8月23日 参观ELASA检测实验室 8月24日 参观ELASA检测实验室

8月25日 厂区生产工艺介绍，厂区总体布局参观 4.2 公司概况

乾元浩生物股份有限公司南京生物药厂成立于1931年，原为国民政府中央畜牧实验所，是我国最早从事畜牧实验和畜禽疫苗研究与生产的企业。2004年7月，资产重组后更名为乾元浩生物股份有限公司南京生物药厂，是乾元浩生物股份有限公司冻干疫苗生产基地。

该厂于1990年、2000年分别兴建了两座符合兽药GMP规范的洁净厂房，总建筑面积8078平方米，净化面积4500平方米。兽药GMP车间采用自动控制系统，具有自动化程度高、性能稳定、技术先进的特点。 2002年12月，该厂率先通过农业部兽药GMP认证，成为国内第一个通过GMP认证的兽用生物制品生产企业，也是国内第一个通过GMP动态验收的兽用生物制品生产企业。 该厂目前拥有3个GMP车间，9条自动化生产线，年生产能力为160亿羽（头）份，并拥有一座由世界银行投资兴建、符合国际标准的SPF鸡场。产品分为禽活疫苗、禽灭活疫苗、牲畜活疫苗、牲畜灭活疫苗四大类。 4.3工厂选址与环境简介

公司位于南京市雨花台区小行里51号，由于该厂的GMP车间对环境的要求很严格，因此厂区拥有大片绿化，为了防止泥土裸露，还在厂区内种有一大片草地。 4.4 质检车间

我们小组被分配至质检车间进行实习，对该车间的主要组成部分和ELASA检测进行了了解。 4.4.1 车间概况

质检车间主要是对产品的各项性能指标进行检测，从而检验产品是否符合《中华人民共和国兽药典》里面所规定的标准，是判定各批次产品是否被淘汰的关键环节。该车间实验室主要有细胞制备室、支原体检测室、核酸提取室、荧光观察室、PCR检测室等，另外还有控制区、设备室、储存室、留样室等。

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4.4.2 兽用生物制品的检测

（1）一般检测项目：性状检验、无菌检验、真空度测定、剩余水分测定、甲醛，苯酚或汞类防腐剂残留量测定、安全检验、效力检验、剩余水分测定、真空度测定等。

（2）不同的疫苗对应的检测项目会有差别，因此每一种疫苗又会有与之对应的具体检测项目。

鸡新城疫活疫苗的检验项目：性状检验、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、鉴别检验、安全检验、效力检验。

图4-1外源病毒的质控流程图

4.4.3 主要检测疫苗

口蹄疫（A型）灭活疫苗（AF/72株）、鸡传染性法式囊病活疫苗（B87）鸡传染性支气管炎活疫苗（H120株）、鸡痘活疫苗（鹌鹑化弱毒株）、鸡马立克氏病活疫苗（814株）、鸡新城疫活疫苗等。 4.5疫苗生产工艺

该厂生产兽用生物制品，按性质主要分为疫苗、诊断制品和抗病血清，而此次我们主要了解是该厂制备疫苗的工艺流程。

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4.5.1 疫苗分类

（1）活疫苗——又称弱毒疫苗，是目前使用最广泛的疫苗。指在特定条件下，通过人工定向培育，使微生物毒力减弱，但仍保持其良好的免疫原性，或筛选自然弱毒株制成的疫苗为弱毒疫苗，如鸡成立克氏病疫苗、鸡新城疫活疫苗、鸡传染性支气管炎活疫苗、小鹅瘟活疫苗等。

（2）灭活疫苗——又称死疫苗，是目前较受欢迎的疫苗。以选用免疫原性良好的病原微生物经人工培养后用理化方法将其灭活制成的疫苗。如禽流感灭活疫苗、猪伪狂犬病灭活疫苗、鸡大肠埃希菌病灭活疫苗等。 4.5.2 组织疫苗 （1）生产模式

将病毒种子接入鸡（鸭、鹅）胚，利用胚的生理功能，使病毒在胚体中增殖，及时收取尿囊液、胚体：

组织活疫苗——加入保护剂，经冻干制成。

组织灭活疫苗——将抗原灭活，加入佐剂，乳化制成。 （2）生产工艺简介

1)孵胚

a.选择鸡胚——必须选择单枚重量在48-60g之间，大小均匀一致SPF蛋，蛋壳表面致密，钙质分布均匀。

b.鸡胚孵化过程中的技术控制

鸡蛋入孵前进行熏蒸消毒；

孵化温度37.5~38.5℃，相对湿度55~70％； 翻蛋频率为2h/次；

孵化至5~7日龄时须照蛋（头照），剔除未受精的鸡蛋和死胚； 孵化至10日龄时备用。 2）种毒准备

必须选择SPF鸡蛋制作种毒；

种毒类型分为原始种毒、基础种毒、种毒批； 种毒效价达需一定含量，如ND：108.5EID50/0.1ml； 种毒无细菌、霉菌、支原体和外源病毒。

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将种毒作数万倍稀释；

3）接种 a.接种途径

一般根据接种材料选择不同的接种途径和不同日龄的蛋胚，常用的蛋胚接种途径有：

尿囊腔——9-11日龄蛋胚； 绒毛尿囊膜——10-12日龄蛋胚； 卵黄囊接种——5-7日龄蛋胚。 b.接种方法

单孔接种——在蛋胚气室的中心位置打一个小孔，垂直刺入针头约2cm，接入接种物，封口，放入孵箱内孵化。也可在气室范围内距边缘处打一小孔（避开大血管），沿胚长径平行方向刺入针头，注入接种物。

双孔接种——在离气室0.3~0.5cm无大血管处作一标记，作为接种孔的位置，在气室和标记处各打一小孔，自接种孔接入接种物。 4）收获

接种后，置37℃左右，相对湿度55~70%环境中继续孵72~120h，即可进行收获，收获物称为抗原。

a.尿囊液的收获：取出冷藏好的蛋胚，直立于蛋盘，气室向上，用碘酊消毒气室部位，除去卵壳，刺开内层壳膜和绒毛尿囊膜，直接用无菌吸管或注射器吸取尿囊液。

b.胚胎的收获：除去气室部卵壳后，用无菌镊子撕破内层壳膜和绒毛尿囊膜，夹起胚胎，剪断卵黄囊带，置灭菌平皿或瓶内。 5）中间检测

对抗原进行效价检测，抗原效价必须达一定的含毒量，且无细菌、霉菌、

支原体和外源病毒。 6）活疫苗的包装

添加保护剂——根据配苗比例，添加保护剂以期产品的均一与稳定； 分装——用自动分装机进行定量分装（半加塞）；

冻干——进入冻干机进行程序冻干（失去自由水和结合水）；

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