《药物分析》实验讲义

实验一 甲硝唑片的含量测定

一、目的要求：

1.掌握使用紫外分光光度法测定甲硝唑片含量的原理和操作方法，并能进行计算。 2.了解排除片剂中常用辅料干扰的操作。 二、原理：

根据甲硝唑能产生紫外吸收的性质，将本品用盐酸溶液配制成稀溶液，在甲硝唑的最大吸收波长处测定吸收度，根据吸收度与浓度的关系，用紫外分光光度法中的吸收系数法计算含量。

利用甲硝唑能溶于盐酸溶液中，而片剂的赋形剂不溶，通过过滤消除赋形剂对测定的干扰。

三、操作方法 1.盐酸溶液

取盐酸9mL，加水适量使成1000 mL，摇匀。 2.供试品溶液的制备

取供试品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于甲硝唑50mg），置100mL量瓶中，加盐酸溶液约80mL，微温使甲硝唑溶解，加盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液2.5mL，置100mL量瓶中，加盐酸溶液至刻度，摇匀，即得供试品溶液。取该溶液置1cm厚的石英吸收池中，以相同盐酸溶液为空白，在277 nm的波长处测定吸收度，按C6H9N3O3的吸收系数（E1m）为377计算，即得。

《中国药典》2005版规定本品甲硝唑（C6H9N3O3）应为标示量的93.0％－107.0％。 3.计算

甲硝唑片占标示量的百分比可按下式求得： 标示量％＝【A×D×平均片重/377×100×W×标示量】×100％ 式中：

D：稀释倍数；

W：称取供试品的量(g)。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

注：分光光度法应以配制供试品的同批溶剂为对照，采用1cm的石英吸收池。以吸收度最大的波长作为测定波长，一般供试品的吸收度读数，以在0.3-0.7之间的误差较小。仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度偏低。狭缝宽度的选择，应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准。由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。 四、思考题

1.试述测定甲硝唑片含量的原理及操作注意点？ 2.计算本法的测定结果。

参考文献：中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2000年版，二部。

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实验二 阿司匹林（乙酰水杨酸）片的含量测定(两步滴定法)

一、 目的要求

1.掌握阿司匹林片含量测定的原理和酸碱滴定法在药物分析中的实际应用。 2. 掌握片剂含量测定的一般操作方法及计算。

二、基本原理

阿司匹林易水解，产生水杨酸和醋酸。 片剂中还加入枸橼酸或酒石酸作稳定剂，所以不能采用直接水解后剩余碱量法测定阿司匹林的含量。可以采用两步中和法，第一步为中和，即于中性醇中以氢氧化钠中和样品中所有游离酸恰至终点（阿司匹林也同时成为钠盐）；第二步为水解后剩余滴定，即于得到的中性供试品溶液中，加入过量的碱，加热使乙酰羟基酯水解，剩余的碱用酸回流，并将滴定结果用空白试验校正。根据水解乙酰羟基酯所用的碱量计算阿司匹林的含量，即1mol阿司匹林销耗1 mol碱。

利用乙酰水杨酸的羟基酯结构在碱性溶液中易水解的性质，加入一定量过量的氢氧化钠溶液，加热使酯水解，剩余碱液以标准酸液回滴。本品含乙酰水杨酸（C9H8O4）应为标示量的95.0～105.0%。 三、实验内容 1.操作

取本品10片，精密称定，研细，精密称出适量（约相当于乙酰水杨酸0.3g），置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml，振摇，使乙酰水杨酸溶解，加酚酞水溶液3滴，滴加氢氧化钠液（0.1mol/L）至溶液显分红色，再精密加入氢氧化钠液（0.1mol/L）40ml，置水浴上煮沸15分钟并时时震摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定，并将滴定结果用空白实验校正，即得。每1ml的氢氧化钠液（0.1mol/L）相当于18.02mg的C9H8O4。

本品含乙酰水杨酸（C9H8O4）应为标示量的95.0～105.0%。 2、计算：

标示量%＝{[（V样－V空）×T×F×W片]/ W样×标示量}×100% VNaOH：氢氧化钠液消耗的体积（ml） F：氢氧化钠液浓度校正系数 W片：平均片重（mg） W样：取样重（mg）

标示量：每片中应含本品的量（mg） 四、注意事项

1.滴定至溶液呈粉红色，以能维持15秒钟不褪色为终点。如长时间振摇，由于空气中二氧化碳的影响，红色又可消失。

2.第一次用氢氧化钠滴定液中和片剂中酸类时，应在低温迅速中和至刚呈粉红色15秒钟不褪色即可，不要剧烈振摇，以免可能使酯键水解，影响测定结果。

3．第二次加碱、加热水解阿司匹林应不时振摇，保证水解完全；然后迅速放冷，尽量避免碱液在受热时吸收二氧化碳。 五、 思考题

1、阿司匹林片剂采用两步滴定法的原因及解释何为两步滴定法？

2.做空白试验的目的是什么？应怎样做？ 3. 计算本法的测定结果。

4.阿司匹林含量测定还有哪些方法？各自的结构依据及适用对象是什么？

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实验三 葡萄糖注射液的含量测定 （旋光法）

一、目的要求：

1.掌握WXG-4圆盘旋光仪旋光法测定葡萄糖含量的操作并能进行有关计算。 2.熟练用紫外分光光度计检查药物中杂质的操作。 二、基本原理

葡萄糖注射液具有补充体液、营养、强心、利尿、解毒作用，是临床最常用和用量最大的输液之一。平面偏振光通过含有某些光学活性的化合物液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的平面向左或向右旋转。旋转的度数，称为旋光度。

由单色光源（一般用钠光灯）发出的光，通过起偏棱镜（尼可尔棱镜）后，转变为平面偏振光（简称偏振光）。当偏振光通过样品管中的旋光性物质时，振动平面旋转一定角度。调节附有刻度的检偏镜（也是一个尼可尔棱镜），使偏振光通过，检偏镜所旋转的度数显示在刻度盘上，此即样品的实测旋光度α。其旋光原理如图1所示。

图1 旋光原理

采用旋光法测定其含量。《中国药典》2005版规定本品（100ml：葡萄糖10g，氯化钠 0.9 g）含葡萄糖（C6H12O6.H2O）应为标示量的95.0～105.0%。

5-羟甲基糠醛（5-HMF）是葡萄糖等单糖化合物在高温或弱酸等条件下脱水产生的一个醛类化合物。该化合物对人体横纹肌和内脏有损害。利用5-HMF在284nm波长处有最大吸收。本品每100ml中含0.2g葡萄糖的水溶液在284nm波长处的吸收度不得大于0.32。 三、实验内容

（一）紫外分光光度法测定5－HMF吸收度：精密量取本品1ml（约相当于葡萄糖0.1g）置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，以蒸馏水为空白对照，在284nm波长处测定其吸收度。 (二)．旋光度的测定

（1）样品溶液的配制：由于葡萄糖溶液具有变旋光现象，所以待测葡萄糖溶液应该提前24小时配好，以消除变旋光现象，否则测定过程中会出现读数不稳定的现象。葡萄糖在氨水的碱性条件下可以迅速达到平衡，可以放一会就测定。

（2）预热：打开旋光仪电源开关，预热5～10分钟，待完全发出钠黄光后方可观察使用。 ( 3 ) 装待测液：洗净测定管后，用少量待测液润洗2—3次，注入待测液，并使管口液面呈凸面。将护片玻璃沿管口边缘平推盖好(以免使管内留存气泡)，装上橡皮填圈，拧紧螺帽至不漏水(太紧会使玻片产生应力，影响测量)。用软布擦净测定管，备用 (如有气泡，应赶至管颈突出处） 。

（4）调零：将装满蒸馏水的测定管放人旋光仪中，校正目镜的焦距，使视野清晰。旋转手轮，调整检偏镜刻度盘，使视场中三分视场的明暗程度一致，读取刻度盘上所示的刻度值。反复操作两次，取其平均值作为零点,若平均值不为零而存在偏差值，应在测量读数中将其减去或者加上。读数（同游标卡尺）

从目镜中可观察到的几种情况：(1)中间明亮，两旁较暗。 (2)中间较暗，两旁较明亮。 (3)视场内明暗相等的均一视场。

（5）测定：样品的测定和调零方法相同。每次测定之前样品管必须先用蒸馏水清洗1~2遍，

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再用少量待测液润洗2～3次遍，以免受污物的影响，然后装上样品进行测定。旋动刻度盘，寻找较暗照度下亮度一致的零度视场。若读数是正数为右旋；读数是负数为左旋。读数与零点值之差，即为样品在测定温度时的旋光度。按上述方法重复读数两次，取其平均值，由葡萄糖溶液的比旋光度计算浓度。实验完毕，洗净测定管，再用蒸馏水洗净，擦干存放。

注意镜片应用软绒布揩擦，勿用手触摸

* 差值 ＝ 旋光度平均值 － 零点平均值

(6)计算

c为每100ml溶液中含有被测物质的重量,g（按干燥品或无水物计算）。 旋光计的检定，可用标准石英旋光管进行，读数误差应符合规定。

相当于标示量（以含水葡萄糖（C6H12O6.H2O计算）的百分含量= （7）注意事项

a.镜片不能用不洁或硬质布、纸去揩，以免镜片表面产生道子等。

b.一般旋光仪的刻度盘的最小刻度为0.25°，加上游标，可读至0.01°。

c.在测定零点（或旋光化合物的旋光度）时，必须重复操作至少3次，取其平均值。若零点相差较大，应重新校正.

d.试管使用后，应及时用水或蒸馏水冲洗干净，揩干藏好。 四、思考题

1.试述旋光法测定葡萄糖含量原理及旋光仪操作注意事项。 2.计算本法的测定结果。

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