计数法：取一定体积的稀释菌液与合适的固体培养基混合，经保温培养后数出平板上长出的菌落再乘以菌液稀释度，即可计算出原菌液的含菌数。 38.答案4个因素影响指数期细菌的增代时间：

菌种：不同菌种的代时差别极大，如大肠杆菌代时最短，为17分钟，而梅毒螺旋体代时最长，为33小

营养成分：同一种细菌在营养物丰富的培养基中生长代时最短，反之则长。

培养温度：温度对细菌的生长速率及代时有极其明显的影响，在最适温度时，增代时间短，过高或过低的温度，增代时间延长。

营养物浓度：营养物浓度可影响细菌的增代时间、生长速率和总生长量。营养物浓度低，影响生长速率，营养物浓度逐渐提高，不影响生长速率，只影响最终的菌体产量，营养物浓度再提高??生长速率和菌体产量均不受影响。

39.答案凡是处于较低浓度范围内就可影响菌体生长速率和菌体产量的营养物，称为生长限制因子。

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