分子的外层电子在辐射能的照射下，吸收能量跃迁至激发态，然后跃迁回基态的各个振动能级并产生辐射的发光现象，称为分子荧光，建立在分子荧光基础上的分析方法称为荧光分析法。分子的荧光光谱有两个特征光谱，激发发谱和荧光光谱或称发射光谱。

产生荧光的物质必须具备两个条件：强的紫外-可见吸收和一定的荧光效率。跃迁类型、长的共扼结构、分子的刚性与共平面性以及取代基效应都会影响荧光的强弱；溶剂、温度、pH值等外界因素也会影响荧光强度。

常见的荧光分光光度计构造可分为光源，样品池，检测器，单色器，数据记录和处理系统五个主要部分。其单色器通常为两个，一个为激发单色器，一个为发射单色器。

荧光分析法的定量依据是在试样溶液浓度很低、激发光强度一定时，荧光强度同浓度成正比。公式为F＝KC，其中K是一个与物质摩尔吸收系数及物质的荧光效率有关的常数。 其定量方法有标准曲线法（工作曲线法），比例法，差示荧光法；对于多组分混合物的定量，可以采用计算分光光度法来测得各被测组分的含量。 本章重点和难点是荧光与分子结构的关系。

二、习题

（一）判断题

（ ）1．荧光物质吸收了某种波长的紫外线，才能发射荧光，吸收越强，发射荧光也越强，因此二者图谱完全重迭。

（ ）2．通常来说，荧光物质的刚性和共平面性增加，分子与溶剂或其它溶质分子的相互作用减小，外部转换能量损失减少，从而有利于荧光发射。

（ ）3．荧光分子与溶剂分子或其它溶质分子的相互作用引起荧光强度降低的现象称为荧光的熄灭。

（ ）4．荧光淬灭是指因种种原因使荧光物质的荧光完全消失的现象。 （二）单选题

1．根据下列化合物的结构，判断哪种物质的荧光效率最大？（ ） A．苯 B．联苯 C．对联三苯 D．蒽 E．萘 2．荧光分光光度计与分光光度计的主要区别在于（ ） A．光源 B．光路 C．单色器 D．检测器 E．吸收池

3．某些物质受到光照射时，除吸收某种波长的光之外，还会发射出比原来吸收波长更长的光；当激发光停止照射时，发光过程立即停止（10

－19

～10

－6

秒），这种光称为（ ）

A．荧光 B．磷光 C．拉曼光 D．瑞利光 E．散射光

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4．荧光分光光度法中，F＝φI0ECl适用于（ ）

A．浓溶液 B．ECl≤0.05的溶液 C．ECl≤0.01的溶液 D．对浓度无特殊要求 E．视待测组分性质而定

5．荧光分光光度计测定荧光强度，通常是在与激发光成以下角度的方向进行（ ） A．0° B．45° C．90° D．180° E．0°～90° （三）多选题

1．常见的光致发光现象有（ ）

A．荧光 B．瑞利光 C．拉曼光 D．磷光 E．散射光 2．分子荧光法与紫外-可见分光光度法的主要区别为（ ） A．分析方法完全不同 B．仪器结构不同 C．灵敏度不同 D．光谱带个数不同 E．光源不同 3．下列论述正确的是（ ）

A．烷基取代对荧光影响不大 B．氰基取代可减小发射波长和强度 C．羰基取代可使荧光增强 D．氨基取代可减小发射波长和强度 E．硝基取代可使荧光淬灭

4．使荧光增强的取代基团有（ ）

A．－OH B．－OCH3 C．－OC2H5 D．－C＝O E．－NO2 5．使荧光减弱的取代基团有（ ）

A．－COOH B．－Cl C．－SH D．－CN E．－NH2 6．影响荧光强度的因素包括（ ）

A．分子结构的稳定性 B．分子的取代效应 C．温度 D．溶剂 E．分子量的大小

（四）填空题

1．荧光分光光度计由 、 、 、 、 五部分组成。

2．影响荧光强度的因素有 、 、 、 。 3．一般可以从 、 、 、 几个方面来分析判断化合物能否产生荧光，荧光强度如何。

4．常用荧光定量分析方法有 、 、 。

5．荧光分析法的特点是 、 。在中药分析中，荧光法的测定方法有 、 、 、 四类。

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6．激发波长与荧光波长相同称为 。

7．改变激发光的波长，并在荧光强度最强波长处测量荧光强度变化，以 为横坐标，以 为纵坐标作图，即得到荧光物质的激发光谱。

8． 选用发光荧光强度最强时的波长为激发光源，测量不同波长处荧光的强度分布，以 为横坐标，以 为纵坐标作图，即得到荧光物质的激发光谱，或称为 。

9．物质要产生荧光必须具备两个条件，其一为 ，其二为 。

（五）名词解释 1．荧光 2．荧光效率 （六）问答题

1．试解释荧光发射光谱与荧光激发光谱的差异，其中哪个与吸收光谱更相似？ 2．下列化合物哪个的荧光最强？

A B C

3．按荧光强弱顺序排列下述化合物：

CH3

A B C

OHNO2

D E

COOH 4．在紫外-可见分光光度法定量分析时只需用空白溶液校正零点，而荧光定量分析时除了校正零点外，还需用标准溶液校正仪器刻度。为什么？

三、参考答案

（一）判断题

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1．× 2．√ 3．√ 4．× （二）单选题

1．C 2．B 3．A 4．B 5．C （三）多选题

1．AD 2．BCDE 3．AE 4．ABC 5．ABC 6．ABCD （四）填空题

1．光源、样品池、检测器、单色器、数据记录和处理系统。

2．分子结构的稳定性、分子的取代效应、环境的影响、散射光的影响、荧光的熄灭。（五选四）

3．跃迁类型、共轭效应、刚性结构和共平面效应、取代基效应。 4．标准曲线法（工作曲线法）、比例法、差示荧光法。

5．灵敏度高、 选择性好。直接测定法、间接测定法、荧光衍生物法、荧光熄灭法。 6．共振荧光。

7．激发波长、荧光发光强度。 8．荧光波长、荧光强度。

9．在紫外-可见区有较强的吸收、具有较高的荧光效率。 （五）名词解释 略

（六）问答题 1. 略 2．C最强。

3．D＞A＝B＞C＞E。

第十六章 原子吸收分光光度法

一、内容提要

原子吸收分光光度法是利用处于基态的待测原子蒸气对从光源所发出的共振线的吸收，从而进行元素分析的方法。原子吸收分光光度法具有灵敏度高、选择性好、测定快速、准确度好、测定范围广和操作简便等特点。目前已经广泛应用于中医药的微量元素分析。

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