4．由于小肠很细，小肠两端插管后再洗涤容易堵塞，加大流速可导致玻璃管滑出消化道而漏液。防止的方法是先将十二指肠端插管，回肠端找好后先用线扎紧（方便以后找切口位置），然后在扎线处切个小口，生理盐水从十二指肠插管处注入，待洗涤干净后，再于回肠端切口处插管。

5．开始回流后，可用棉花覆盖大鼠腹部保暖，以防实验结束前动物死亡，丢失数据。 6．SD的测定中，加入氨基磺酸铵后要充分振摇至无气泡发生。

7．SD浓度测定中空白对照液的制法：取酚红液1 ml置10 ml具塞试管中，加1 mol/L盐酸溶液1 ml，摇匀，以下操作按“制备SD标准曲线”方法。

8．酚红浓度测定中空白对照液为0.2 mol/L NaOH。

五、实验结果

1．计算SD和酚红的标准曲线回归方程和相关系数。

2．根据SD和酚红的标准曲线，分别计算出规定时间样品的SD和酚红浓度，记录于表19-1中。并按表中公式计算循环液体积及剩余药量；式中Cn表示第n次取样时SD的浓度，

表示第n次取样时酚红的浓度。

表19-1 SD小肠吸收实验数据处理 取样时间 (min) 循环前 0 15 30 ? tn

SD 吸收度 A0 A1 A2 A3 ? An

SD浓度 (μg/ml) C0

酚红 吸收度

酚红浓度 (μg/ml)

循环液体积 (ml) V0 = 80

剩余药量 (μg) X0 = V0 · C0 X1 = V1 · C1

C1

C2

X2 = V2 · C2+1.5C1

C3

X3 = V3 · C3+1.5(C1 + C2)

? Cn

? ? ? ?

3．以剩余药量的对数对相应的时间作图，可得一直线，由直线斜率可求得ka与t1/2(a)

值。

实验二 药物的组织分布实验

一、实验目的

1．以磺胺噻唑钠为模型药物，掌握药物组织分布实验的基本方法。 2．掌握生物样品的收集及前处理方法。

二、实验原理

药物在体内的分布是指药物经吸收进入体循环后，通过血液和各组织的膜屏障转运至各组织的动态过程。药物分布取决于组织的血流量、药物对脂膜的扩散速度及药物与蛋白质的结合程度。药物要分布到药理作用靶部位才能发挥药效。但如果药物在某组织出现蓄积则可能产生毒性作用，所以药物的分布可为药效学和安全性评价提供重要信息。通过组织分布研究，可以了解试验药物在实验动物体内的分布规律、主要蓄积组织或器官、蓄积程度等。组织分布实验通常通过给药后，于一定时间取出各组织或器官，经前处理后，用适宜的方法测定其中药物的含量。

磺胺噻唑钠为对氨基苯类化合物，在酸性溶液中可使苯环上的氨基（-NH2）离子化生成铵类化合物（-NH3+），进而与亚硝酸钠起重氮反应，产生重氮盐。此重氮盐可在酸性溶液中与显色剂胺类化合物（N-1-萘乙二胺）起偶联反应，形成紫红色的偶氮化合物。利用该呈色反应，采用分光光度法可测定出给药后不同时间不同组织中磺胺类药物的浓度。

三、仪器与材料

仪器：紫外-可见分光光度计，组织匀浆器，离心机，离心管等。

材料：10%磺胺噻唑钠（ST）注射液，20%三氯醋酸溶液，0.5%亚硝酸钠溶液，0.05%二盐酸萘乙二胺等。

四、实验内容

（一）标准曲线的制备

取大鼠3只，断颈处死，收集血液至肝素化离心管中，并立即取出肝脏、肾脏及脑组织，用生理盐水冲洗干净后立即用滤纸吸干，精确称量组织重量，按1:6加生理盐水（脑组织按1:3）置玻璃匀浆器中进行研磨，研磨后将匀浆液倒入离心管中，以3000 r/min离心10 min，取上清液1 ml按1:1加20%三氯醋酸沉淀蛋白，3000 r/min离心10 min，取上清液待用，血液经3000 r/min离心10 min后取上层血浆待测。

精密吸取沉淀蛋白后不同组织的上清液2 ml各6份于干净试管中，加入磺胺噻唑钠标准溶液使肝脏、肾脏组织液中药物浓度为0.1、0.25、0.5、1、5、10 μg/ml，脑组织液中药物浓度为0.05、0.1、0.25、0.5、1.5 μg/ml，再各加入0.5%亚硝酸钠溶液0.05 ml，混合，静置3min后，各加入0.5%氨基磺酸铵溶液1 ml，摇匀2 min后加显色剂（0.05%二盐酸萘乙二胺）2 ml，摇匀，5 min后于紫外-可见分光光度计，在540 nm处测定吸收度；空白对照以2 ml蒸馏水替代组织上清液，其他操作同样品处理。

（二）组织分布实验

取大鼠4只称重，按100 mg/kg的剂量尾静脉注射10%磺胺噻唑钠注射液，于给药后5、20、60、120 min时，处死大鼠，收集血液至肝素化离心管中，并立即取出肝脏、肾脏及脑组织，用生理盐水冲洗干净后立即用滤纸吸干，精确称量组织重量，余下操作除不加标准液外，其他同标准曲线制备项下处理后，测定不同时间、不同组织中的药物吸收度，代入相应标准曲线，计算不同时间内各组织中ST的浓度。

（三）注释

1．生物样品中含有大量的蛋白质，它们能与药物结合，影响药物的含量测定。特别是使用HPLC法时易损伤色谱柱，因此测定前必须先沉淀蛋白使药物游离后再作进一步处理。可通过加入与水混溶的有机溶剂、中性盐或强酸等方法沉淀蛋白。

2．本试验也可用家兔为实验动物，但标准曲线的浓度范围须由预试验确定。本实验主要给出肝脏、肾脏及脑组织中ST浓度的标准曲线浓度范围，仅供参考；心脏及血液的浓度范围可根据预试验确定。

五、实验结果

（一）实验记录与数据处理

1．分别计算各组织中ST的标准曲线回归方程和相关系数。

2．根据标准曲线方程，分别计算出各组织中样品的浓度及药量，并记录于表19-2。

表19-2 各组织中药量 组织

时间（min）

5

A

浓度C（μg/ml）

组织中药物量（μg/g）

肝

20 60 120 5 20 60 120 5 20 60 120 5 20 60 120 5 20 60 120

肾

脑

心脏

血液

实验三 血药浓度法测定静注给药的药动学参数

一、实验目的

1．掌握用血药浓度法测定药物动力学参数的基本方法。

2．掌握两室模型药物静注给药的药动学参数测定方法，求算氨茶碱药动学参数。