用S1核酸酶切除 用51外切核酸酶切除

42．在DNA的酶切反应系统中，通常：( )

用SSC缓冲液 加入BSA等保护剂

加入Mg2+作辅助因子 上述说法中，有两项是正确的

43． 黏性末端连接法，不仅操作方便，而且( )

产生新切点

易于回收外源片段

载体不易环化

影响外源基因的表达

44．在下列表型中，( )是基因工程上理想的受体菌表型

r+m+rec*

r-m-rec- (C)r-m-rec+

r+m+rec-

45．关于DNA接头在基因工程中的作用，下列说法中哪一项不正确?( )

给外源DNA添加适当的切点 调整外源基因的可读框

人工构建载体

增加调控元件

46．cDNA文库包括该种生物的( )

某些蛋白质的结构基因 所有结构基因

所有蛋白质的结构基因

内含子和调控区

47．下列关于建立cDNA文库的叙述中，哪一项是错误的?( )

从特定组织或细胞中提取DNA或RNA

用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA

以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA 新合成的双链DNA甲基化

48．下列对黏性末端连接法的评价中，哪一项是不正确的? ( )

操作方便 易于定向重组

易于回收片段

载体易于自身环化，降低重组率

49．关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确?( ) (功具有可诱导性

具有可转移性

不同细菌出现感受态的比例是不同的

细菌生长的任何时期都可以出现

50．下面关于用T4多核苷酸激酶标记5' 端制备探针的描述中( )是不正确的。

既能标记DNA，又能标记RNA

既能标记双链DNA又能标记单链DNA

只能标记突出的5' 端不能标记其他类型末端

DNA或RNA必须有5'-OH的存在 51．Southem印迹的DNA探针( )杂交。

只与完全相同的片段

可与任何含有相同序列的DN***段

可与任何含有互补序列的DN***段’．

可与用某些限制性内切核酸酶切成的DN***段

以上都是

52． 用下列方法进行重组体的筛选，只有( )说明外源基因进行了表达。

Southem印迹杂交 Western印迹

Northem印迹杂交

原位菌落杂交

53．下列哪一个不是Southern印迹法的步骤?( )

用限制酶消化DNA

DNA与载体的连接

DN***段转移至硝酸纤维素膜上

用凝胶电泳分离DN***段 用一个标记的探针与膜杂交 54． 报告基因( )

以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列

以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区

能用于检测启动子的活性

能用于确定启动子何时何处有活性

55． 在利用lacZ失活的显色反应筛选法中，IPTG的作用是( )

诱导宿主的α肽的合成 作为酶的作用底物

诱导宿主的ω肽的合成

作为显色反应的指示剂

56. 切口移位是指在( )作用下，使( )带上放射性标记。

DNA聚合酶I，RNA DNA聚合酶Ⅲ，RNA

DNA聚合酶I，DNA DNA聚合酶Ⅲ，DNA

57．用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的( )

DNA

RNA

抗体

抗原

58．Southern印迹是用DNA探针检测DN***段，而Northern印迹则是：( )

用RNA探针检测DN***段 用DNA探针检测RN***段

用RNA探针检测RN***段 用DNA探针检测蛋白质片段

59．用免疫化学法筛选重组体的原理是( )

根据外源基因的表达 根据mRNA同DNA的杂交

根据载体基因的表达 根据DNA同DNA的杂交

60．随机引物标记探针，下列各项中哪一项是不正确的?( )

双链DNA、单链DNA、RNA都是可以标记的 反应时可用Klenow酶

反应时可用DNA聚合酶1

不需要用Dnase I预处理

61．在切口移位标记DNA探针时只能使用( )

Klenow酶

DNA聚合酶I

DNA聚合酶Ⅱ

DNA聚合酶Ⅲ

62．要对一双链的DNA分子进行31末端标记，可用( )

Klenow酶 答案

1．c；2．c； 3．b； 4．b 5．b，C，d，e； 6．c； 7．b； 8．d；9．d； 10．B； 11．d； 12．a； 13．d； 14．b 15．d； 16．c；17．a，b；18．a；19．c；20．d；21．c；22．C； 23．b； 24．C；25．d；26．a，C，d；27．b；28．c； 29．b；30．a；31．c； 32．a,c,d,e， 33．a，b，c；34．b； 35．c；36．c； 37．d； 38．b；39．c；40．a；41．c； 42．a，b，c； 43．b； 44．b； 45．d； 46．a；47．a； 48．c； 49．c；50．b；51．c； 52．c； 53．b； 54．a,c,d；55．a； 56．b；57．a，b； 58．c；59．a；60．d；61．b； 62．c；

三．名词解释

1．DNA recombination （标明中文名） 2．Restriction enzyme（标明中文名） 3．DNA 克隆 4．基因组文库 5．cDNA文库

6．Cloning vector（标明中文名） 7．转化（标明英文名） 8．感染（标明英文名） 9．转染（标明英文名）

10．In silico cloning（标明中文名） 答案：

1．DNA重组：不同来源DNA分子通过共价连接（磷酸二酯键）而组合成新的DNA分子的过程。 2．限制性核酸内切酶：是能够识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。限制性内切核酸酶识别DNA的结构顺序为回文结构。限制性内切核酸酶存在于细菌体内，限制外源DNA、保护自身DNA，对细菌遗传性状的稳定遗传具有重要意义。

3．就是应用酶学的方法，在体外把目的基因与载体DNA结合成具有自我复制能力的DNA分子一一复制子(replicon)，继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增、提取获得大

DNA聚合酶I

T4DNA聚合酶

T7DNA聚合酶

量同一DNA分子，即DNA克隆。由于早期研究是从较大的染色体分离、扩增特异性基因，因此DNA克隆又称基因克隆。

4．分离组织或细胞染色体DNA，利用限制性内切核酸酶将染色体DNA切割成基因水平的许多片段，其中即含有我们感兴趣的基因片段。将它们与适当的克隆载体拼接成重组DNA分子，继而转入受体菌扩增，使每个细菌内都携带一种重组DNA分子的多个拷贝。不同细菌所包含的重组DNA分子内可能存在不同的染色体DN***段，这样生长的全部细菌所携带的各种染色体片段就代表了整个基因组。存在于转化细菌内、由克隆载体所携带的所有基因组DNA的集合称基因组DNA文库(genome DNA library)。

5． 以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA (cDNA )，再复制成双链cDN***段，与适当载体连接后转入受体菌，即获得cDNA文库(cDNA library)。与基因组DNA文库类似，由总mRNA制作的cDNA文库包含了细胞表达的各种mRNA信息，自然也含有我们感兴趣的编码cDNA。当前发现的大多数蛋白质的编码基因几乎都是这样分离的。

6．克隆载体：能将外源DN***段导入宿主细胞进行扩增或表达，并能在该宿主细胞内进行自我复制和表达的介质。

7．transformation：指将质粒或其他外源DNA导入处于感受态的宿主菌，并使其获得新的表型的过程。 8．infection：利用噬菌体将外源DNA导入宿主细胞的方法。

9．transfection：指真核细胞主动摄取或被动导入外源DN***段而获得新的表型的过程。常用的方法有电穿孔法，磷酸钙共沉淀法，脂质体融合法等。

10．电子克隆：通过基因数据库进行序列搜索，对比分析，拼接整合，预测新的假定的全长基因，然后通过分子生物学实验方法，加以证实，并从相应的组织，细胞中获得这种基因。

四、简答题

1．说明Sanger DNA测序法的原理。

2．某学生在用EcoRI切割外源DN***段时，出现了星号活性，请分析可能的原因?

3．在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么?

4．下面几种序列中你认为哪一个(哪些)最有可能是Ⅱ类酶的识别序列： GAATCG，AAATTT， GATATC， ACGGCA? 为什么?

5．当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施? 为什么?

6． 为什么反转录酶在聚合反应中会出错? 7． 什么是测序酶(sequenaseTM)?

8． 什么是S1核酸酶作图(S1 nuclease mapping)?

9 YAC载体具有什么样的功能性DNA序列?为什么在克隆大片段时，YAC具有优越 性?

10． 列举质粒载体必须具备的4个基本特性。 11． 什么叫穿梭载体？

12． 如何将野生型的l噬菌体改造成为一个理想的载体?

13． PCR的基本原理是什么?用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息? 14． cDNA克隆与基因组克隆有何不同?

15． 怎样将一个平末端DN***段插入到EcoR I限制位点中去? 16． 简述以黏粒为载体构建基因文库的原理。

17． 酵母人工染色体要在酵母细胞中稳定存在，必须有哪些基本的结构? 18． 何谓YAC? 主要特性是什么?

19． Muller的PCR反应同大肠杆菌体内的DNA复制有哪些不同?你认为根本的差别在