开启仪器电源，预热约10min.用蒸馏水做空白，从稀到浓依次测量标准系列溶液的荧光强度。

3. 未知试样的测定

取2.50mL待测液置于50mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。用测定标准系列溶液时相同的条件，测量其荧光强度。

五、数据处理

1. 用标准系列溶液的荧光强度绘制标准曲线。

2. 根据待测液的荧光强度，从标准曲线上求得其浓度。 3. 计算药片中维生素B2的含量，用mg/片表示。 思考题

1. 怎样选择激发光单色器波长和荧光单色器波长？

2. 荧光光度计中为什么不把激发光单色器和荧光单色器安排在一条直线上？

实验十三 冷原子吸收光谱法测定天然水中痕量汞

一、基本原理

天然水中痕量汞的冷原子吸收测定，基本上都是采用Sn2+还原气化法，即于试液中加入还原剂，使Hg2+还原成金属汞。然后利用金属汞在常温下具有较高的蒸气压的性质，将汞蒸气导入吸收池进行测定；或者使Hg与金﹑铜等接触，生成汞齐，进行富集，然后再加热产生汞蒸气进行测定。

天然水中含有少量有机物，在酸性条件下，SnCl2 还原剂不能有效的还原有机汞，因此，必须将有机汞转化成无机汞。即在酸性条件下加入KMnO4溶液并加热进行消化，浓缩至小体积，然后加入还原剂将Hg2+还原成Hg，将汞蒸气导入吸收池，测定Hg253.7 nm的吸收。

二﹑仪器和试剂

1. F732-S型测汞仪

2. 硝酸重铬酸钾溶液：称取0.25g重铬酸钾，溶于无汞去离子水，加入25mL优级纯硝酸，再用去离子水稀释到500mL。

3. 准确称取HgCl（0.1354克溶于硝酸重铬酸钾溶液中并稀释至100mL，2AR）

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即为1mg Hg/mL的标准溶液。

4. 汞标准使用液A （10μg/mL）：取1mg Hg/mL浓度的标准溶液1mL加硝酸重铬酸钾稀释液至100mL，即为10.0μg Hg/mL标准溶液。

5. 汞标准液B（0.1μg/mL）：取10.0μg Hg/mL标准溶液1mL加硝酸重铬酸钾稀释液至100mL，即为0.1μg Hg/mL标准溶液。

6. 汞标准液C （0.01μg/mL）：取0.1μg Hg/mL 10mL加硝酸重铬酸钾稀释液至100mL，即为0.01μg Hg/mL标准溶液。

7. 10%氯化亚锡溶液（临用前配制）：称取10g氯化亚锡于小烧杯内，加入20mL浓盐酸，微微加热至透明，冷却后再用去离子水稀释到100mL。

6. KMnO4溶液（5%）：称取5克KMnO4 溶于蒸馏水中，加入少量H2SO4

稀释至100mL摇匀。

7. 5%硝酸溶液：量取50mL分析纯硝酸，用去离子水稀释至1000mL供洗涤用。

8. 1:1 H2SO4。

9. 10%盐酸羟胺溶液(或1:6 H2O2)

三﹑操作步骤

取100 mL水样二份于200 mL烧杯中，加入1:1 H2SO4 2mL，5% KMnO4 1mL，于电热板上低温加热（约30min）消化浓缩试样，当试样蒸发至30mL左右时，取下，沿杯壁滴加10%盐酸羟胺溶液1mL，使过量的KMnO4和MnO2还原为无色溶液，转入50 mL 容量瓶中，以蒸馏水稀释至刻度，摇匀。将试液全部转入反应瓶内，加入4 mL还原剂，塞紧瓶塞，测量吸光度。同条件下作二份空白。

工作曲线：分别取汞标准溶液B 0.0、0.5、1.0、1.5、2.0 mL于50 mL容量瓶中，先加入2 mL 1:1 H2SO4，稀释至刻度（各容量瓶中对应Hg的浓度分别为：0.0、1.0、2.0、3.0、4.0 ng/mL），摇匀。以下与试样操作相同，测量吸光度。

四、数据处理

以汞标准溶液的浓度（c）为横坐标，测得的吸光度（A）为纵坐标，绘制工作曲线，并查得被测水样中汞的含量（ng/mL）。以下式计算原水样中汞的含量（ng/mL）。

水样中Hg的含量(μg/L)?V2?c V1式中：V1 — 原水样体积（mL）；V2 — 消化后定容的体积（mL）；c — 由工作曲线查得的汞含量（ng/mL）。

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五﹑注意事项

1. 实验前，必须掌握测汞仪的操作方法。

2. 加热消化﹑浓缩时，温度不可太高。一般在微沸的状态下即可。 3. 滴加盐酸羟胺时，应沿杯壁滴入，使杯壁上的MnO2溶解，若有部分MnO2

尚没有溶完，可将烧杯稍微倾斜，使试液与杯壁上的MnO2接触，既可溶完。

4. 在加热过程中，若溶液的紫红色消失，应继续添加高锰酸钾溶液。 5. 每测完一份样品都要用5%硝酸溶液彻底清洗还原瓶，否则将会对下一份样品产生严重干扰。

6. 本机带有8mL、15mL、60mL三种规格还原瓶两套，视样品含量多少选择相应的还原瓶。样品含量高选择小体积还原瓶，含量低选择大体积还原瓶，同时试液定容体积也要做相应的调整。

7. 操作时，前一次测定结束，应尽量使管道内的余汞排放干净，若此时仪器读数不回到000，可用零调电位器进行微调到000，然后进行第二次操作。

附录： 721型分光光度计简介

721型分光光度计是72型分光光度计的改进型，将稳压电源装置、光源灯、

单色器、比色皿架、光电管暗盒(电子放大器)和微安表等部件全部装成一体，装置紧凑，操作简便。

仪器工作波长范围是360～800nm，是用于近紫外和可见光区的分光光度计。 721型分光光度计，仪器用钨丝白炽灯做光源，棱镜作色散元件．采用自准式光路，以GD-7型光电管为光电转换元件，微弱的光电流信号通过微电流放大器放大后，由微安表显示出来。 1. 721型分光光度计操作步骤

(1) 接通电源前，将各旋钮调节至起始位置，微安表的指针应在“0”位，否则旋转校正螺丝加以调节。

(2) 接通电源，打开比色皿暗箱盖，选择适当的测量波长和相应的灵敏度档，调节透光率“0”电位旋钮，使微安表指“0”。

放大器的灵敏度共有5档，“1”档最低，以后逐渐增大，在能使参比溶液调到100％的情况下，应尽量使用灵敏度较低的档，以提高仪器的稳定性。在改变灵敏度档后，应重新校正“0”和“100”。

(3) 将参比溶液和待测溶液分别倒入比色皿中，合上比色皿暗箱盖，此时选定的单色光透过参比溶液照射到光电管上，旋转“100％”电位器，使微安表指针在满刻度附近，并预热仪器20min，然后反复校正“0”和“100％”。

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(4) 将比色皿拉杆拉出一格，使待测溶液进入光路，微安表的读数即为该溶液的吸光度(或透光率)，读取读数后，立即打开比色皿暗箱盖。

(5) 重复操作，校核读数，再依次测量其它溶液的吸光度。

(6) 测量完毕，取出比色皿，洗净擦干，将各旋钮回复到起始位置，开关置于“关”处，拨下电源插头，罩好仪器罩。 2．721型分光光度计的维护注意事项

(1) 如实验室电源电压波动较大，为确保仪器工作状态稳定，最好外加稳压电源，同时仪器保持接地良好。

(2) 应经常检查干燥简内的干燥刑是否已变色失效，如果失效应及时烘干处理或换装新的干燥剂。

仪器长时间不用时，在仪器罩内也应放置数袋防潮的硅胶。

(3) 仪器工作一段或经搬动后，要检查波长的准确性，以保证测定的可靠性。

3. 比色皿(吸收池)使用注意事项

(1)．比色皿要配对使用，因为相同规格的比色皿仍有或多或少的差异，致使光通过比色溶液时，吸收情况将有所不同。

(2)．注意保护比色皿的透光面，拿取时，手指应捏住其毛玻璃的两面，以免沾污或磨损透光面。

(3)．在已配对的比色皿上，于毛玻璃面上作好记号，使其中一只专置参比溶液，另一只专置试液。同时还应注意比色皿放入比色皿槽架时应有固定朝向。 (4)．如果试液是易挥发的有机溶剂，则应加盖后，放入比色皿架上。 (5)．倒入溶液前，应先用该溶液淋洗内壁三次，倒入量不宜过多，以比色皿高度的4/5为宜。

(6)．每次使用完毕后，应用蒸馏水仔细淋洗，并以吸水性好的软纸吸干外壁水珠，放回比色皿盒内。

(7)．不能用强碱或强氧化剂浸洗比色皿，而应用稀盐酸或有机溶剂，再用水洗涤，最后用蒸馏水淋洗三次。

722光栅分光光度计的使用方法

722型光栅分光光度计能在近紫外，可见光谱区域内对样品物质作定性和定量的分析。其色散元件为衍射光栅，波长精度比721好，且数字显示读数。

操作方法及注意事项：

(1) 将灵敏度旋钮调整“1”档（放大倍率最小）。

(2) 开启电源，指示灯亮，仪器预热20分钟，选择开关置于“T”

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