（5）单克隆抗体的优点是特异性强，灵敏度高、化学性质单一等特点． 故答案为：
（1）低表达 胞外
（2）浆细胞（免疫后的B细胞、B细胞） PEG（聚乙二醇） （3）抗原﹣抗体杂交 能产生抗H蛋白抗体的杂交瘤细胞 （4）定期更换培养液
（5）特异性强（识别抗原部位专一）
32．控制哺乳动物的性别对于畜牧生产有着十分重要的意义．根据牛的X精子的DNA含量比Y精子的高出4%左右，利用这一差异人们可以借助特殊仪器分离精子，从而有效控制性别，再通过胚胎工程技术就可培育出所需性别的试管牛（如图所示）．
根据以上信息回答下列问题：
（1）图中的过程①是指 体外受精 ，要将分离得到的精子经过 获能 处理，同时卵母细胞应培养至 减数第二次分裂中期（MII中期） 期，方可完成该过程．
（2）在①过程中首先发生 顶体 反应，穿越放射冠和透明带，透明带反应和 卵细胞膜反应（卵黄膜封闭作用） 是防止多精入卵的两道屏障．
（3）在体外将受精卵培养至 桑椹胚或囊胚 期时可用于移植，培养过程中除需给予一定量的O2以维持细胞呼吸外，还需要提供 CO2 气体以维持培养液的pH．
（4）受体母畜对移入子宫的外来胚胎基本上不发生 （免疫）排斥 反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能．
（5）SRY基因是性别决定基因，据此可用 DNA分子杂交 技术对移植前的胚胎进行性别鉴定，确保得到所需性别的试管牛． 【考点】胚胎移植；动物胚胎发育的过程．
【分析】分析题图：图示为试管牛培育过程，其中①为体外受精过程，包括精子的采集和
获能、卵母细胞的采集和培养、受精；受精卵→公（母）牛为早期胚胎培养和胚胎移植过程．
【解答】解：（1）图中的过程①表示体外受精，要将分离得到的精子经过获能处理，同时卵母细胞应培养至减数第二次分裂中期（MII中期），方可完成该过程．
（2）在受精作用过程中首先发生顶体反应，穿越放射冠和透明带，透明带反应和卵细胞膜反应（卵黄膜封闭作用）是防止多精入卵的两道屏障．
（3）在体外将受精卵培养至桑椹胚或囊胚期时可用于移植，培养过程中除需给予一定量的O2以维持细胞呼吸外，还需要提供CO2气体以维持培养液的pH．
（4）受体母畜对移入子宫的外来胚胎基本上不发生（免疫）排斥反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能．
（5）SRY基因是性别决定基因，据此可用DNA分子杂交技术对移植前的胚胎进行性别鉴定，确保得到所需性别的试管牛． 故答案为：
（1）体外受精 获能 减数第二次分裂中期（MII中期） （2）顶体 卵细胞膜反应（卵黄膜封闭作用） （3）桑椹胚或囊胚 CO2
第29页（共32页）
（4）（免疫）排斥 （5）DNA分子杂交
33．科学家尝试使用Cre/loxP位点特异性重组系统，在检测目的基因导入成功后，删除转基因烟草细胞内的抗除草剂基因．其技术过程如下（图中的■代表基因前的启动子），据图回答：
（1）loxP是由34个碱基对构成的小型DNA片段，有两个13个碱基对反向重复序列和中间间隔的8个碱基对序列组成（如下图）．对于这种已知序列的小型DNA，通常用 人工（化学）合成 方法获取．
（2）loxP自身不会表达，插入质粒后也不影响原有基因的表达．Cre酶能特异性地识别此序列并在箭头处切开loxP上的磷酸二酯键，其功能类似于基因工程中的 限制酶 酶．从遗传学角度分析，Cre酶改变质粒产生的结果相当于可遗传变异中的 基因重组 ．
（3）除图示外，重组质粒中通常还应具有 复制原点、终止子 结构；重组质粒上抗除草剂基因的作用是 作为标记基因，用于检测目的基因是否导入成功 ；将重组质粒导入到植物细胞中最常用的方法是 农杆菌转化法 ．
（4）经检测重组质粒转导成功后，抗除草剂基因已没有用途，继续留在植物体内可能会扩散转移造成安全问题．经Cre酶处理后，质粒中的两个loxP序列分别被切开后，可得到如上图右侧的这两个DNA分子．由于 抗除草剂基因前缺乏启动子 的原因，抗除草剂基因不再表达，之后会在培养过程中消失．
（5）loxP序列是有方向性的．如果经Cre酶处理后，发现抗除草剂基因反向连接在质粒一上，则原来质粒一中这两个loxP序列的方向是 C ．
A．两个都是正向B．两个都是反向C．一个正向一个反向 D．与方向无关． 【考点】基因工程的原理及技术．
【分析】基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与鉴定．基因工程的工具有：限制性核酸内切酶、DNA连接酶和运载体．基因工程的原理是基因重组．基因表达载体的组成包括：目的基因、启动子、终止子、标记基因．目的基因导入植物细胞的最常用方法是农杆菌转化法．标记基因的作用是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来． 【解答】解：（1）基因工程中，对于已知序列的小型DNA，通常用人工（化学）合成方法获取．
第30页（共32页）
（2）限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．Cre酶能特异性地识别此序列并在箭头处切开loxP，其功能类似于基因工程中的限制酶．从遗传学角度分析，Cre酶改变质粒产生的结果相当于可遗传变异中的基因重组．
（3）基因表达载体的组成包括：目的基因、启动子、终止子、标记基因、复制原点等．重组质粒上抗除草剂基因的作用是作为标记基因，用于检测目的基因是否导入成功；将重组质粒导入到植物细胞中最常用的方法是农杆菌转化法．
（4）由于抗除草剂基因前没有了启动子的原因，因此抗除草剂基因不再表达，之后会在培养过程中消失．
（5）loxP序列是有方向性的．据图分析，如果经Cre酶处理后，发现抗除草剂基因反向连接在质粒一上，则原来质粒一中这两个loxP序列的方向是一个正向一个反向．故选：C． 故答案为：
（1）人工（化学）合成 （2）限制酶 基因重组
（3）复制原点、终止子 作为标记基因，用于检测目的基因是否导入成功 农杆菌转化法 （4）抗除草剂基因前缺乏启动子 （5）C
第31页（共32页）
2016年8月4日
第32页（共32页）