核酸提取对临床荧光PCR检测质量的影响因素 - 图文 下载本文

PPT19 显示的是核酸提取仪,这种仪器有很多种,国产的、台湾的、进口的。它们几乎都有一个共同的特点:交叉污染。虽然好多厂家都做了相应的调整,但到目前为止,没有完全不污染的。

PPT20 显示的仪器是 MegNA Pure 2.0(Roche) 。 PPT21 是全自动的核酸提取和扩增系统。

PPT22 显示的是核酸提取仪核酸污染情况,这是最早的数据,交叉污染的实验设计:某核酸提取仪 10 9 与阴性对照间隔进行核酸提取并检测。连续做了八个阳性和八个阴性对照,发现有四个对照发生了交叉污染,污染率很高。

(二)实验室污染的监控

实验室污染的监控,是荧光实验室或分子生物学实验室的重中之重,分为试剂污染、环境污染、核酸提取污染,而且污染曲线有一定的特征。

(三)几种防污染措施的效果评价

污染是目前临床分子生物学实验室比较头疼的问题,也是实验室真正的水平的体现。防污染的措施有很多,最有效的是实验室的通风。

抗污染有效性实验: 1. 紫外线照射

对扩增产物有一定的效果。 2. 有效氯处理

效果肯定!但要注意对荧光探针的淬灭! 3. 酒精擦拭

无效且容易导致污染物迁移。 4. 高压处理

容易导致交叉污染,并可引起器具变形(吸头、离心管)。 (四)污染的预防 1. 预防污染的常规工作

1 )严格的实验室分区与管理:物品单独使用的好处

2 )经常性实验室通风:能对流通风的重要性,封闭实验室的弊端。 3 )每周有效氯消毒液擦拭 :(84 消毒液,健之素等 ), 桌面、地面清洗 4 )每日清水擦拭实验用品:流水清洁的重要性,对实验用品如试管架、吸头盒、离心机内面等。

5 )移液器的处理:即时进行流水清洗,除非细菌培养实验无需高压和消毒。 2. 人员培训与管理

污染环节的认知 ( 按来源分类 ), 有效预防污染操作的实现,实验室新进人员的培训、考核与上岗。

3. 实验室生物废物的管理:

标本接触废物、试剂废物、扩增产物等。