多菌灵对小麦赤霉病病菌菌丝生长的毒力测定

一、实验目的：掌握生长速率法的基本操作

二、实验基本原理：琼脂平板培养法是在融化的培养基中加入一定浓度的杀菌剂，制成含梯度浓度药剂药剂的培养基平面，再在平面上接种病原菌。以病原菌生长速率为指标评价药剂的毒力。病原菌生长速率通常采用在一定时间内病原菌生长的菌落直径大小（即扣除接入病原菌菌落直径）表示，也可用菌落达到一定直径所需时间表示。在测定中一定要同时设置不加药剂和只加药剂配置时的溶剂和助剂的空白对照，用于在计算毒力时溶剂和助剂对结果的影响。该方法尤其适合在琼脂培养基上能够沿水平方向有一定生长速率且菌落接近于圆形的病原真菌或者在液体培养基中能够迅速培养的病原细菌。 三、实验步骤

1，菌碟制备：以小麦赤霉病菌作供试菌株，取灭菌培养皿一套，分别加入已融化的马铃薯培养基17ml制成平板。取已经活化的小麦赤霉病病原菌菌种一支，在培养皿中央分别接入赤霉病病原菌，置于25C恒温箱内倒赔84h后，用内径为5mm的打孔器沿菌落外周处打一周，制成菌碟。 2，含梯度浓度药剂平板的制备

（1）药剂浓度处理设置 处理药剂浓度为 0、0.125、0.25、0.5、1和2ppm，每处理3个重复。

（2）制备药剂母液 用分析天平称取0.01g多菌灵原药，先加入到1ml 0.1mol/L盐酸水溶液中，再加9ml灭菌水，摇匀，制成1000ppm的母液 （3）制备对照平板 用量筒分别量取50ml培养基均匀家去到3个灭菌的培养皿中，制成对照平板

（4）制备药剂浓度梯度 在灭菌的三角瓶中用移液器先加入180ul母液，再用量筒1量取90ml培养基加入到三角瓶中，摇匀，用已灭菌的量筒2量取45ml摇匀然后加入到无菌培养皿中，制成2ppm的含药平板，并标注。以此重复上述过程，制成1ppm、0.5ppm、0.25ppm、0.125ppm的含药培养基平板。

3，接菌、培养和结果调查 用接种针分别在含药培养基平板中央接入菌碟（气生菌丝朝上），每皿一个菌碟，在25度恒温箱内倒置培养72h，采用十字交叉法测量每皿菌落的直径。记载时，以直尺量取菌丝直径（mm），分别记录

4，结果与分析

将数据代入生长抑制率公式，求出不同药剂处理的抑制率，然后将其转化成几率值，将药剂浓度转化成对数值，用SAS标准统计软件进行药剂浓度的对数与生长抑制量几率值之间的回归分析，计算抑制菌落生长50%的抑制中浓度。

浓度直径（mm） 平均直径（mm） 抑制率（%） （ppm） CK 0.125 0.250 0.500 1.000 2.000

68.0 68.0 69.0 68.0 68.0 68.0 68.0 68.0 69.0 67.0 67.0 68.0 63.0 63.0 60.5 38.2 1.7 0.0 0.000 0.000 0.040 0.394 0.973 1.000 68.0 69.0 66.0 64.0 63,.0 63.0 42.0 43.0 42.0 43.0 45.0 6.0 5.0 7.0 5.0 6.0 5.0 7.0 7.0 5.0 5.0 44.0 7.0 5.0 R=0.9931 Y=7.8655x+7.3492

EC50=0.5027 置信区间[0.4409，0.5733]