微生物检测方法

一．细菌总数的测定

1. 范围

用于检测样品中的细菌总数 2. 原理

细菌在其合适的生长环境下，迅速生长繁殖，每一个细菌形成一个肉眼可见的菌落，根据菌落数来计算每克（或每毫升）样品中细菌的数目。 3. 试剂 蛋白胨 4.

氯化钠 牛肉膏 琼脂 氢氧化钠 仪器

恒温培养箱：36±1℃ 恒温水浴箱：46±1℃ 天平 电炉

吸管：1ml和10ml 三角玻璃瓶：500ml 玻璃珠：直径为5mm 培养皿：皿底直径为9mm 试管：18×200mm 酒精灯 冰箱 试管架 摇床

灭菌刀或剪刀

干热灭菌箱 5. 操作步骤

5.1 检样稀释及培养

5.1.1以无菌操作，将检样25克（或25ml）剪碎于含有225ml灭菌生理盐水或其它稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预适量的玻璃珠），经充分振荡成10-1的均匀稀释液。

5.1.2用1ml吸管吸取10-1的稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，振匀成10-2的均匀稀释液。

5.1.3另取一支吸管，按以上操作顺序，作10倍递增稀释液。

5.1.4根据食品卫生要求或对样品污染情况的估计，选择2∽3个适宜稀释度，分别在作10倍稀释的同时，即以吸取该稀释液的吸管吸取1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。 5.1.5稀释液移入平皿后，应及时将凉至46 ℃的营养琼脂培养基注入平皿约15ml并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。 5.1.6待琼脂凝固后，翻转平皿，置36±1℃的恒温培养箱内培养24±2小时（或48±2小时）取出，计算平皿内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克或每毫升样品所含菌总数。 6. 菌落计数报告

选取菌落数在30∽300之间的平皿作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平皿，应采用其平均数。 稀释度的选择

6.2.1应选取菌落数在30∽300之间的菌落数进行报告。 6.2.2若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30∽300则视两者之比如何来决定，若其比值小于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中小的数字。

6.2.3若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则选稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告。

6.2.4若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应选则选稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。

6.2.5若所有稀释度均无菌生长，则以小于1，乘以最低稀释倍数报告。 6.2.6若所有稀释度的平均菌落数均不在30∽300之间，则以最接近30或300的平均菌落数报告。

6.3 计算：细菌数（每克或每毫升）＝平均菌落数乘以稀释倍数