第一类：具有遗传毒性和致癌性
第三类：具有API结构不相关的警示结构 第二类：具有遗传毒性致癌性未知 是或没检测 第五类：没有警示结构
第四类：具有API结构相关的警示结构 去除杂质？
遗传毒性？1） API是否遗传毒性？2） 是 否 否
否
阈值 控制 风险评估？3）
否或未知
按TTC进行控制
PDE，参考ICHQ3C 作为普通杂质控制
图4.3杂质的分类，验证和风险评估
注释：
(1)不管是用纯杂质测试还是加入原料药中进行测试，达到250μg/板 (2)如果原料药是阳性，需要进行风险-益处分析。 (3)定量风险评估来确定ADI。
当杂质的毒性阈值已经具备的情况下，通常会按照PDE(每日最大摄入量)的方式进行控制。但有的时候，根据现有的数据，会得到一个比TTC（毒理学关注阈值）更低的值。具备动物实验阈值NOEL（不可观察到效果的最低水平）的物质，在动物体内与其它的靶点结合失去活性，低摄入量时不直接与DNA结合的，其遗传毒性风险相对与DNA直接结合的物质要低，水合肼动物实验的NOEL值换算到人体的日允许暴露量，其计算过程中，除了考虑体重折算，还极其保守地采用了F1到F5连相乘得到5000 的不确定因子（UF，Uncertaintyfactors），是一个比TTC更保守的估算值，若出现比TTC更低的情况，需要理解各个数据背后的含义，基于官方公布的信息，并借助其它一些信息，来了解该杂质的毒性受关注程度，确认TTC是否适用。
原料药（API）中发现的遗传毒性杂质或者形成的杂质已知具有遗传毒性，这些杂质通常是原料所引入，合成工艺中间体或副产物。事实上，这些物质在合成过程中被利用来作为活性基础部分也体现在它们能够与生物物质反应，包括与DNA反
17
应。这些与DNA 的相互作用认为是基因突变，具有潜在的致癌危险。因此，遗传毒性杂质近年来成为新药研发过程中高度关注的问题，为了确保病人安全，有效地评估，尤其是针对新药，控制和监控这些杂质变得十分重要。有不同的方法来评估一个杂质是否具有遗传毒性，包括从警示结构判断，计算机软件模拟评估（in-silico）到体内试验，由此所需要的资源花费是呈几何级增长的。随着试验的深入，对杂质性质了解的深入，风险的不确定性也将逐渐降低。当前的观点是，只要满足特定的条件，针对药品中绝大多数遗传毒性杂质，进行动物试验，甚至进行细菌突变试验都是没有必要的。监管机构也认识到了这个问题，为了在患者安全与行业资源花费之间找到一个平衡点，推荐了一个风险控制工具TTC（毒理学关注阈值）。除了第一类高度关注的杂质，绝大多数遗传毒性物质可不进行体外、体内试验，采用TTC（毒理学关注阈值）这个风险控制工具就可将遗传毒性杂质的风险控制在接受的范围内。但应用这个工具的时候，我们既需要了解这个工具的含义，又需要尽可能深入地了解所要控制杂质的性质。
下面主要就TTC（毒理学关注阈值）工具本身作一些阐述和理解。随着检测仪器与分析技术的发展提高，灵敏性较高的检测方法得以应用，TTC（毒理学关注阈值）理论已经在食品，化妆品的行业广泛应用。针对具有遗传毒性警示结构，而无动物或人体强致癌毒性报道的杂质，若是对其开展深入的动物体内或体外实验，这将耗费企业、整个行业，以及消费大众的资源，对药品上市进程影响也是巨大的。监管机构意识到这个问题，基于极低的人体副作用伤害概率，许多化合物的“安全”暴露水平能够基于它们各自的结构来确定，作为杂质，其遗传毒性由特定的结构片段来决定，已知的毒性也能够适用于结构类似的化合物。
4.2肼结构杂质归类
肼杂质是体外实验显示一定的DNA-反应活性，动物体内的NOEL阈值可以获得，按其换算出来的人体日暴露量比TTC 更低，这个需要分析各数据的背景与含义，基于药政官方公布的信息来确定一个可接受的限度。药政监管机构的意见，可以来源于注册评审过程中药政监管机构在反馈信中的意见，以及官方对指南文件的解读，也可以从药典现有的限度水平。其它领域中关于该物质的信息也可以适当地加以了解。肼杂质具有警示结构，具备水合肼在动物体内试验的结果，没有人体强致癌毒
18
性的报道，肼杂质可以归为五类杂质中的第二类，若是工艺上无法避免，需考虑从生产工艺过程中进行控制来清除，按TTC（毒理学关注阈值）进行评估控制。下面将从现行认可标准，其它途径允许摄入限度，已经具备的毒理毒性数据三个方面论证作为第二类杂质的合理性。
19
第5章肼物质现行认可限度
5.1药典现有产品的检索
查阅了两个主要发达市场现行的药典法定标准，欧洲药典与美国药典，将建立了肼杂质检测项目的原料药列入表5-1 如下。
表5-1药典专论现行肼的限度
药典 Ph.Eur USP Ph.Eur Ph.Eur USP Ph.Eur Ph.Eur USP Ph.Eur USP Ph.Eur USP
API（原料药） 别嘌呤醇Allopurinol 别嘌呤醇Allopurinol 卡比多巴Carbidopa 共聚维酮Copovidone 共聚维酮Copovidone 硫酸二肼Dihydrazinesulphate 盐酸肼屈嗪HydralazineHydrochloride 盐酸肼屈嗪HydralazineHydrochloride 异烟肼Isoniazid 硫酸苯乙肼Phenelzinesulfate 聚维酮Povidone 聚维酮Povidone 肼限度（ppm） 2.5 10 20 1 1 10 10 10 125 1000 1 1 5.2肼的允许暴露量
肼的允许限度从1ppm到1000ppm都有，对检测方法的灵敏度要求也各有差异，主要是由于最大日剂量的差异，使得肼的相对控制限度上有差异。肼杂质的日摄入量，还需要进一步的换算处理。首先剔除剂量因素对限度的影响，来推算和了解整个行业以及监管机构将这个杂质控制在什么样的暴露水平。这样换算来的结果也只是作为一个参考的依据。第一，可以帮助我们了解，现行的检测方法能够灵敏到一个什么样的水平，第二，可以帮助我们了解认识，高于NOEL(不可观察到效果的最低水平)推算值与风险允许的限度之间，还有多大的空间可以供生产企业所利用。
根据药典对特定杂质的控制水平，可掌握杂质的信息，推算出特定杂质在人体内允许的摄入水平，采用如下的公式进行变换：限度(ppm)=PDE(μg)×1000/MDD(mg)，肼的日摄入量可以由最大日剂量与限度导出。以欧洲药典的别嘌呤醇为例，肼的日摄入量限度与最大日剂量的乘积合2.0μg。
20