细胞生物学实验讲义 下载本文

位与Schiff试剂反应,形成紫红色的化合物,因此,细胞内含有DNA的部位会呈现紫红色阳性反应。福尔根反应即可进行DNA定位显示,又可用显微分光光度计惊醒定量分析。

Feulgen反应对组织中的DNA高度专一,组织中除DNA外还有多糖、RNA和其他自由醛基,固定液也可能产生一些醛基。但是,自由的醛基可能被盐酸酸解消除,绝大多数RNA经1M盐酸在60℃温度下处理会降解为可溶性成分,而多糖在此反应条件下则不会产生裸露的醛醛基。材料不经过水解或预先用热的三氯醋酸或DNA酶处理,得到的反应是阴性的,从而证明了Feulgen反应的专一性。

三、实验用品

1、材料: 洋葱根尖 2、器材:

解剖刀、镊子、水浴锅、载玻片、盖玻片、 3、药品与试剂: 1mol/L盐酸:

取82.5ml密度1.19g/ml浓盐酸加蒸馏水至1000ml。 Schiff试剂:

称取0.5g碱性品红加入到100ml煮沸的蒸馏水中(用三角瓶),时时震荡,继续煮5min(勿使之沸腾),使之充分溶解。然后冷却至50℃时用滤纸过滤,滤液中加入10ml1mol/LHCl,冷却至25℃时,加入0.5gNa2S2O5充分震荡后,塞紧瓶塞,在室温暗处理静止至少24h(有时需2~3d),使其颜色褪至淡黄色,然后加入0.5g活性炭,用力震荡1min,然后用粗滤纸过滤于棕色瓶中,封严瓶塞,外包黑纸。滤液应为无色也无沉淀,贮于4℃冰箱中备用。如有白色沉淀,就不能在使用,如颜色变红,可加入少许偏重亚硫酸钠或偏重亚硫酸钾,使之再转为无色,仍可使用。 亚硫酸水:

200ml自来水、10ml 10%偏重亚硫酸钠或偏重亚硫酸钾溶液、10ml 1mol/L HCl,使用前,三者混匀使用。

四、实验步骤

1、将洋葱根尖放在1mol/L HCl中,在60℃水浴锅中保温8~10min。 2、蒸馏水水洗。

3、Schiff 试剂遮光染色30min。

4、用新鲜配制的亚硫酸水溶液洗涤3次,每次1min。 5、水洗5min。

6、将根尖放在载玻片上,镊子捣碎,盖上盖玻片,压片。

7、镜检,细胞中凡是有DNA的部位应呈现紫红色的阳性反应。

8、找出根尖正在分裂的细胞,并找出它的前、中、后、末、间等五个时期。

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对照组:

先将材料放在5%三氯醋酸中90℃水浴15min,其他步骤同实验组。

细胞凝集反应

一、实验目的

了解细胞膜的结构与功能。

二、实验原理

细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构,脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状外被。目前认为:细胞间的联系,细胞的生长和分化,免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖分子有关。

凝集素(lectin)是一类含糖(少数例外)的并能与糖专一结合的蛋白质,它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接,在细胞间形成“桥”的结果,加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。

三、实验用品

1、 土豆块茎

2、 显微镜、粗天平、载玻片、滴管2支、离心管2支。 3、 PBS缓冲液

NaCl 7.2g Na2HPO4 1.48g KH2PO4 0.43g H2O 1000ml

4、 2%的红细胞

四、实验步骤

1、2%的红细胞的制备:

取一定量的红细胞,用生理盐水洗5次,每次2000r/min,离心5min,最后按压积红细胞体积用生理盐水配成2%红细胞液。

2、称取去皮土豆块茎2g,加10mlPBS缓冲液,浸泡2h,浸提液中含有可溶性淀粉土豆凝集素。

3、用滴管吸取土豆凝集素和2%红细胞液各一滴,置于载玻片上,充分混匀,静置20min后,于倒置显微镜下观察血球凝集现象。 4、以PBS液加2%血细胞液作对照实验。

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五、实验报告:

简图表示血细胞凝集原理。

细胞膜的渗透性

一、实验目的

了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。

二、实验原理

将红细胞放入数种等渗溶液中,由于红细胞对各种溶质的透性不同,有的溶质可以渗入,有的溶质不能渗入,渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压,所以水分进入细胞,引起溶血,溶质渗入速度不同,因此溶血时间也不同。

三、实验材料和试剂

1、 器材

50ml小烧杯,10ml移液管,试管,试管架。 2、材料:动物血液

3、试剂: 0.17mol/L氯化钠、0.17mol/L氯化铵、0.17mol/L醋酸铵、

0.17mol/L硝酸钠

0.12mol/L草酸铵和0.12mol/L硫酸钠

0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇和0.32mol/L丙酮

四、实验方法

1、动物血液的稀释:取1份血液,加入10份0.17mol/L氯化钠溶液即可。

2、低渗溶液:取试管一支,加入5ml蒸馏水,再加入0.5ml稀释的血液,注意观察溶液颜色的变化,由不透明的红色逐渐澄清,说明红细胞发生破裂造成100%红细胞溶血,使光线比较容易透过溶液。 3、红细胞的渗透性:

取试管一支,加入0.17mol/L氯化钠溶液5ml,再加入0.5ml稀释的血液,并轻轻摇动,注意颜色有无变化?有无溶血现象?为什么?

取试管一支,加入0.17mol/L氯化铵溶液5ml,再加入0.5ml稀释的血液,并轻轻摇动,注意颜色有无变化?有无溶血现象?若发生溶血,记下时间(自加入稀释血液到溶液变成红色透明澄清所需时间)。

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分别在另外几种溶液中进行同样的实验。步骤同上。

五、实验结果讨论与分析

将观察倒的现象列入下表,对实验结果进行比较和分析。 试管编号

1.5mlNaCl+0.5ml稀释血液 2. 5mlNH4Cl+0.5ml稀释血液 3. 5mlNH4Ac+0.5ml稀释血液 4. 5mlNaNO3+0.5ml稀释血液 5. 5ml草酸铵+0.5ml稀释血液 6. 5mlNa2SO4+0.5ml稀释血液 7. 5ml葡萄糖+0.5ml稀释血液 8. 5ml甘油+0.5ml稀释血液 9. 5ml乙醇+0.5ml稀释血液 10. 5ml丙酮+0.5ml稀释血液

是否溶血

时间

结果分析

人外周血细胞培养及染色体制备

Ⅰ 微量全血培养

1966年以前基本上用Moorhead等1960年建立的人体外周血白细胞培养技术,它的优点是方法比较完善。缺点是取血量较多,手续较麻烦。近三十年来国内外绝大多数均采用微量全血培养技术,不但取血量少,而且可略去一些操作过程,如离心、分离血浆等,计数时,既方便,也节省人力与物力,便于推广应用。

一、实验目的

在体外培养外周血淋巴细胞,制备人的染色体

二、实验原理

在活体情况下,进入外周血的小淋巴细胞不能进行增殖,存活一定时间后就死去,由新进入外周血的小淋巴细胞补充。但在人工离体培养条件下,培养基中的PHA(phytohemagglutinin,植物血细胞凝集素)有刺激小淋巴细胞转化并进行分裂的能力。此

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