便于无毒种质的国际交换。 ? ?

2．1 引言

一个组织培养实验室的面积大小和装备程度取决于两个因素：一是所要进行的实验的性质，二是所能得到的经费的多少。

? 然而，一个标准的组织培养实验室应当具备的设施：①玻璃器皿、塑料

器皿和其他实验器皿的清洗和贮存； ? ②培养基的制备、灭菌和贮存； ? ③植物材料的无菌操作

? ④将培养物保持在温度、光照、可能时还有湿度的可控条件下； ? ⑤培养物的观察。

? 为此至少需要有两个隔开的房间：一间用于玻璃器皿的清洗和贮存，以及

培养基的制备(培养基室)，第二间用于放置培养物(培养室)。培养室内应放一张桌子，上置双筒解剖镜和所需的光源，以便对培养物进行镜检。

? 2．2．1 培养基室

? 配制培养基所需的一般设备包括：①工作台——其高度应适合于站着工

作，

? ②低温冰箱——用以贮存贮备液和椰子汁等，若无低温冰箱，在普通冰箱

内也可短期贮存，③普通冰箱——用以贮存各种化学药品、植物材料，和短期贮存贮备液等；

? ④大塑料瓶——用以贮存蒸馏水； ? ⑤天平；

? ⑥电热磁搅拌器——用以溶解化学药品 ? ⑦酸度计

? ⑧吸气机或真空泵——用以辅助过滤灭菌； ? ⑨恒温水浴锅——用以融化琼脂，

? ⑩高压灭菌锅或家用压力锅—— 用以进行培养基灭菌 2．2．2 培养容器

? 各种不同类型的容器都可用来培养植物材料。

? 玻璃试管 ? 广口玻璃瓶 ? 牛奶瓶和罐头瓶 ? 塑料容器

? 耐高温高压的透明塑料封口 ，橡皮圈箍扎 2．2．3 培 养 室

? 培养室的温度应当是可控的，一般是用空调或热风机使温度保持在25±

2℃。

? 培养一般是在散射光下进行的，但有些情况下也需要较强的光照或完全黑

暗，设备上对此应当有所准备。

? 当培养室的相对湿度降到50％以下时，应采取措施增加湿度。一般应75%

相对湿度。

? 进行悬浮培养，培养室内还应设有摇床 ? 最好设置一台备用发电机

? 在培养室内应设有若干培养架以放置培养物 ，每层分别装有日光灯管 ，

小风扇。 2．3 技 术

2．3．1 玻璃器皿和塑料器皿的清洗

? 传统办法是用洗液(重铬酸钾和浓硫酸混合液)浸泡约4h ? 现在都使用特制的洗涤剂 ? 放入高压锅中灭菌 ? 超声波洗涤柜 2．3．2 灭 菌

培养基的污染有几个可能的来源：1培养容器，2培养基本身，3外植体，4接种室的环境，5在接种和继代时用以操作植物材料的器械，6培养室的环境。下面讨论防止由这些来源造成污染的各种措施 1．培养基

? 置于高压灭菌锅中，由培养基达到要求温度的时刻算起，在1．06kg／cm2

的压力下(121℃)消毒15～40min。灭菌作用取决于温度，而不是直接取

决于压力。

? 所需的时间随着要进行消毒的液体的容积而变化

? 当冷却被消毒的溶液时必须十分当心，如果压力急速下降，超过了温度下

降的速率，就会使液体滚沸，从培养容器中溢出。

? 只有当高压灭菌锅的压力表指针回到零(温度不高于50℃)时，才能打开灭

菌锅。

? 某些生长调节物质(如GA，、玉米素，ABA)，尿素以及某些维生素等，遇

热时容易分解，不能进行高压灭菌。

? 热分解化合物溶液的灭菌是通过滤膜过滤进行的，然后再将之加入高压灭

菌过的培养基中

? 在进行溶液过滤消毒时，可使用孔径为0．45微米或更小的细菌滤膜。 ? 过滤器的灭菌温度非常重要，不应超过121℃ ? 过滤灭菌的操作：

? 把一个装有需要灭菌的溶液的带刻度注射器(不必消毒)安到已灭过菌的

过滤器组件的一端，缓慢地推动溶液使之穿越安在这个过滤器组件中间的细菌滤膜，过滤后的溶液由过滤器组件的另一端滴下来，直接加入培养基中

2．玻璃器皿、塑料器皿和器械

? 玻璃培养容器常常与培养基一起灭菌

? 对于无菌操作所用的各种器械，如镊子、解剖刀、解剖针和 扁头小铲等，

一般的消毒办法是把它们先在95％酒精中浸一下， 然后再置火陷上灼烧，待冷却后使用。

3．植物材料

? 有若干种灭菌剂可用来进行植物组织消毒， 应当正确选择消毒剂的浓度

和处理时间，以尽量减少组织的死亡。

? 一般来说，如果外植体较硬较大，容易操作，可直接用灭菌剂进行处理。 ? 若要培养柔嫩的茎尖或花粉粒，须分别把茎芽或花蕾进行表面消毒，然后

在无菌条件下取出外植体。这类外植体一般都不带污染微生物

4．接种区

? 最后必须特别强调的一点是，无论是接种还是继代，当培养容器敞着口的

时候，必须从各方面注意防止任何污染物进入容器，为此所有的操作都必须在严格的无菌条件下进行。近年来多数实验室都使用各种类型的超净工作台进行无菌操作。

? 超净工作台----内都装有一个小电动机 ,粗过滤器,细过滤器,空气的速度大

约是27±3m／min。

植物组织无菌培养的一般步骤

?

置于一个有螺丝盖的玻璃瓶中 浓度适当的消毒液 将材料取出，置于一个

无菌蒸馏水3～4次 对所要使用的器械进

行消毒

外植体接种到培养基上

已经灭过菌的培养皿中 使用这些消过毒的器械

瓶口置酒精灯火焰上 烘烤 数秒钟，然后 迅速用瓶盖或瓶塞封

第三章 培养基 1 培养基的种类及组成

? 培养基：供植物离体培养用的基质，相当于人工配制的“土壤”。由无机

营养物、碳源、维生素、生长调节物质、有机附加物、水和介质等几大类组成，为培养物提供营养、水分和固定场所。

? 在植物生物技术的发展进程中，研究者们根据不同的研究目的和培养物对

营养的需求，开发出数十种组份各异的培养基配方（见附录I）。