四、采用PCR-SSP技术鉴定胎儿父亲的RHD基因型（生化实

验室做）

五、血清总胆汁酸（TBA）测定

【实验目的】掌握酶比色法血清总胆汁酸测定的原理和操作方法。

【实验原理】在3a-羟类固醇脱氢酶作用下，各种胆汁酸C3上a位的羟基脱氢形成羰基。同时NAD还原成NADH。随后，NADH上的氢有黄递酶催化转移给碘化硝基四氮唑蓝，产生红色的甲臜。甲臜的产量与总胆汁酸成正比，在500nm波长比色。 【实验器材】紫外可见分光光度计、水浴箱、试管、加样器 【实验试剂】

（1）试剂1:黄递酶1000U，NAD1mmol，碘化硝基四氮唑0.5mmol，丙酮酸50mmol溶于0.1mol/lPH7.5的磷酸缓冲液1L中，加表面活性剂适量。

（2）试剂2:3a-羟类固醇脱氢酶2000U溶于0.1mol/lPH7.5的磷酸缓冲液1L中。 （3）终止液：1mol/l盐酸 （4)50umol/l甘氨胆酸标准液 【实验标本】患者血清 【实验操作】 按下表进行操作 加入物（ml） 血清 标准液 试剂1 试剂2 去离子水 测定管 0.1 — 0.3 0.1 — 测定对照管 0.1 — 0.3 — 0.1 标准管 — 0.1 0.3 0.1 — 标准对照管 — 0.1 0.3 — 0.1 混匀，37摄氏度水浴10min，加终止液0.1ml，摇匀，500nm波长，以蒸馏水调零，读取各管A值。

计算：TBA=（A测定-A测定对照管）C标准/（A标准管-A标准对照管） 【注意事项】

（1）血清中还存在其他脱氢酶和还原性物质若不除去，测定结果会偏高；

（2）试剂中加入适量的表面活性剂可以防止甲臜沉淀； （3）测定前需去除血清中LD。 【参考文献】

[1] 费德红, 何凤琼, 颜永乾. 血清总胆汁酸在新生儿溶血患者肝损害中的临床观察[J]. 国际检验医学杂志 ISTIC, 2009, 30(1).

[2] 许叶, 杨昌国. 酶循环法测定血清总胆汁酸[J]. 临床检验杂志, 2002, 20(1): 11-12.

诊断：溶血性贫血伴有核黄疸

诊断依据：一般情况：产后5天胎患儿，皮肤发黄，嗜睡抽搐。

实验室检查：Hb：70g/L,血清游离胆红素359.8umol/L，母亲B型RhD阴性，婴儿B型RhD阳性，父亲B型RhD阳性，红细胞直接抗球蛋白试验阳性；婴儿血清中游离抗体检查阳性；婴儿红细胞抗体释放试验阳性；外周红细胞及血红蛋白减少，网织红细胞和有核红细胞增多。

新生儿溶血病(HDN)发病机制：新生儿溶血病(HDN)是由于母婴血型不合

而引起的同族血型免疫性疾病,可发生于胎儿和新生儿早期。胎儿由父亲方面遗传抗原而恰为母亲所缺少,此抗原侵入母体,刺激母体而产生免疫抗体,此抗体可经过胎盘进入胎儿血循环,胎儿红细胞与相应抗体结合而大量溶血造成贫血。

治疗原则

1、预防：对象：

有过ABO或Rh溶血;

ABO抗A和抗B效.价>64; Rh的IgG类抗体>8;

2、产前治疗：大剂量的丙球、血浆置换、 宫内输血、剖宫产

产后治疗：ABO溶血较轻一般治疗。 Rh 溶血重药物、光照疗法、换血疗法。抗-D免疫球蛋白的应用。 3、新生儿换血时血型选择：

（1）ABO溶血：用新鲜O型红细胞加AB血浆。

（2）Rh溶血ABO相容：Rh血型同母亲，ABO血型同婴儿。

（3）Rh合并ABO溶血：用Rh血型同母亲的新鲜O型细胞加AB血浆。