1. 如发现探头银丝需要镀氯化物，取下，用刀片“轻轻的漂浮”着刮掉残存的黑色氯化物（否则银丝很快被刮细，更换很麻烦），并用细纸轻轻搽干净，然后在自制的装置上镀氯化物。地线和探头的银丝氯化物没有镀好，噪音会大增，原则上每天镀一次最好。 2. 插所有要使用仪器的电源。

3. 开所有要使用仪器的开关（ 除EPC-10外）。

4. 之后开EPC-10放大器开关, 马上click 桌面上的ICON “PatchMaster“,选择EPC-10，并观察EPC-10放大器的红、绿灯的变化（*开始先红灯闪亮，再红和绿交替闪亮，再只是绿灯亮，最后全部熄灭。如果红灯一直亮着，说明有问题，常见的一个是放大器出故障（公司维修），另一个是输入饱和造成，可按一下”setup”）。

5. 预设的几个窗口出现。同时出现一个小窗口，选其中的“quit”或其它。 6. 从“windows”开“pulse generator”，“load”出自己编好的实验用protocol，关闭此窗口，但是程序自动放置在了屏幕下方，以备使用。

7. 从“windows”开“configuration”，再关闭，此其中的记录功能已开启，可存下自己提前选定的参数（如：C-slow，Rs，等等）。隔天再打开一个实验记录分析时，从“windows”开“I/O control”,对应于此记录文件的当时的有关参数会出现在一个窗口供查阅。

8. 镜下找到一个细胞，置视野中间，并将镜头上升一点点，以可模糊看到细胞为原则（*防升过度将镜头损坏）。意义：找电极尖端时，防止电极尖端损伤细胞及碰到玻片。

9. 开Micromanipulator开关，将3个控制方向的细调放置在量程的中间（*垂直向下的进程可预留多一些）。（****试验中较长时间不用或试验完毕后，3个方向一定旋到最右，否则极大影响Burlergh微操的使用寿命！！！ （sutter微操有何注意事项？）。

10.将Micromanipulator的3个控制方向的粗调也放置在量程的中间（*向下的进程也要预留多一些）。

11.将EPC-10探头固定在空中方便装电极的位置。

12.将镀氯化物的探头取回，用双蒸水冲一下银丝，并将其安装到探头上。

13.冲灌电极至1/2处，肉眼仔细观察下，指弹去气泡（*最好的方法是将电极尖端插入电极内液7-10秒，再冲灌可避免小的气泡留置在电极的尖端。电极尖端的小气泡最难排出来）。

14.装电极到探头，转动着轻轻推进到底（*否则电极易断或粉碎，清理很麻烦！！！），然后旋转固定帽至适当紧度以不漏气为准。（***此时如果推气进入，松手后注射器芯会回位，抽气后松手注射器芯也会回位，说明无漏气；如果怀疑漏气，将装有电极的探头完全浸入装“双蒸水”的500ml的烧杯中，再推气进入，查看有气泡及气泡来自那里，再处理之）。

15.封闭抽负压系统，将注射器拔出后抽注射器芯顶端于1ml处，再插入（这样给了一个大小非常合适的正压）。

16.肉眼近距离仔细观下，将电极尖端放在正对镜头中心点，在细胞槽内液面上。 17.用粗调将电极尖端入水，深度以最深但不要接触到细胞为原则（*凭经验）。 18.click “setup”。

19.读电极的阻抗，如果不在你要求的范围内，重新上新电极（*不要再向下进行，否则只是浪费时间，并且成对的另一根电极也不要再用了，因为阻抗大体相同。但是可考虑将这样的电极用于puff药物给细胞时使用）。

20.click “LJ下的auto”。意义：补偿2种液体间的接点电位（槽内和电极内）。 21.捻动着Micromanipulator的粗调前后移动电极，应可见阴影在晃动，此后保持阴影置中间的情况下后退（向右退）（***理论上，随着这个过程阴影应该越来越细也越来越清楚，幸运的话可直接清楚看到电极尖端）。否则就利用3维旋钮设法找到清楚的电极尖端。

22.下移镜头聚焦细胞清楚可见，将电极尖端放到要patch的细胞部位上方（不要触到细胞）。

23.用细调下移接触细胞，有3个独立（或交叉配合使用）辨认电极和细胞接触的标准：i）镜下肉眼观察；ii）监视屏；iii）电流线（高度下降）。 24.再下压的程度：每种细胞都有一种相匹配的下压程度，才容易形成giga封接（***并且每种细胞都有一个最适阻抗/或者电极尖端开口与之相配）。对初学者提倡主要用镜下观察兼配之电流线观察方法，电流线降1/3-2/3是人们通常提倡的下压程度。（***首先记住电流线的高度，镜下观看着下压一定程度

后，回来看电流线下降的幅度，这样反复数次就应该感性认识到在镜下观察下压了多少。*有时下压超过了细胞还不见电流线下降，所以提倡镜下观察法，等有了经验后可主要观察监视屏）。

25.给负压（立即还是稍迟后点，没有经验者，可自己探索一下。 建议是等一段时间等电极玻璃和细胞膜间形成牢固的键结合后，再给负压），给多大（建议用2ml的注射器，慢慢增加负压值同时观看电流线的下降情况，下降快，负压就不要再增加或增幅要小，下降慢或难以下降，可增加高一定程度，关闭阀门（保持负压不变），等0-2（？）分钟以内，再去掉负压，如果达不到giga封接，立即换新细胞新电极重来，否则抱侥幸建立giga封接心理，基本上是浪费时间。

26.如果电流线变平了（即电流为0，说明到达giga封接了）。

稍等片刻（多长时间好自己探索，（我从来没等过，都是立即加负压破膜。打孔技术另行处理），等等是要让封接变更牢固，即让细胞膜和玻璃间形成一些牢固的键更稳，这样可增加whole-cell成功的几率）。

27.加压破膜（观察自动预加的5mV电压产生的方波型电流的2边，突然出现前（左）边有向上，后（右）边有向下的尖峰出现，这是破膜后的电容电流，是膜破裂的标志。

28.见此，立即（！！！）click “whole cell”，并立即将holding电压放到你需要的膜电位水平。理想值是这种细胞的自然膜电位，但是谁也不会知道真正的值是多少，只能是经验或参考值，但是离真实值越近越好，从文献中查找。（按键盘上向左箭头键，一次是-10mv）。

29.然后再click“C-fast的auto”，C-slow的auto”，这时Rs应在10Mohm一下，如果电流线不是一条平线，可反复按这2个“auto”几次（*按多了可使giga封接坏掉）。如果难以补偿，可在阻抗Rs窗口内输入一个较理想的值（10Mohm左右？），再按“auto“。 30.此时电流线应是一条平线。

31.click“store”，变红（很重要，否则数据存不下来。 32.click你的某个具体protocol进行记录。

33.完毕（程序可自然运行完；可以click“stop”，运行完当前曲线停止；可以

click“break”,当前曲线未完成就立即停止）。

34.click“close”。这样扫描的曲线将被储存起来了（很重要：否则数据没存下而丢失）。