专题3、5、6 植物的组织培养技术、DNA和蛋白质技术、

植物有效成分的提取

1．(2018年四川凉山州一模)月季因花色艳丽、芬芳迷人而被称为花中皇后，可用植物组织培养技术快速繁殖而用于生产。请回答下列问题：

(1)植物组织培养的实验操作流程是：制备MS固体培养基、__________、接种、培养、移栽、栽培。该实验能成功培育出植株的理论依据是______________。

(2)在配制培养基时，需要根据各种母液的________计算用量；将分装好的培养基进行______________灭菌。

(3)上图为培养基中蔗糖浓度对月季叶愈伤组织诱导率的影响：

①蔗糖浓度为________时，最有利于愈伤组织的形成，原因是________________________________。

②外植体形成愈伤组织的过程称为__________，将愈伤组织继续进行培养，生长素和细胞分裂素________________(填使用顺序)可提高分化频率，有利于重新分化成根或芽。

③蔗糖浓度为90 g/L时，无愈伤组织形成的原因最可能是_______________________ _____________。

2．(2018年山西运城期末)近十年来，PCR技术(多聚酶链式反应)成为分子生物学实验室里的一种常规手段，其原理是利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制(如下图所示)，在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验所需要的遗传物质不再受限于活的生物体。

(1)PCR技术能把某一DNA片段进行扩增，依据的原理是_____________________ _____________。

(2)加热使DNA双链打开，这一步是打开________键，称为________，在细胞中是在____________的作用下使此键断裂。

(3)当温度降低时，引物与模板____________端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最终合成2个DNA分子，此过程中加入四种脱氧核苷三磷酸的目的是__________________________，遵循的原则是__________________。

(4) PCR技术的必要条件，除了模板、原料、ATP、酶以外，至少还需要三个条件．即：液体环境、适宜的____________和____________。

(5)PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可分为__________、________、________三个步骤。

3．关于“DNA的粗提取与鉴定”实验：

(1)该实验依据的原理是( )

A．DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl溶液浓度的不同而不同

B．利用DNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯净的DNA C．DNA是大分子有机物，不溶于水而溶于某些有机溶剂 D．在沸水中DNA遇二苯胺会出现蓝色反应 (2)实验的正确操作步骤是( )

A．制备鸡血细胞→提取细胞核物质→溶解核内的DNA→析出并滤取DNA黏稠物→DNA的再溶解→提取较纯净的DNA→鉴定DNA

B．制备鸡血细胞液→提取细胞核物质→溶解并析出DNA→DNA的再溶解→提取较纯净的DNA→鉴定DNA

C．制备鸡血细胞液→溶解DNA→提取细胞核中DNA→DNA的再溶解→提取较纯净的DNA→DNA的鉴定

D．制备鸡血细胞的细胞核物质提取液→溶解并析出DNA→提取较纯净的DNA→DNA的鉴定

(3)实验过程中第一次所用NaCl溶液的浓度是________；第二次所用NaCl溶液的浓度是________。所用酒精最好是________，其体积分数为________。

(4)鉴定DNA的方法是，向溶有DNA丝状物的试管中加入________mL的________试剂，混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min，冷却后可观察到溶液呈____________；也可取少许DNA丝状物置于载玻片上，滴一滴________溶液，片刻后用水冲洗，可见丝状物被染成________。

4．下列是有关血红蛋白的提取与分离的问题，请回答下列问题。

(1)人们用鸡的红细胞提取DNA，用人的红细胞提取血红蛋白，其原因是________________________________________________________________________

________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (2)凝胶色谱法是根据____________________分离蛋白质的有效方法。所用的凝胶实际上是一些________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。 (3)蛋白质的提取和分离实验中，首先要用________________(填写溶液名称)洗涤红细胞，其目的是去除______________。

(4)在________和甲苯的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。用________法可分离出血红蛋白。

(5)取血红蛋白溶液装入透析袋，再将透析袋放入pH为7.0的____________中，透析12 h。

5．研究发现柚皮精油和乳酸菌素(小分子蛋白质)均有抑菌作用，两者的提取及应用如下图所示。

(1)柚皮易焦糊，宜采用________法提取柚皮精油，新鲜的橘皮要用________浸泡处理，该过程得到的糊状液体可通过________除去其中的固体杂质。

(2)培养基中的尿素可为乳酸菌A生长提供__________。电泳法纯化乳酸菌素时，若分离带电荷相同的蛋白质，则其分子量越大，电泳速度__________。

(3)抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的______________来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。

(4)橘皮油也可用萃取法来提取，原因是__________________________。分析下图，提高萃取效果的方法是__________________、____________________。

选修1 生物技术实践

专题1、2 传统发酵技术的应用、微生物的培养与应用

1.(1)灰绿

(2)18 ℃～25 ℃ 30 ℃～35 ℃ (3)毛霉 培养基

(4)不足以抑制微生物的生长，导致豆腐腐败变质 (5)制造缺氧环境 玫瑰红

解析：(1)酿酒过程检测酒精的原理是：橙色的重铬酸钾溶液，在酸性条件下与酒精发生化学反应，变成灰绿色。(2)在酒精发酵时瓶内温度一般应控制为18 ℃～25 ℃。醋酸发酵时温度一般应控制为30 ℃～35 ℃。(3)在臭豆腐的制作过程中，常用的微生物主要是毛霉等，在此过程中，豆腐相当于微生物生长的培养基。(4)民间制作腐乳时，豆腐块上生长的微生物，在制作时一般要加盐、酒，若加入的酒精浓度(含量)过低，不足以抑制微生物的生长，会导致豆腐腐败变质。(5)在腌制泡菜的过程中，起主要作用的微生物是乳酸菌，用水封坛的作用是制造缺氧环境。欲检测泡菜在腌制过程中产生的亚硝酸盐含量，使用检测试剂后颜色变为玫瑰红色。

2．(1)①不同浓度亚硝酸钠标准溶液 ②不同腌制天数的泡菜滤液 ③样品管 一致 (2)亚硝酸盐含量 (3)乳酸菌

解析：(1)在亚硝酸盐的含量测定中，用不同浓度亚硝酸钠标准溶液和显色剂制成颜色深浅不同的系列标准管；用刻度移液管分别吸取一定量的不同腌制天数的泡菜滤液，加到不同的比色管中，然后在各个比色管中加入等量的显色剂进行显色，得到样品管；将每个样品管分别与系列标准管进行比较，找出与样品管颜色深浅相近的标准管，该管中亚硝酸钠的含量即代表样品管中的亚硝酸盐含量，记录各样品管亚硝酸盐的含量。(2)据图可知，该图表示亚硝酸盐的含量随发酵时间的变化曲线。(3)制作泡菜时利用的微生物是乳酸菌。

3．(1)纤维二糖

(2)氮源和无机盐 以纤维素为唯一碳源的培养基有利于纤维素分解菌的生长和繁殖，同时抑制和阻止其他微生物生长

(3)酵母菌 无氧呼吸

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(4)血细胞 稀释涂布平板 1.26×10 解析：(1)葡萄糖苷酶可将纤维二糖分解成葡萄糖。(2)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、氮源和无机盐四类；采用以纤维素为唯一碳源的培养基，其原因是以纤维素为唯一碳源的培养基有利于纤维素分解菌的生长和繁殖，同时抑制和阻止其他微生物生长。(3)利用酵母菌的无氧呼吸产生酒精。(4)若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用血细胞计数板直接计数；若要测定其活菌数量，可选用稀释涂布平板法进行计数。

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每毫升样品中的细菌数是126×10×10＝1.26×10个。

4．(1)选择培养基 (2)酚红 脲酶 红 (3)接种 涂布 单一 (4)尿素

解析：(1)在生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。(2)幽门螺杆菌含有脲酶，能分解尿素为菌体提供氮源，因此在配制培养基时要加入尿素；加入酚红指示剂的目的是检验是否有Hp存在，若有Hp存在会分解尿素，培养基pH会升高，酚红指示剂将变红。(3)培养时需将培养皿倒置并放在恒温箱中培养，倒置培养的目的也是为了获得单一菌落。(4)如果人体感染了Hp，能将尿素