Document No.: Farmtec Research Co., Ltd. Version No.: 01 Page 1 of 7 Effective Date: 2009.09.20 FQC01002 Title: Waters高效液相(Waters e2695 2489 Emp2)使用维护和校正 Written By: Reviewed By: Approved By:
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Document No.: Farmtec Research Co., Ltd. Version No.: 01 Page 2 of 7 Effective Date: 2009.09.20 FQC01002 Title: Waters高效液相(Waters e2695 2489 Emp2)使用维护和校正 本文件所包含的章节和修订记录本如下： 1. 目的 2. 适用范围 3. 参考 4. 职责 5. 安全 6. 操作 7. 保养 8. 注意事项 9. 校正 修订记录表
1. 目的
建立HPLC（Waters e2695/2489/Emp2）的使用、维护和校正方法 2. 适用范围
适用于所有此仪器的使用、维护和校正人员 3. 参考
Waters e2695/2489/Emp2的操作手册。
4. 职责
实验员应严格遵照该操作规程，主管负责监督本规程的实施 5. 安全
实验人员应穿戴实验服，配戴乳胶手套 6. 操作
6.1 开机
6.1.1
6.1.2 6.1.3
首先确认所有的电源插头已插好，开启e2695的开关，仪器开始自检（4-5min），待屏幕上方出现“Idle”字样，表示自检成功
开启2489的开关，进入仪器的自检状态，面板显示一系列自检过程，约5分钟，通过自检后显示吸光度主屏幕。
在2695屏幕上，进入status界面，选中要用的通道，设定“100%”，然后点击Direct Function，再点击Wet Prime清洗通道,将每一个会用到的溶剂通道按照上述操作一次。
打开电脑，使用相应用户名及密码登陆Windows。 双击图标打开仪器软件（Empower2）。
6.1.4
6.1.5
6.2 数据的采集
6.2.1 进入运行样品
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Document No.: Farmtec Research Co., Ltd. Version No.: 01 Page 3 of 7 Effective Date: 2009.09.20 FQC01002 Title: Waters高效液相(Waters e2695 2489 Emp2)使用维护和校正 6.2.2
在出现的页面的左框中选择欲数据储存的?项目?，在右框中选择所需的仪器系统，然后单击“确定”。
6.2.3 出现“运行样品”窗口后，在“编辑”菜单中，选择“新建方法组”。 6.2.4 出现对话框，单击“是”，选择使用向导来创建方法。 6.2.5 出现“新方法组-选择仪器方法：，可以在现有的仪器方法中选择一个，或单
击“新建”来创建新的仪器方法。
6.2.5.1 如果单击了“新建”，会出现仪器方法编辑器。 6.2.5.2 可根据需要编辑每个仪器的参数。
6.2.5.3 编辑仪器参数完成后单击“文件-保存”或“另存为”，出现“保存仪器
方法”对话框，输入仪器方法名，单击保存，保存该仪器方法。
6.2.5.4 关闭“仪器方法编辑器”窗口。
6.2.5.5 新建的仪器方法出现在仪器方法列表中。
6.2.6 选中所要的仪器方法，单击“下一步”，出现“选择缺省方法”页。 6.2.7 选择“处理方法”与“报告方法”，如尚未建立合适的方法，也可不选，
单击“下一步”，出现“命名方法组”，输入方法组名，必要时输入注释后，单击“完成”。
6.2.8 出现“方法组编辑器”，可根据需要进行编辑，或者暂不编辑，然后关闭
窗口，回到运行样品窗口。
6.2.9 在“方法组”下拉菜单中选择欲使用的方法组，同时在右下方的“仪器方
法”下拉菜单中，选择欲使用的仪器方法。
6.2.10 单击“监视器”键，观察基线。
6.2.11 待系统平衡后，可单击“停止键”，终止观察基线。
6.2.12 样品组编写好后，应请他人复核，并核对瓶号、仪器方法、方法组，复核
人员应在仪器使用记录表的备注栏内写上“已复核”并签名加注日期。 6.3 进样
6.3.1
6.3.2
等到系统空闲后，设定采集的参数—样品名、功能、样品瓶以及样品体积与运行时间，最后单击“进样”。
当所有样品运行完成后，从菜单中选择“文件-退出”，结束运行样品的过程。
6.4 数据处理
6.4.1 单击鼠标左键进入“浏览项目”。
6.4.2 选择欲浏览数据所在的项目，然后单击“确定”，进入该项目。 6.4.3 在“通道”选项卡中选择欲处理的数据，单击查看打开。
6.4.4 单击处理方法向导，出现“处理方法向导”对话框，选择新建或者编辑现
有的处理方法，然后单击“下一步”。
6.4.5 出现“新处理方法”对话框。
6.4.6 在“积分-峰检测1”中，设定峰宽或者接受缺省值，单击“下一步”。 6.4.7 在“积分-峰检测1”中，设定积分阈值或者接受缺省值，单击“下一步”。 6.4.8 在“积分-积分区域”中，直接输入保留时间或用鼠标左键拖曳放大选定积
分区域，单击“下一步”。
6.4.9 在“积分-峰剔除”中，根据需要设定最小面积或最小高度，或者不作任何
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Document No.: Farmtec Research Co., Ltd. Version No.: 01 Page 4 of 7 Effective Date: 2009.09.20 FQC01002 Title: Waters高效液相(Waters e2695 2489 Emp2)使用维护和校正 6.4.10 6.4.11 6.4.12 6.4.13 6.4.14 6.4.15 6.4.16 6.4.17 6.4.18 6.4.19 6.4.20 6.4.21 6.4.22
改动，单击“下一步”。
在“校正-普通”页中，除了特定要求外，接受缺省选项，单击“下一步”。 出现对话框，选择“否”。
在“校正-名称和保留时间”页中，在名称栏中，输入组分的名称或不作改动，单击“下一步”。
“校正-缺省量”页中，单击“下一步”。
“校正-内标样”页中，接受缺省选项，单击“下一步”。
在“处理方法名”中输入方法名，必要时输入注释后，单击“完成”结束处理方法向导。 在主窗口中，“峰”表中出现积分结果，同时将组分名称及保留时间标记在色谱图上。
单击“方法组”图标，出现方法编辑器。
在处理方法下拉框中，选择刚才建立的处理方法或者根据需要选择其他的处理方法。
如希望加入采集仪器方法，则可在仪器方法下拉菜单中选择指定的方法后，单击“文件”保存方法组。
出现对话框，输入方法组的名称，单击保存即可。 单击全部保存，进行保存。 关闭窗口。
6.5 定量计算
6.5.1 回到“通道”选项卡，选中要处理的全部样品，然后单击鼠标右键出现快
捷菜单，选“处理”。
6.5.2 出现“后台处理及生成报告”对话框。 6.5.3 在“处理”中，选“使用指定的方法组”，并在下拉菜单中选择刚才利用向
导建立的方法组，使“打印”和“导出”方框为空，并在“清除校正”方框中打勾，单击“确定”。
6.5.4 在本“项目”窗口中选中“结果”选项卡。 6.5.5 单击“更新”键更新结果。
6.5.6 选中欲浏览的结果，单击查看，出现查看主窗口。
6.5.7 在打开的“查看”窗口中可以观察计算的“含量”结果。
6.5.8 窗口的上部为曲线方程的回归系数等内容，可通过下拉菜单，查看不同组
分的相关信息。 6.6 数据的打印
6.6.1 单击鼠标左键进入“浏览项目”。
6.6.2 选择欲打印数据所在的项目，然后单击确定，进入该项目。 6.6.3 在“结果”选项卡中选择欲打印的结果，单击预览出版。 6.6.4 出现“打开报告方法”对话框。 6.6.5 选择“使用对选中的数据适用的报告方法”。或者在“使用以下的报告方法”
下拉菜单中选择适当的报告方法，然后单击“确定”。
6.6.6 在屏幕的右侧即出现报告，如欲在打印前预览，单击打印报告预览。 6.6.7 如预览后无误，单击打印，打印报告。
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Document No.: Farmtec Research Co., Ltd. Version No.: 01 Page 5 of 7 Effective Date: 2009.09.20 FQC01002 Title: Waters高效液相(Waters e2695 2489 Emp2)使用维护和校正 6.7 清洗色谱柱及管路
分析结束后，保持原流动相冲洗两倍以上的保留时间(至少半小时)，再依据样品的流动相性质，将流动相改为相应的清洗溶剂（依据所分析样品的流动相性质选用，通常涉及使用水溶液的用超纯水，有机系统可直接用甲醇），冲洗约60ml后，再改用甲醇冲洗约30ml，待系统正常后，关闭色谱工作站，关闭HPLC各部件电源及电脑。 6.8 记录
实验结束填写记录，除去杂物，整理干净。 7. 保养
7.1 仪器基本资料和规格见附件二。 7.2 擦拭仪器外表，保持清洁。
7.3 柱子使用后需保存在合适的环境中以便下次使用。 7.4 Pump使用过结晶性或缓冲液的流动相之后必须用水清洗。 7.5 Plunger及Seal若磨损时，应更新以免产生误差（会有漏液现象）。 7.6 每周定期由指定人员进行清洁保养并留记录。（见附件3）。 8. 注意事项
8.1 仪器应避免放在有腐蚀性气体或易振动的地方，应置于温度10-40℃且具温度调节的地方。 8.2 仪器应有“接地”装置，并有“稳压”装置供应电源。 8.3 使用当中切勿搬动，以免损坏仪器。
8.4 若需维修仪器时，切勿自行拆卸装置，以免损坏零件。 9. 校正
9.1 校正周期：三个月。
9.2 校正程序
9.2.1 开机及准备
9.2.1.1 打开电脑，自检自动进行，当在2695分离单元上显示Idle后，系
统自检结束。
9.2.1.2 Prime Nd/Wash检测，当在2695分离单元上显示Idle后，按Diag
按钮，再按Prime Nd/Wash按钮，按Start按钮，开始进行Nd/Wash，结束后，按Close回到Diag。
9.2.1.3 Prime Seal Wash：在Diag窗口，按Prime Seal Wash，按Start按钮，
开始进行Seal Wash，结束后，按Close回到Diag。
9.2.2 流速准确性
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9.2.4
9.2.5
9.2.6
9.2.7
9.2.2.1 流动相为超纯水
9.2.2.2 取经过校正的容量瓶和秒表备用，于管柱出口端（不接检测器）收
集滴出的溶液。
9.2.2.3 分别设定流速于5.0，1.0，0.5ml/min，分别用25ml,10ml,10ml干燥
容量瓶收集25ml,10ml,10ml，当流速稳定时开始计时，各执行三次 ，流速接受标准为±1.2%。
进样准确性
9.2.3.1 在样品瓶中装入1.5ml脱气后的超纯水，精密称定为W1。
9.2.3.2 流动相为甲醇，流速为1.0ml/min，柱温为25℃，样品室温度设定
为25℃，（平衡15min后，温度计测实际值，查找对应的水密度ρ）进样体积为50μL，样品运行时间为0.1min。
9.2.3.3 连续进样6次后，取出样品瓶，精密称定为W2，每针进样量=
（W1-W2）/6ρ,接受标准为49.0-51.0μL。
柱温准确度
9.2.4.1 温度范围由25℃上升至50℃。
9.2.4.2 升温幅度为5℃，并逐个测定，接受标准为偏差±1.5℃。 线性考察
9.2.5.1 配制0.025，0.035，0.05，0.07，0.1mg/ml五种浓度的Paracetamol,
以流动相为溶剂。
9.2.5.2 用C18色谱柱，流动相水：甲醇70：30（V/V）,流速为1.0ml/min，
进样量20μL，AUFS:1.0,于254nm处检测。
9.2.5.3 进样并记录各浓度样品的色谱峰面积。 9.2.5.4 Correction R≥0.9990。 进样线性考察
9.2.6.1 取Linearity Test项下0.025mg/ml Paracetamol溶液作为样品。 9.2.6.2 色谱条件同线性考察。
9.2.6.3 分别进样5，10，20，50μL，并记录各进样量的色谱峰面积。 9.2.6.4 Correction R≥0.9990。 GPV梯度考察
9.2.7.1 GPV梯度考察的准备：流速为2.0ml/min，设置ABCD通道各25%，
使通道A和B充满甲醇，通道C和D充满5.6mg/l对羟基苯甲酸丙酯的甲醇溶液。
9.2.7.2 流动相的脱气：将在线真空脱气装置设置为标准模式，运行在线真
空脱气装置至少15min。
9.2.7.3 不接色谱柱，将色谱柱以二通代替。 9.2.7.4 单击“仪器方法”，建立方法“GPV”，设定检测波长254nm，按下
表设置样品。 样品瓶 样品名称 功能 自定义 自定义 进样 Farmtec Research Co., Ltd. Page 6 of 7
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运行样品。
9.2.7.6 GPV梯度测试完成后，处理数据及报告。找出前四个峰中最高和
最低的峰，按下列公式计算结果：
Difference?100(Hh?H1)2?Hf
Hh是最高峰的峰高 Hl是最低峰的峰高
Hf是满刻度的峰高（最后一个峰）
9.3 所有校正数据填写在附表中。
9.4 如果校正完成并符合要求，校正人员按要求填写仪器校正说明书。
9.5 仪器校验说明书上应写明仪器编号，校验日期，再校日期，校验结果，由校验人
签字主管复核后，将最新的校验说明书粘贴于仪器表面，同时将上一次的校验说明书附在对应校正记录的背面。 9.6 如果未通过校正，应该做适当的调整，如果无法做调整，在它维修完成或购买新
的仪器之前不得使用。
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Document No.: Farmtec Research Co., Ltd. Version No.: 01 FQC01002 Page 1 of 1 Effective Date: 2009.09.20 Title: Waters高效液相(Waters e2695 2489 Emp2)使用维护和校正 附件3
仪器清洁保养记录表-Weekly
设备名称 财产编号 日期 确认项目 电源 仪器外表 泵 进样器 管路 打印机 废液处理 确认结果 型号 说明： 厂牌 操作者 主管 备注 仪器正常，在确认项目的相应空格处打勾“√”，如有异常，在确认项目的相应空格处打叉“ⅹ”，并在备注中写明异常。
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Waters HPLC（ ）年校正记录表
填表单位 厂 牌 Waters 型 号 NO e2695/2489/Empower2 校正日期 取得日期 2009年2月 放置位置 流速准确性考察 设定的流速 实测经过的时间 计算所得的流速 可接受的流速准确度 是/否合格 5.0 mL/min 1.0 mL/min 0.5 mL/min 5.0 ?0.06 mL/min 1.0 ? 0.012 mL/min 0.5 ? 0.006 mL/min 秒表计量编号： 计量有效期： 进样准确性考察 进样前样品瓶的重量(W1,mg) 六次进样后样品瓶的重量(W2,mg) 预设进样体积 平均进样体积 可接受的进样体积的范围 是/否合格 50 ?L 49.0-51.0 ?L 天平 仪器编号： 校正有效期： 称量记录（注明W1、W2）： 超纯水 产生仪器编号： 校正有效期： 柱温准确度考察 设定的温度(?C) 实测的温度(?C) 可接受的范围 操作者： 复核者： 25?C ? 1.5 ?C 日期 日期 30?C 35?C 40?C 是/否合格 45?C 50?C 温度计仪器编号： 计量有效期： Farmtec Research Co., Ltd. Page 1 of 1
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Waters HPLC（ ）年校正记录表
填表单位 厂 牌 Waters 品管课 型 号 NO e2695/2489/Empower2 校正日期 取得日期 2009年2月 放置位置 线性考察 线性考察溶液 浓度 (mg/mL) 峰面积 线性方程 相关系数R 可接受的范围 >0.9990 溶液1 0.025 溶液2 0.035 溶液3 0.05 溶液4 0.07 溶液5 0.1 是/否合格 Paracetamol 生产厂家： 批号： 有效期： 甲醇 生产厂家： 批号： 有效期： 水 产生仪器编号： 校正有效期： 天平 仪器编号： 校正有效期： 称量记录： 进样线性考察 (5, 10, 20, 和50 ?L) 进样体积 峰面积 线性方程 相关系数R 可接受的范围 >0.9990 5?L 10?L 是/否合格 20?L 50?L Paracetamol 生产厂家： 批号： 有效期： 甲醇 生产厂家： 批号： 有效期： 水 产生仪器编号： 校正有效期： 天平 仪器编号： 校正有效期： 称量记录： 操作者： 复核者： 日期 日期 Farmtec Research Co., Ltd. Page 1 of 2
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填表单位 厂 牌 取得日期 峰高 满刻度峰高 计算所得差异 可接受得差异 是/否合格 梯度表 Time 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 22.00 26.00 Flow 2.000 2.000 2.000 2.000 2.000 2.000 2.000 2.000 2.000 2.000 2.000 0.000 %A 50 90 50 90 50 0 50 0 50 0 50 50 %B 50 0 50 0 50 90 50 90 50 0 50 50 %C 0 10 0 0 0 10 0 0 0 50 0 0 %D 0 0 0 10 0 0 0 10 0 50 0 0 Waters 2009年2月 通道 A & C 品管课 型 号 放置位置 GPV梯度考察 通道 A & D ?0.5% 通道 B & C NO e2695/2489/Empower2 校正日期 通道 B & D Curve 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 对羟基苯甲酸丙酯 生产厂家： 批号： 有效期： 甲醇 生产厂家： 批号： 有效期： 天平 仪器编号： 校正有效期： 称量记录： 操作者： 日期 复核者： 日期 Farmtec Research Co., Ltd. Page 2 of 2
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CCR号码
版次 生效日期 修订内容摘要
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